一种测定多西他赛或紫杉醇的高效液相色谱-三重四级杆质谱联用方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物分析领域，涉及一种测定多西他赛或紫杉醇的方法。更具体而言， 涉及一种基于高效液相色谱-三重四级杆质谱联用(液-质联用)技术定量分析多西他赛或 紫杉醇的方法。
【背景技术】
[0002] 多西他赛和紫杉醇为紫杉烷类抗癌药物，是一类从短叶紫杉树皮中提取的天然产 物，临床用于治疗乳腺癌、非小细胞肺癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌以及头颈癌等 [1<]。其作用机 制为通过与肿瘤细胞的微管蛋白结合，促进微管蛋白形成稳定的微管，同时抑制其解聚，阻 断细胞有丝分裂，对肿瘤细胞产生抑制和杀伤作用 [3]。
[0003]根据文献查阅结果，生物样品中多西他赛和紫杉醇的定量分析方法研究常用高效 液相色谱法分离目标化合物后在紫外检测器上进行定量+ 6]。近年来，灵敏特异的液-质联 用分析技术也越来越多地应用到紫杉烷类抗癌药物的定量中，成为快速分离和鉴定的有力 手段 [M1]。文献报道的测定生物样品中多西他赛和紫杉醇含量的方法中，均采用电喷雾正 离子(ESI+)电离模式，通过检测[M+H]+或[M+Na]+的准分子离子峰4特征性子离子的离子传 输通道，实现基于液-质联用技术的定量分析。文献中未见采用ESI(-)或APCI(-)电离模式 对紫衫烷类化合物进行定量分析的方法，这可能与该类化合物在负离子检测模式下不易形 成去质子化的[Μ-ΗΓ峰有关。
[0004]然而，基于液-质联用技术的定量分析也存在一些问题，如:基质效应和加合离子 的形成。ESI( + )电离模式的液-质联用检测中，某些化合物容易形成多种加合离子，且丰度 很高。紫杉烷类抗癌药物由于其结构上含有多个可被氧化的基团（结构参见下文），在ESI (+ )电离模式下，容易与碱金属离子产生加合的准分子离子峰(如：[M+Na]+和[M+K]+等）。质 谱图上表现为多种离子化形式并存的情况，导致检测灵敏度和重现性的下降。因此，形成信 号强且重现性好的单一离子化形式是最为理想的结果。由于钠广泛存在于玻璃或不锈钢等 实验器具，化合物或试剂中也有含钠的杂质，为了避免在离子化过程中形成钠的加合离子 而完全去除实验体系中的钠并非易事。文献报道 [12]通过在流动相中添加伯胺的方法促进 单一离子的形成;或通过加入可与碱金属离子形成螯合物的特殊试剂(如冠醚类化合物)来 减少[M+Na]+的形成[13]。然而伯胺类化合物的碱性极强，可能会造成色谱柱填料的劣化和紫 杉烷类化合物的降解。
[0005]
[0006] 紫杉烷类抗癌药物的[M+Na]+准分子离子峰可在ESI( + )电离模式下产生特征性的 子离子碎片，使二级质谱检测成为可能。但[M+Na]+的准分子离子峰打碎效率低，且ESI( + ) 电离模式下该类化合物可产生除[M+Na]+峰以外的多种离子化形式，不利于液-质联用定量 分析。此外，选择[M+Na]+峰进行测定时还可能受到样品或环境中的钠离子浓度变化的影 响，使测定结果产生误差。M〇rtier[14]等采用向流动相中加入非挥发性的试剂，如乙酸钠的 方法对检测体系中的钠离子浓度进行控制，使待测化合物形成稳定、单一的[M+Na]+准分子 离子峰。范亚新[15]等探索了加入金属离子的液相色谱-串联质谱联用方法，通过向液相流 动相中加入碳酸锂试剂，在ESI( +)电离模式下利用紫杉醇的锂加合离子进行检测。但非挥 发性试剂可能对质谱检测仪造成污染。且加入锂离子后虽然[M+Li]+峰成为基峰，[M+Na]+峰 得到了一定程度的抑制，但质谱图上多种离子化形式并存的情况依然存在，[M+Na]+峰信号 强度约为基峰信号的50%，另可观察到[M+K]1$[15]。
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【发明内容】
[0023]本发明旨在针对多西他赛或紫杉醇在质谱检测ESI( + )电离模式下易形成[M+Na] +等碱金属加合的准分子离子峰，造成多种离子化形式并存，影响