一种同型半胱氨酸的检测方法及设备的制造方法_2

文档序号:9726199阅读:来源:国知局
所示,同型半脫氨酸专用检测仪,包括嵌入式微型处理器主板、控制电路、 键盘、液晶显示屏、热敏打印机、光电测量组件;所述光电测量组件设有一个L邸发光管和 一个可W放置500uL离必管的测量孔,LED发光管和测量孔之间设有一片中必波长为670nm 的激发滤光片,激发滤光片与测量孔之间设有一组凸透镜,在与由L邸发光管和测量孔中 必构成的光路直线垂直位置,设有一个光电感应器,光电感应器和测量孔之间设有一片中 必波长为710nm的英光滤光片,英光滤光片与测量孔之间设有一组凸透镜。
[0025] 同型半脫氨酸的检测方法,先向经过离必处理的血清样本中加入还原剂(试剂1) 将氧化态的同型半脫氨酸还原,再加入基因重组酶(试剂2)将同型半脫氨酸分解,再加入 英光显色剂(试剂3)与基因重组酶分解所形成的产物进行反应,再吸取一定量的反应液加 入到离必管中,将离必管放置到专用检测仪的光电测量组件中,通过测定离必管的英光值 变化,并与标准曲线进行比较计算,最终测定样品中的同型半脫氨酸浓度值。可W通过线性 回归算法得到"浓度-英光强度"标准曲线,其计算公式如下:
标准曲线y = bx+a 其中y为浓度,X为英光强度 基因重组酶(试剂2)采用冻干方式单人份储存,操作方便,试剂损耗小,降低检测成 本。
[0026] 本实施例还提供了一种同型半脫氨酸aHCY)专用定量检测试剂盒。
[0027] (-)试剂盒组成,试剂组成含量数量: 1标准品S1-S5 ;浓度分别为0, 10, 20, 40, 60uM,0. 2ml/管5管 2 Tris,缓冲 1 ;50 ml/ 瓶 1 瓶 3缓冲液2 ;5ml/瓶1瓶 4试剂1 ;0. 6 ml/管1管 5试剂2:11 ml/瓶1瓶 6试剂3 ;6 ml/瓶1瓶 7低质控对照品(8-12UM) 0. 2 ml/管1管 8高质控对照品(17-23uM)0. 2 ml/管1管 9 HCY酶冻干粉1ml/瓶5瓶 10、附件;500ul离必管、96孔稀释板、5ml塑料管 (二)试剂使用前准备 2. 1所有试剂使用前需要回温到25-28°C。
[002引 2. 2分析反应液;配制比例:取5ml缓冲液1+ 36ul试剂1混合均匀。
[002引 2. 3配置工作浓度酵素酶:取1. 0ml缓冲液2加到Enzyme (酶干粉)玻璃瓶中溶 解,充分混合均匀,即可使用。
[0030] (H)操作和检测步骤 3. 1每次实验都W试剂盒中同一批号标准品作标准曲线,W确保试验数据的准确性。
[0031] 3. 2先将96孔稀释板标示测试组和空白对照组,分别加入各组标准品和样品。
[0032] 3. 3每个反应的孔洞,分别加入170ul分析反应液于孔洞混合均匀,放置于37°C, 20分钟。
[0033] 3. 4加30ul的工作浓度酵素酶于测试组孔洞中;加30ul分析反应液于空白对照 组孔洞中,混合均匀,并放置于避光处,37 °C,5分钟。
[0034] 3. 5加入5 Oul的试剂2于每个孔洞中(测试组和空白组),混合均匀,放置于 避光处,37°C,1分钟。
[0035] 3. 6加入3 Oul的试剂3于每个孔洞中(测试组和空白组),混合均匀,放置于 避光处3 7 °C,10分钟。
[0036] 3. 7将稀释板中的标准品、样品分别吸到相对应的0. 5ml离必管中,并将离必管放 入专用检测仪的测量孔中,按检测仪的检测键开始检测,检测完成后检测仪将检测结果自 动显示在显示屏上,并根据需要通过打印机打印输出检测报告。
[0037] 上面结合优选实施方式对本发明作了详细说明,但是本发明不限于上述实施方 式,在本领域普通技术人员所具备的知识范围内,还可W在不脱离本发明宗旨的前提下做 出各种变化。
[003引不脱离本发明的构思和范围可W做出许多其他改变和改型。应当理解,本发明不 限于特定的实施方式,本发明的范围由所附权利要求限定。
【主权项】
1. 一种同型半胱氨酸的检测方法,其特征在于,包括如下步骤: 先在经过离心处理的血清样本中加入还原剂以将血清中的同型半胱氨酸还原; 在从步骤(1)产生的混合物中加入基因重组酶将同型半胱氨酸分解; 将步骤(2)所得的产物转移到离心管中,再向离心管中加入荧光显色剂,接着将离心管 放到专用检测设备上,通过测定离心管的荧光值变化,并与标准曲线进行比较,最终计算出 血清样品中的同型半胱氨酸的浓度值。2. 根据权利要求1所述的同型半胱氨酸的检测方法,其特征在于,所述荧光显色剂的 激发波长为650nm,其激发的突光波长为710nm。3. 权利要求1或2中所述的专用检测设备,其特征在于,它包括主控板、光源、激发滤光 片、聚光透镜、测量孔、发射滤光片、光接收器, 所述主控板与光源电连接,该光源、激发滤光片、第一聚光透镜、测量孔的中心依次排 列在一条直线上,测量孔、第二聚光透镜、发射滤光片和光接收器的中心依次排列在另一条 直线上,所述两条直线相互垂直。4. 根据权利要求3所述的专用检测设备,其特征在于,所述主控板还连接有热敏打印 机,PC或液晶显示屏。5. 根据权利要求3所述的专用检测设备,其特征在于,所述光源为LED灯。6. 根据权利要求3所述的专用检测设备,其特征在于,所述聚光透镜包括凸透镜组。7. 根据权利要求3所述的专用检测设备,其特征在于,所述测量孔上设置有标准离心 管或比色杯。8. -种同型半胱氨酸的检测试剂盒,其特征在于,它包括标准试剂、缓冲液、还原剂、基 因重组酶、荧光显色剂和对照品。
【专利摘要】本发明公开了一种同型半胱氨酸的检测方法,包括如下步骤:(1)先在经过离心处理的血清样本中加入还原剂以将血清中的同型半胱氨酸还原;(2)在从步骤(1)产生的混合物中加入基因重组酶将同型半胱氨酸分解;(3)将步骤(2)所得的产物转移到离心管中,再向离心管中加入荧光显色剂,接着将离心管放到专用检测设备上,通过测定离心管的荧光值变化,并与标准曲线进行比较,最终计算出血清样品中的同型半胱氨酸的浓度值。还提供与上述方法相应的检测设备和试剂盒。其用荧光散射法替代了原有的透射比色法,避免了透射比色法中反应液产生的杂散光干扰,降低了背景噪声,提高了光电测量系统的信噪比,提高了检测灵敏度。
【IPC分类】G01N21/64
【公开号】CN105486666
【申请号】CN201410479966
【发明人】施颖, 颜佳森
【申请人】苏州贝和医疗科技有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年9月19日
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