质、化学部分或其组合（例如，磷酸化或糖基化 的多肽等）。本领域技术人员会理解该术语并不表示该分子在各种情况中是免疫原性的，但 仅仅表示其可被抗体靶向。
[0044] 抗体结合抗原上的"表位"。表位是抗原上被抗体识别并结合的局部位点。表位可 包括几个氨基酸或几个氨基酸的部分，例如，5或6个，或更多，例如20个或更多氨基酸，或 这些氨基酸的部分。在一些情况中，表位包括非蛋白质组分，例如，来自糖、核酸或脂质。在 一些情况中，表位是三维部分。因此，例如，在靶标是蛋白质的情况中，该表位可由连续氨基 酸、或来自蛋白质的不同部分的氨基酸组成，这些部分通过蛋白质折叠靠近（例如，不连续 表位）。这对于形成三维结构的其它类型的目标分子也是一样的。表位通常包含在独特空间 构象中的至少3个或更常见的至少5个或8-10个氨基酸。确定表位空间构象的方法包括， 例如X-射线晶体法和二维核磁共振。参见，例如Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology (《分子生物学方法中的表位作图方案》），卷66，Glenn E. Morris编 (1996)〇
[0045] 术语"对……有特异性"、"特异性结合"和类似术语指分子（例如，抗体或抗体片 段）与其靶标的结合亲和性比非靶标化合物高至少2倍，例如至少4倍、5倍、6倍、7倍、8 倍、9倍、10倍、20倍、25倍、50倍或100倍中的任意情况。例如，特异性结合给定抗体靶标 的抗体通常以与非抗体靶标相比高至少2倍的亲和性结合抗体靶标。可使用标准方法来 确定特异性，例如固相ELISA免疫试验（参见，例如，Harlow和Lane，Using Antibodies，A Laboratory Manual (《抗体使用实验室手册》）（1998)，描述可用于确定特异性免疫反应性 的免疫试验模式和条件）。
[0046] 相对于抗体靶标（例如，抗原、分析物）的术语"结合"一般表示抗体与纯群体中 的大多数抗体靶标结合（假定合适的摩尔比）。例如，结合给定抗体靶标的抗体一般结合溶 液中至少 2/3 的抗体靶标（例如，至少 75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96 %、97 %、98 %、99 %或100 %中的任意情况）。本领域技术人员应理解，取决于测定结合 的方法和/或阈值，可出现一些变化。
[0047] 术语"标记物"、"可检测标记物"、"可检测部分"和类似术语指可通过光谱、光化 学、生物化学、免疫化学、化学或其它物理手段检测的组合物。例如，可用的标签包括荧光染 料（荧光团）、发光剂、高电子密度试剂、酶（例如，ELISA中常用）、生物素、地高辛、32P和其 它同位素、半抗原、以及可被检测的蛋白质（例如通过将放射性标签整合至肽中或或用于 检测与肽特异性反应的抗体）。该术语包括单一标记试剂的组合，例如，提供独特可检测特 征（例如，特定波长或波长组合下）的荧光团的组合。可以采用本领域已知的用于将标签 偶联到需要的试剂的任何方法，例如，使用如下文献中所述的方法：Hermanson，《生物偶联 技术》(Bioconiugate Techniques) 1996,圣迭戈的学术出版社有限公司（Academic Press， Inc.) 〇
[0048] 当指代结果或信号时，术语"阳性"表示在样品中检测到分析物或物项的存在。当 指代结果或信号时，术语"阴性"表示在样品中检测到分析物或物项不存在。一般通过与 至少一种对照物比较来确定阳性和阴性，所述对照物例如，样品确定为阳性或阴性对照物 (例如，已知空白）所需要的阈值水平。
[0049] "对照"样品或值是指用作参比，通常是已知参比的样品，其用于与测试样品比较。 例如，测试样品可取自测试条件，例如，在测试化合物存在下，并且与来自已知条件的样品 比较，例如，在没有测试化合物的条件下（阴性对照物），或存在已知化合物的条件下（阳性 对照物）。对照物也可代表从多个测试或结果中收集的平均值。本领域技术人员会认识到 可设计对照物来评价任意数量的参数，并且会理解那些对照物在给定情况下是有价值的并 且能够基于与对照值的比较来分析数据。也可评估对照物来确定数据的显著性。例如，如 果给定的参数在对照物中是变化的，则不认为测试样品中的变化是显著的。
[0050] "校准对照物"与阳性对照物类似，在于其包含已知量的已知分析物。在多重试验 的情况中，可设计校准对照物以包含已知量的多种已知分析物。可在最小截止量处设定校 准对照物中分析物的量，例如，使得较高的量会被认为对于分析物是"阳性"的，而较低的量 会被认为对于分析物是"阴性"的。在一些情况中，可使用多水平校准对照物，使得可更精 确地确定分析物量的范围。例如，试验可包括已知低和高的量，或已知最小、中间和最大量 的校准对照物。
[0051] 术语"诊断"是指对象患有感染、病症或疾病的相对概率。类似地，术语"预后"是 指对象中可能出现特定未来结果的相对概率。例如，在本发明的内容中，预后可以指个体在 未来会受到感染的可能性（例如，如果免疫则不太可能）。术语并不是绝对的，如医学诊断 领域的任意技术人员所理解。
[0052] "对象"、"患者"、"个体"和类似术语可互换使用并指代，除非另外说明，哺乳动物如 人和非人灵长类，以及兔、大鼠、小鼠、山羊、猪和其它哺乳动物物种。该术语并不必然表示 对象已经诊断患有特定疾病，但一般指代处于医务监督下的个体。患者可以是寻求治疗、监 测、调节或改进现有治疗方案等的个体。
[0053] C.多重试验
[0054] 本发明所述的试验包括单一试验中检测超过一种分析物，并因此描述为多重试 验。本文所述的试验包括用于在可区分的固体支持物上固定多种分析物，使得多种分析物 各自可被流式细胞术鉴定和定量的组分。试验组分和考量包括固体支持物和如何互相区分 不同类型的固体支持物（例如，标记物和其它分化参数）、特异性固定所需分析物并去除其 它样品材料的组分、和用于检测和定量所需分析物的标记物。
[0055] 本文所述的多重试验包括使用固体支持物，一般是颗粒（也称为微粒或珠）。为了 通过流式细胞术进行检测，应该避免发出自发荧光的颗粒，因为这会增加背景信号，因而它 们合适。通过标准乳液聚合从多种起始单体产生的颗粒一般显示出低自发荧光，而已经修 饰以增加孔隙率（"大孔"颗粒）的那些颗粒显示高自发荧光。这类颗粒中的自发荧光随 着尺寸和二乙烯基苯单体百分比的增加而增加。
[0056] 在这些限制内，微粒的尺寸范围可变化而粒径范围不重要。在大多数情况中，在粒 径上，微粒的聚集尺寸范围在约0. 3微米至约100微米的范围内，例如，在约0. 5微米至约 40微米的范围内。
[0057] 本领域中通常使用磁性颗粒，并且可对于本文所述的试验更方便地进行分离和洗 涤步骤。"磁性颗粒"、"磁力响应性材料"、"磁珠"等术语表示响应磁场的材料。磁力响应性 材料包括顺磁性材料（例如铁、镍和钴，以及金属氧化物，如Fe304、BaFe120 19、C〇0、Ni0、Mn203、 Cr203和CoMnP)、铁磁性材料、亚铁磁性材料和变磁性材料。磁力响应性材料并非组成完整 微粒，而是一般组成微粒的一个组分，而其余由聚合材料组成，其可以经化学衍生化以允许 试验试剂（例如，抗原或抗体）连接。
[0058] 作为试验的一部分，施加并移去磁场的方法和仪器是本领域技术人员已知的 并且在文献中报道。文献报道的示例是Forrest等，US 4，141，687;Ithakissios，US 4, 115,534 ;Vlieger 等，Analytical Biochemistry 205 ： 1-7(1992) ；Dudley, Journal of Clinical Immunoassay 14:77-82(1991);和 Smart， Journal of Clinical Immunoassay 15 :246-251(1992)。
[0059] 形成微粒的聚合基质可以是与本文所述的试验相容的任意材料。该基质应该对于 生物样品的组分和试验试剂是惰性的，具有最小的自发荧光，在试验中使用的样品和任何 其它试剂或洗涤中是固态且不溶，并且能够将试验试剂固定于微球。合适的聚合物的示例 是聚酯、聚醚、聚烯烃、聚环氧烷、聚酰胺、聚氨酯、多糖、纤维素和聚异戊二烯。许多聚合物 中可使用交联来赋予微粒结构完整性和刚性。
[0060] 用于连接试验试剂（例如，抗原或抗体）的官能团可通过常规手段整合到聚合物 结构中。合适的官能团的示例是胺基团、铵基团、羟基、羧酸基团和异氰酸酯基团。试验试 剂一般通过例如连接基团与固相表面直接或间接共价结合。连接基团可用作增加固相表面 上反应性基团的密度并降低空间位阻以增加试验的范围和灵敏度的手段，或者用作增加向 固相表面增加特定类型的反应性基团以拓宽可与固相固定的试验试剂类型范围的手段。合 适的可用连接基团的示例是聚赖氨酸、聚天冬氨酸、聚谷氨酸和聚精氨酸。
[0061] 多重试验中不同类型的微粒可通过例如尺寸、重量、光散射或吸收、或标记物（例 如，荧光标记物）互相区分。
[0062] 在使用微粒尺寸作为分化因子（区分特性）的情况中，选择尺寸子范围的宽度和 相邻子范围的平均直径之间的间隔以允许通过流式细胞术区分不同类型的微粒，这在流式 细胞术的应用和说明之下对于本领域技术人员而言是明显的。一般而言，给定平均直径的 子范围是平均直径的约±5% CV或更小，其中CV是变异系数并定义为颗粒直径的标准偏差 除以平均颗粒直径再乘以100%。不同类型颗粒的子范围的平均直径一般由子范围之一的 平均直径的至少约6%隔开，例如，子范围之一的平均直径的至少约8%或10%。
[0063] 光散射也可用于区分不同类型的微粒。侧角光散射随着颗粒尺寸、粒度、吸光度和 表面粗糙度变化，而