一种分离测定卡格列净及其有关物质的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物分析方法领域，具体涉及一种采用高效液相色谱法分离测定降糖 药卡格列净及其有关物质的方法。
【背景技术】
[0002] 卡格列净为一种选择性钠-葡萄糖协同转运蛋白（SGLT)抑制剂，用于治疗成人II 型糖尿病。卡格列净通过对钠-葡萄糖协同转运蛋白选择性抑制作用，限制了大部分葡萄 糖在体内的重吸收，促使葡糖大量从尿中排出达到控制血糖水平的目的。由于尿糖增多，体 内减少了热卡，因而有明显减重作用。由于排钠增加使收缩压稍降，但血钠无明显改变。
[0003] 卡格列净的化学结构式如下：
其化学名为：（IS)-1，5-脱水-1-[3-[[5-(4-氟苯基）-2-噻吩基]甲基]-4-甲基苯 基]-D-葡萄糖醇。
[0004] 卡格列净为全合成化学药，反应过程中可能产生的副产物或残留的中间体会影响 其纯度和质量；在其储存过程中，也可能会因为温度、光照等环境因素而产生降解产物，也 会影响其纯度和质量，这些残留的中间体、副反应产物、降解产物就是通常药物质量控制中 所说的有关物质。
[0005] 卡格列净有两个结构已知有关物质，分别为杂质A和杂质B，它们的化学结构如 下：
目前，有关卡格列净及其组合物的有关物质测定方法未见报道，为保证卡格列净原料 药及其药物组合物的质量可控，以确保其有效性和安全性，亟需一种有效的检测方法，能够 分离测定卡格列净及其有关物质。本发明人经过大量的科学试验和测试条件的筛选，发现 一种快速分离测定卡格列净及其有关物质的方法，该方法可以有效控制了卡格列净的工艺 杂质和降解产物，保证了卡格列净原料药及其药物组合物的质量可控，从而完成了本发明。
[0006] 本发明人发现，已上市的卡格列净片剂，其药用辅料微晶纤维素、交联羧甲基纤维 素钠、硬脂酸镁等在本发明的方法中不会干扰测定卡格列净及其有关物质的测定。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种分离测定卡格列净及其有关物质的方法，该方法能将 卡格列净与其有关物质有效分离，准确检测卡格列净原料药和其药物组合物中有关物质， 从而保证卡格列净的质量控制，从而也确保了卡格列净药品的有效性和安全性。
[0008] 为实现本发明的目的，提供如下实施方案。
[0009] 在一实施方案中，本发明的一种分离测定卡格列净及其有关物质的方法，该方法 包括采用高效液相色谱法，以丁烷基硅烷键合硅胶填料柱为色谱柱，以乙腈为有机相与以 磷酸溶液或磷酸缓冲液为水相混合作为流动相，进行梯度洗脱，以紫外检测器进行检测。
[0010] 在上述实施方案中，本发明的方法，所述磷酸溶液或磷酸缓冲液的pH值为2~6， 优选为3. 5,其中，所述磷酸缓冲液为选自磷酸二氢钠、磷酸二氢钾和磷酸二氢铵中的磷酸 盐，用磷酸溶液调节pH值，水相中磷酸盐浓度为0~0. 005mol/L。
[0011] 在上述实施方案中，本发明的方法，水相与有机相的洗脱初始体积比为70 : 30~ 50 : 50,优选70 : 30,水相与有机相的洗脱终止体积比为30 : 70~15 : 85,优选 30 ： 70〇
[0012] 在上述实施方案中，本发明的方法，紫外检测波长为210nm~215nm或287nm~ 297nm，优选为 210 nm。
[0013] 在上述实施方案中，本发明的方法，进一步包括以下步骤： (1) 取卡格列净原料药或其药物组合物，加70%乙腈溶液使卡格列净完全溶解并稀释 定容，配制成每1ml溶液中含卡格列净0. 3~0. 7mg，优选0. 5mg,滤过，作为供试品溶液； (2) 以丁烷基硅烷键合硅胶色谱柱为色谱柱，流速为0. 8~I. 2ml/min，优选I. 0 ml/ min，柱温为25~35°C，优选25°C，波长为210nm~215nm或287nm~297nm，优选为210 nm ； (3) 取供试品溶液10~30 μ 1，优选20 μ 1，注入高效液相色谱仪； (4) 将水相ρΗ2~6的磷酸溶液或磷酸缓冲液与有机相乙腈以70 : 30~50 : 50 为初始体积比洗脱至主峰出来后，逐渐增大乙腈比例，至水相与有机相的体积比达到 30 : 70~15 : 85并保持20分钟，完成卡格列净有关物质的测定； 任选的，（5)待有关物质完全洗脱后，提高乙腈比例至95%，升高流速为2ml/min冲洗色 谱柱10分钟，再调整水相与乙腈比例为60 : 40,平衡色谱系统； (6)采用加校正因子的卡格列净自身对照法以峰面积计算卡格列净的纯度及有关物质 中各单一杂质含量及有关物质总量。
[0014] 在上述实施方案中，本发明的方法，步骤（4)中水相为pH2. 5的磷酸溶液或磷酸缓 冲液；水相与有机相的初始体积比为60 : 40,洗脱至主峰出来后，逐渐增大乙腈比例，至水 相与有机相的体积比达到30 : 70并保持20分钟，完成卡格列净有关物质的测定。
[0015] 在上述实施方案中，本发明的方法，所述梯度洗脱包括：0min至第14~20min时， 流动相中水相与有机相的体积比为55 : 45~65 : 35 ;第14~20min至第26~32min 时，水相与有机相的体积比匀速变化至30 : 70~40 : 60;第26~32min至第33~39min 时，水相与有机相的体积比匀速变化至25 : 75~35 : 65;第33~39min至第48~54min 时水相与有机相的体积比保持比例不变。
[0016] 在上述实施方案中，本发明的方法，优选的，所述梯度洗脱包括：0min至第16min 时，流动相中水相与有机相的体积比为60 : 40 ;第16min至第28min时，水相与有机相的 体积比匀速变化到35 : 65 ;第28min至第35min时，水相与有机相的体积比匀速变化到 30 : 70;第35min至第50min时水相与有机相的体积保持比例30 : 70不变。
[0017] 本发明所说的用高效液相色谱分离测定卡格列净及其有关物质的方法，具体其包 括以下步骤： (1)取卡格列净原料药或制剂，精密称定，加70%乙腈溶液适量使溶解，再用70%乙腈溶 液稀释制成每1ml中含卡格列净0. 5mg的溶液，必要时滤过，作为供试品溶液；另精密量取 供试品溶液lml，置100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
[0018] ( 2)取供试品溶液和对照溶液各20 μ 1，注入高效液相色谱仪，进行梯度洗脱。色谱 条件如下：选择以丁烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸溶液（取纯化水，用磷酸 调pH值至2~6)或磷酸盐缓冲液（0. 002mol/L磷酸二氢钠溶液，用磷酸调pH值至2~6) 作为流动相A，乙腈作为流动相B，进行梯度洗脱，柱温为：25~35°C;流速为0. 8~I. 2ml/ min检测波长为210~215nm或287~297nm。洗脱条件如下：0min至第14~20min时，流 动相中水相与有机相的体积比为55 : 45~65 : 35 ;第14~20min至第26~32min时， 水相与有机相的体积比匀速变化至30 : 70~40 : 60;第26~32min至第33~39min 时，水相与有机相的体积比匀速变化至25 : 75~35 : 65;第33~39min至第48~54min 时水相与有机相的体积比保持比例不变。此时已完成有关物质测定，记录色谱图。
[0019] (3)为了连续进样，设置一段冲洗色谱柱和平衡色谱系统过程，即第48~54min至 第60~66min时流动相A : B匀速变化60% : 40%，再保持13min完成冲洗和平衡过程。
[0020] 上述本发明所说的用高效液相色谱分离测定卡格列净及其有关物质的方法，优选 的，包括以下步骤： (1)取卡格列净原料药或制剂，精密称定，加70%乙腈溶液适量使溶解，再用70%乙腈溶 液稀释制成每1ml中含卡格列净0. 5mg的溶液，必要时滤过，作为供试品溶液；另精密量取 供试品溶液lml，置100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
[0021] (2)以丁烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（Inertsil-C4,4.6X250mm，5Mm)， 以磷酸溶液（取纯化水，用磷酸调pH值至3. 5)作为流动相A，乙腈作为流动相B，进行梯度 洗脱，柱温为：25°C;流速为l.Oml/min检测波长为210nm。洗脱条件如下：0min至第16min 时，流动相中水相与有机相的体积比为60 : 40 ;第16min至第28min时，水相与有机相的 体积比匀速变化到35 : 65 ;第28min至第35min时，水相与有机相的体积比匀速变化到 30 : 70;第35min至第50min时水相与有机相的体积保持比例30 : 70不变，记录色谱图。
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