一种同型半胱氨酸的检测方法及设备的制造方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种适合中小医院和大医院的专科使用的同型半脫氨酸的检测方法、 设备及试剂盒。
【背景技术】
[0002] 上世纪六十年代末，Me化lly从病理上发现高脫氨酸尿症和脫硫離尿症患者早期 即可发生全身动脉粥样硬化和血栓形成，走十年代初他又通过动物模型证实同型半脫氨酸 血中蓄积可导致类似血管损害。由于同型半脫氨酸检测技术的发展，对其研究逐渐深入，近 年来的研究表明同型半脫氨酸可W作为判断必血管疾病危险性的独立危险因素，并认为与 传统的指标相比，同型半脫氨酸具有更高的应用价值。
[0003] 血浆中的同型半脫氨酸约70%与白蛋白结合，为结合型。其余的游离型则主要W 二硫同型半脫氨酸和W二硫键结合的同型半脫氨酸-半脫氨酸化合物形式存在，只有少量 W还原型同型半脫氨酸存在于血浆中，还原型仅占2%，我们通常所指的是总的同型半脫氨 酸浓度。
[0004] 现有同型半脫氨酸的检测方法： 目前，同型半脫氨酸最主要的两种检测方法是高效液相（HPLC)方法W及英光偏振免疫 检测（FPLA)方法，也有采用酶联免疫技术测定同型半脫氨酸的报道。
[0005] (1)高效液相色谱法（HPLC) HPLC的基本分析原理；先使用还原剂使血样中所有形式的Hey转变成还原形式，然后 与英光试剂进行衍生生成化y-英光物质复合物，将衍生后的样品进行色谱分析。因色谱固 定相对不同物质的吸附力不同，因此流动相将其洗脱下来的次序也不同，根据送一原理将 样品中的不同物质分开，W英光检测器检测洗脱下化y-英光物质复合物的英光强度，将其 与标准品/内标的比值进行比较和计算，就可W测定血总Hey的水平。
[0006] (2)英光偏振免疫检测法（FPIA) 基本分析原理：样品中游离Η巧和抗单克隆抗体相结合的Hey的英光偏振强度不同，将 样品、标准品与标抗体竞争结合，采用竞争结合的原理制作出hey浓度与英光偏振强度的 标准曲线，在标准曲线上就可W查出其化y的浓度。FPIA法灵敏度高，检测速度快，但价格 昂贵，故短时间期内不易普及。
[0007] (3)酶免疫分析法 基本分析原理：先使用酶将血样中所有形式的Hey转变成S-腺巧-L-Hcy，然后加入 酶标的抗S-腺巧-L-Hcy的单克隆或多克隆抗体，采用竞争结合的原理，将不同水平的标准 品与酶标抗体竞争结合，然后W显色试剂和终止试剂分别进行显色和终止，制作出hey浓 度与发色强度的标准曲线。样品也按相同步骤处理，在标准曲线上就可W查出其化y的浓 度。送是目前临床上测定同型半脫氨酸水平的常用方法，但是存在操作繁琐，检测耗时，偏 差较大等缺点。
[000引 （4)毛细电泳法 基本分析原理：先使用还原剂使血样中所有形式的Hey转变成还原形式，然后与英光 试剂进行衍生生成化y-英光物质复合物，将衍生后的样品进行毛细电泳分析。将样品放 置于10千伏左右的高压电场中，因为各种物质所带电荷不同，其等电点也不相同，因此其 在电场中的迁移速度也就不同，根据送一原理可将Hey与样品中的其它物质分开，再W英 光检测器检测化y-英光物质复合物的英光强度，将其与标准品/内标的比值进行比较和计 算，就可W测定总Hey的水平。
[0009] 与传统的反相高效液相色谱相比，高效毛细血管电泳是近年来发展的一项高效分 离、分析技术，主要用于实验研究，有在临床使用的报道。其缺点是与色谱方法相似，存在操 作复杂、试验耗时较长和试验数据变异比较大。
[0010] 妨透射比色法 检测原理；使用酶转换法定量血浆中同型半脫氨酸的总浓度，不需要加入抗体进行反 应。首先W还原剂将氧化态的同型半脫氨酸还原，再W基因重组酶将同型半脫氨酸分解。基 因重组酶分解所形成之产物与适当呈色剂反应后之产物可于660nm波长下测定其0D值 变化，该0D值变化与同型半脫氨酸浓度为线性关系。送是目前在临床检验领域中应用最 为广泛的方法，但是透射比色法检测时光源和光电感应器在同一直线光路上，容易受到样 品基质和其他物质的干扰，对检测灵敏度和检测数据的准确性都会产生影响。
【发明内容】
[0011] 针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种血液中同型半脫氨酸的检测方法 与仪器，克服现有检测方法和产品的不足，能够快速、准确、方便的测定标本中同型半脫氨 酸的浓度。
[0012] 为实现上述目的，本发明采用了如下技术方案： 一种同型半脫氨酸的检测方法，包括如下步骤： (1) 先在经过离必处理的血清样本中加入还原剂W将血清中的同型半脫氨酸还原； (2) 在从步骤（1)产生的混合物中加入基因重组酶将同型半脫氨酸分解； (3) 将步骤（2)所得的产物转移到离必管中，再向离必管中加入英光显色剂，接着将离 必管放到专用检测设备上，通过测定离必管的英光值变化，并与标准曲线进行比较，最终计 算出血清样品中的同型半脫氨酸的浓度值。
[0013] 作为上述方案的进一步优化，所述英光显色剂的激发波长为650nm，其激发的英光 波长为710皿。
[0014] 本发明还提出了上述检测方法的专用检测设备，它包括主控板、光源、激发滤光 片、聚光透镜、测量孔、发射滤光片、光接收器，所述主控板与光源电连接，该光源、激发滤光 片、第一聚光透镜、测量孔的中必依次排列在一条直线上，测量孔、第二聚光透镜、发射滤光 片和光接收器的中必依次排列在另一条直线上。
[0015] 进一步地，所述主控板还连接有热敏打印机，PC或液晶显示屏。
[0016] 进一步地，所述光源为L邸灯。
[0017] 进一步地，所述聚光透镜包括凸透镜组。
[0018] 进一步地，所述测量孔上设置有标准离必管或比色杯。
[0019] 进一步地，所述两条直线相互垂直。
[0020] 作为本发明的另一个方面，本发明还提供了同型半脫氨酸的检测试剂盒，它包括 标准试剂、缓冲液、还原剂、英光显色剂、对照品和半脫氨酸酶。
[0021] 本发明的有益效果主要表现为；通过对现有测量方法中显色剂和测量装置的改 进，用英光散射法替代了原有的透射比色法，避免了透射比色法中反应液产生的杂散光干 扰，降低了背景噪声，提高了光电测量系统的信噪比，提高了检测灵敏度；采用专用检测仪 可W简化操作步骤，提高检测速度。
【附图说明】
[0022] 图1是本发明中的检测设备的内部原理结构示意图。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合附图和优选实施例对本发明作更为具体的描述。
[0024] 如图1