.6mm X 250mm或4.6mm X 150mm。
[0036] 步骤(2)所述的高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱检测中，高效液相色谱法较佳 地使用梯度洗脱的方法，流动相A为乙腊和甲酸的混合液，流动相B为水和甲酸的混合液。所 述流动相A中，所述甲酸的用量较佳地为流动相A总体积的0.05~0.1 %，更佳地为流动相A 总体积的0.1%。所述流动相B中，所述甲酸的用量较佳地为流动相B总体积的0.05~0.1%， 更佳地为流动相B总体积的0.1 %。
[0037] 其中，较佳地，所述流动相A和所述流动相B的梯度洗脱条件如表2所示：
[00；3引 表2
[0039]
[0040] 其中，百分比为各组分分别占流动相A和流动相B总体积的体积百分比。
[0041] 步骤(2)所述的高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱检测中，高效液相色谱法检测 的柱溫较佳地为25~35°C，更佳地为30°C。
[0042] 步骤(2)所述的高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱检测中，所述的高效液相色谱 法检测的所述待测样品的流速较佳地为0.6~1.5mL/min，更佳地为ImL/min。
[0043] 步骤(2)所述的高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱检测中，所述阿莫西林的高效 液相色谱法检测的检测波长较佳地为228nm。所述青霉素 G的高效液相色谱法检测的检测波 长较佳地为225nm。所述青霉素 V的高效液相色谱法检测的检测波长较佳地为268nm。
[0044] 步骤(2)所述的高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱检测中，高效液相色谱法检测 的进样体积较佳地为15~2如L，更佳地为20yL。
[0045] 步骤(2)所述的高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱检测中，质谱检测的条件较佳 地为：
[0046] 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压如表3所示：
[0047] 表 3 [004引
[0049]离子源:电喷雾离子源；
[0050]扫描模式:正离子模式；
[0化1] 毛细管电压:3500伏；
[0化2] 离子源溫度12(TC;
[0化3] 去溶剂溫度：55(TC;
[0054] 检巧巧式:多反应监^U(MRM)。
[0055] 在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实 例。
[0056] 本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0057] 本发明的积极进步效果在于：
[005引本发明的预处理方法快速、简单、经济、可靠，能够有效地提取出待测组分，去除复 杂基质影响，有益于待测样品的快速检测。而且在保持较高提取率的同时，节约了有机溶剂 的使用、排放和损失，有利于环境保护，节约了预处理步骤、时间和能耗，具有较强的应用价 值。
[0059] 本发明的检测方法可用于检测阿莫西林、青霉素 G和青霉素 V中的一种或多种，且 检测方法快速，简单，精密度高，准确性高。
【附图说明】
[0060] 图1为实施例1中高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱化C-MS/MS)检测阿莫西林标 准物质的多反应监巧U(MRM)色谱图。
[0061] 图2为实施例1中高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱化C-MS/MS)检测青霉素 G标 准物质的多反应监巧U(MRM)色谱图。
[0062] 图3为实施例1中高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱化C-MS/MS)检测青霉素 V标 准物质的多反应监巧U(MRM)色谱图。
[0063] 图4为实施例2中高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱化C-MS/MS)检测待测样品B 的多反应监测(MRM)色谱图。
[0064] 图5为实施例2中高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱化C-MS/MS)检测待测样品A 的多反应监测(MRM)色谱图。
【具体实施方式】
[0065] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商 品说明书选择。
[0066] 实施例1
[0067] 标准曲线的制备：
[0068] 称取阿莫西林、青霉素 G和青霉素 V标准物质各10mg(精确到0.1mg)，W乙腊配制成 浓度1000.0 mg/Kg的单标储备溶液，所有溶液于4°C避光储存。使用前移取适量标准溶液，W 空白样品提取液逐级稀释成混合标准工作溶液，混合标准工作溶液中，阿莫西林、青霉素 G 和青霉素 V 的浓度分别均为 4yg/Kg、5yg/Kg、10yg/Kg、30yg/Kg、20yg/Kg、40yg/Kg、10化邑/ Kg、140yg/Kg和200yg/Kg。进样进行高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱(LC-MS/MS)检测， 制得标准曲线。
[0069] 高效液相色谱法检测的条件为：
[0070] 色谱柱：Water xselect 打8 column(4.6mmX250mm);
[0071] 柱溫：30。。
[0072] 流速：lmL/min;
[0073] 进样体积
[0074] 流动相A:乙腊和甲酸的混合液，甲酸的用量为混合液总体积的0.1 % ;
[0075] 流动相B:水和甲酸的混合液，甲酸的用量为混合液总体积的0.1 % ;
[0076] 阿莫西林的检测波长：228nm;青霉素 G的检测波长：225nm;青霉素 V的检测波长： 268nm;
[0077] 梯度洗脱条件见表2:
[0078] 表 2 Γ00791
[0080] 其中，百分比为各组分分别占流动相A和流动相B总体积的体积百分比。
[0081] 质谱检测的条件为：
[0082] 离子源:电喷雾离子源；
[0083] 扫描模式:正离子模式；
[0084] 毛细管电压:3500伏；
[00化]离子源溫度：120 Γ;
[00化]去溶剂溫度：550 Γ;
[0087] 检ii方式:多反应监ii(MRM);
[0088] 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压如表3所示：
[0089] 表3
[0090]
[0091]
[0092] 检测结果：图1为高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱化C-MS/MS)检测阿莫西林标 准物质的多反应监测(MRM)色谱图。图2为高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱化C-MS/MS) 检测青霉素 G标准物质的多反应监测(MRM)色谱图。图3为高效液相色谱-电喷雾串联二级质 谱(LC-MS/MS)检测青霉素 V标准物质的多反应监测(MRM)色谱图。
[0093] 测定图1、图2和图3的峰面积，W浓度X(yg/Kg)为横坐标，峰面积Y为纵坐标，分别 绘制阿莫西林、青霉素 G和青霉素 V的混合标准溶液工作曲线，得标准曲线方程及其相关系 数，如表4所示。
[0094] 表 4
[0095]
[0096] 实施例2
[0097] 1、待测样品的预处理
[0098] (1)分别称取lg(精确至O.Olg)原料牛乳(此为空白样品，不含Ξ种待测组分)作为 样品A和样品B，置于lOmL聚丙締离屯、管中。样品A中加入实施例1的20yg/Kg混合标准溶液 (最终定容后浓度），混匀，作为待测样品A。样品B不做任何处理，作为待测样品B。待测样品A 和待测样品B均进行如下处理:加入0.2%甲酸、4mL乙腊，旋满震荡3min，W5000巧m的速度 离屯、5min，移取上清液至lOmL容量瓶中；再向待测样品中加入0.2%甲酸、4mL乙腊，重复W 上提取步骤，合并两次提取液，乙腊定容至lOmM上述百分比均为甲酸占乙腊添加量的体积 百分比；
[0099] (2)将步骤(1)所得的两份溶液分别进行下述操作：
[0100] 取Oasis PRiME HLB固相萃取小柱，用3mL的80% (百分比为乙腊占水的体积百分 比）乙腊水溶液进行活化;将步骤（1)中所得溶液上样到Oasis P化ME化B固相萃取小柱，保 持流速0.02mL/s，收集全部流出液，即得预处理后的待测样品A和预处理后的待测样品B。
[0101] 2、待测样品A、B中阿莫西林、青霉素 G和青霉素 V的检测
[0102] 将预处理后的待测样品A和预处理后的待测样品B分别进行下述操作：
[0103] (1)将预处理后的待测样品在20°C下用氮气吹干，lmL的1%(百分比为甲醇占水的 体积百分比）甲醇水溶液溶解，经0.22WI1的有机微孔滤膜过滤，得进料样品；
[0104] (2)将步骤(1)中所得进料样品，进行高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱化C-MS/ MS)检测，即可。
[0105] 高效液相色谱法检测的方法和条件具体与实施例1中相同。
[0106] 质谱检测的方法和条件具体与实施例1中相同。
[0107] 3、检测结果
[010引图4为高效液相色谱-电喷雾串联二级质谱化C-MS/MS)检测待测样品B的（即不含 有任何的待测组分）多反应监测(MRM)色谱图。图5为