一种用气相色谱法分离测定克利贝特有关物质的方法
【专利摘要】本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用气相色谱法快速分离检测克利贝特2,2'?(4,4'?Cyclohexylidenediphenoxy)?2,2'?dimethyldibutaoic acid的挥发性有关物质的方法，该方法综合药学、毒理及临床研究结果确定杂质的安全、合理限度，采用甲基聚硅氧烷类弱极性毛细管色谱柱，氢火焰离子化检测器，可以定量测定克利贝特的挥发性有关物质的含量，从而达到对克利贝特杂质的有效控制，保证克利贝特的质量及用药安全性。本发明方法专属性强，准确度高，耐用性好，且操作简单快速。
【专利说明】
一种用气相色谱法分离测定克利贝特有关物质的方法
技术领域
[0001] 本发明属于分析化学领域，具体涉及气相色谱法分离测定克利贝特有关物质的方 法。
【背景技术】
[0002] 克利贝特是一种新型纤维酸类降脂新药，具有降低血浆总胆固醇、甘油三酯、低密 度脂蛋白、极低密度脂蛋白，升高高密度脂蛋白的作用，可作为一线调脂药物，用于各型高 脂血症。克利贝特化学名为2,2'-(4,4'-〇5^1〇116叉711(16116(11卩11611〇叉5〇-2,2'-dimethyldibutaoic acid，分子式为C28H36〇6,结构式为：
药品在临床使用中产生的不良反应除了与药品本身的药理活性有关，有时与药品中存 在的杂质也有很大关系，因此对杂质的有效控制直接关系到药品的质量及安全性。
[0003] 合成克利贝特工艺中引入的挥发性有机杂质有2-溴2-甲基丁酸乙酯、2-甲基丁 酸、环己酮和苯酚，其钴抝忒分則
选择合适的分析方法，综合药学、毒理及临床研究的结果确定杂质的合理限度，准确地 分辨和测定上述杂质的含量，对提高药物质量、保证用药安全具有重大的意义。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种分离、检测合成克利贝特2,2'-(4,4'_ Cyclohexylidenediphenoxy)_2，2'-dimethyldibutaoic acid工艺中引入的挥发性有机杂 质（有关物质）的方法，从而达到对克利贝特杂质的有效控制，保证克利贝特的质量及用药 安全性。
[0005] 本发明所述的一种分离、测定克利贝特有关物质的方法，是采用气相色谱分析技 术，综合药学、毒理及临床研究结果确定杂质的安全、合理限度，选用合适的溶剂将样品溶 解，根据待分析杂质的结构及理化性质，选用合适极性的聚硅氧烷类毛细管色谱柱和检测 器。
[0006] 上述所说的杂质的限度定为0.05%~0.1%。
[0007] 上述所说的溶剂可以为甲醇、乙醇或丙酮中的一种或几种。
[0008] 上述所说的色谱柱选自Agilent、0HI0 VALLEY、Phenomenex或SGE等品牌。
[0009] 上述所说的色谱柱为弱极性或中等级性聚硅氧烷类毛细管色谱柱。
[0010] 本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现： 1)取克利贝特适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含克利贝特50mg的溶液，作为供试品 溶液；另取克利贝特有关物质2-溴2-甲基丁酸乙酯、2-甲基丁酸、环己酮和苯酚适量，加无 水乙醇溶解制成每1ml中含各有关物质0.05mg的溶液，作为对照品溶液。
[0011] 2)设置进样口温度为150~180°C，载气流速为0.8~1.2mL/min，程序升温法，升温 程序为初始温度40°C，恒温0~3min，以每分钟8~15°(：的升温速率至150°(：，恒温8~151^11，检 测器温度为250~350°C，分流比为10:1~50:1。
[0012] 3)取1)中的供试品溶液和对照品0.8~2yL，注入气相色谱仪，利用外标法完成克 利贝特的有关物质的分离测定。其中： 气相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的气相色谱仪为Agilent 6890A气相色谱 仪 检测器:氢火焰离子化检测器； 色谱柱:HP-5毛细管色谱柱(Agi Ient，30πΓ〇 · 32mm，0 · 25μπι); 进样口温度：150 °C; 检测器温度:250 °C; 载气(氮气)流速:I .OmL/min; 分流比：10:1; 进样体积：IyL 柱箱升温程序：
本发明采用气相色谱法，选用甲基聚硅氧烷类弱极性毛细管色谱柱(30nT0.32mm，0.25 μπι)，能快速有效地分离测定克利贝特的有关物质，本发明解决了克利贝特工艺中引入的挥 发性有机杂质的分离测定，从而达到对克利贝特杂质的有效控制，保证克利贝特的质量及 用药安全性。结果见附图1~5。
[0013]
【附图说明】
[0014] 图1为实施例1时溶剂(无水乙醇)的气相色谱图； 图2为实施例1时克利贝特空白样品的气相色谱图； 图3为实施例1时克利贝特各有关物质的气相色谱图； 图4为实施例2时克利贝特各有关物质的气相色谱图； 图5为实施例3时克利贝特各有关物质的气相色谱图； 图6为实施例1时克利贝特含有各有关物质的气相色谱图。
[0015]
【具体实施方式】： 以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。以下通过实例形式，对本 发明涉及的克利贝特的有关物质检测方法作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明 上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的 范围。
[0016] 实施例1 仪器与条件 色谱仪:Agilent 6890A气相色谱仪； 检测器:氢火焰离子化检测器； 色谱柱:HP-5毛细管色谱柱(Agi Ient，30πΓ〇 · 32mm，0 · 25μπι); 进样口温度：150 °C; 检测器温度:250 °C; 载气(氮气)流速:I .OmL/min; 分流比：10:1; 进样体积：IyL 柱箱升淵稈序：
实验步骤 取克利贝特适量，加无水乙醇溶解制成每1ml中含克利贝特50mg的溶液，作为克利贝特 样品溶液;取克利贝特有关物质2-溴2-甲基丁酸乙酯、2-甲基丁酸、环己酮和苯酚适量，加 无水乙醇溶解制成每1ml中含各有关物质0.05mg的溶液，作为对照品溶液；另取无水乙醇 作为空白溶液。按上述色谱条件进行分析，记录色谱图，按外标法以峰面积计算克利贝特中 有关物质2-溴2-甲基丁酸乙酯、2-甲基丁酸、环己酮和苯酚的含量。结果见附图卜3,图1为 空白溶液色谱图；图2为克利贝特样品溶液色谱图。图3中保留时间9.574min的色谱峰为2-甲基丁酸，l〇.786min的色谱峰为环己酮，11.952min的色谱峰为苯酸，13.714min的色谱峰 为2-溴2-甲基丁酸乙酯。图1~图3表明：本发明提供的方法能快速有效地分离测定克利贝特 的挥发性有机杂质，并可以准确进行定量检测，从而达到对克利贝特杂质的有效控制。
[0017] 实施例2 色谱仪:Agilent 6890A气相色谱仪； 检测器:氢火焰离子化检测器； 色谱柱:HP-5毛细管色谱柱(Agi I ent，30πΓ〇 · 32mm，0 · 25μπι); 进样口温度：150 °C; 检测器温度:250 °C; 载气(氮气)流速:I. lmL/min; 分流比：10:1; 进样体积：IyL 柱箱升温程序： 买验步骤
取克利贝特有关物质2-溴2-甲基丁酸乙酯、2-甲基丁酸、环己酮和苯酚适量，加无水乙 醇溶解制成每1ml中含各有关物质0.05mg的溶液，作为供试品溶液;另取无水乙醇作为空 白溶液。按上述色谱条件进行分析，记录色谱图。结果见附图4,图4中保留时间9.177min的 色谱峰为2-甲基丁酸，10.359min的色谱峰为环己酮，11 . 509min的色谱峰为苯酚， 13.196min的色谱峰为2-溴2-甲基丁酸乙酯。
[0018] 实施例3 仪器与条件 色谱仪:Agilent 6890A气相色谱仪； 检测器:氢火焰离子化检测器； 色谱柱:HP-5毛细管色谱柱(Agi Ient，30πΓ〇 · 32mm，0 · 25μπι); 进样口温度：145 °C; 检测器温度:250 °C; 载气(氮气)流速:I .OmL/min; 分流比：10:1; 进样体积：IyL 柱箱升淵稈序：
实验步骤 取克利贝特有关物质2-溴2-甲基丁酸乙酯、2-甲基丁酸、环己酮和苯酚适量，加无水乙 醇溶解制成每1ml中含各有关物质O . 05mg的溶液，作为供试品溶液;另取无水乙醇作为空 白溶液。按上述色谱条件进行分析，记录色谱图。结果见附图5,图5中保留时间9.584min的 色谱峰为2-甲基丁酸，10.783min的色谱峰为环己酮，11.954min的色谱峰为苯酚， 13.716min的色谱峰为2-溴2-甲基丁酸乙酯。
[0019] 本发明对所述克利贝特的有关物质分析方法的以下项目进行了验证： 系统适用性实验 取克利贝特及其有关物质适量，分别用无水乙醇溶解样品，配制成含克利贝特及其有 关物质的供试液。按实施例1的色谱条件进行气相色谱分析，记录色谱图。由图2可见此，在 此条件下各有关物质与相邻峰之间分离度良好，溶剂和克利贝特其他杂质均不干扰各有关 物质的测定。
[0020] 进样重复性试验 将克利贝特的有关物质供试液，按实施例1的色谱条件，重复进样6次，考察方法的重复 性，结果如下：
由结果可知，该方法进样重复性良好。
[0021]定量限、检测限 取克利贝特的有关物质适量，精密称定，分别用无水乙醇溶解样品，配制成响应的供试 液，再精密量取供试液适量，逐级稀释，按实施例1的色谱条件进样考察。克利贝特定量限和 检测限数据如下表所示：
线性 取克利贝特的有关物质适量，精密称定，分别用无水乙醇溶解，配制成各有关物质贮备 液;精密量取各有关物质贮备液，分别配成1〇%、50%、80%、100%和120%限度浓度的混合对照 品溶液，将各对照品溶液按实施例1的色谱条件进样考察，结果见下表： 准确度 取克利贝特的有关物质适量，精密称定，分别用无水乙醇溶解，配制成各有关物质贮备 液;精密量取各有关物质贮备液适量，用无水乙醇稀释，分别配成80%、100%和120%限度浓度 的准确度试验溶液。取克利贝特约50mg，分别用上述80%、100%和120%限度浓度的准确度试 验溶液ImL溶解，作为80%、100%和120%供试品溶液，各浓度水平供试品溶液平行配制3份;另 取克利贝特约50mg，加入ImL无水乙醇溶解，作为空白样品溶液。将上述溶液按实施例1的色 谱条件进样考察，图6为100%供试品溶液(即克利贝特含有各有关物质）的色谱图，进样结果 见下表：
耐用性 通过微调进样口温度、载气流速、检测器温度和色谱柱品牌等色谱条件，我们进一步考 察了方法的耐用性。结果发现，该方法对不同品牌的色谱柱、进样口温度变化±5°C、载气流 速变化±0.1mL/min、检测器温度变化±5°C等条件下耐用性良好。在不同品牌色谱柱、不同 进样口温度、载气流速及检测器温度条件下，克利贝特的有关物质保留时间无显著变化，且 均能达到有效分离。
【主权项】
1. 一种利用气相色谱法分离检测克利贝特的有关物质的方法，其特征在于:综合药学、 毒理及临床研究结果确定杂质的安全、合理限度，选用合适的溶剂将样品及其有关物质溶 解，根据待分析杂质的结构及理化性质，选用合适极性的聚硅氧烷类毛细管色谱柱和检测 器。2. 根据权利要求1所述的分离测定方法，克利贝特杂质2-溴2-甲基丁酸乙酯、2-甲基丁 酸、环己酮和苯酚的浓度限度确定为不超过0.05%~0.1%。3. 根据权利要求1所述的分离测定方法，溶剂可以为甲醇、乙醇或丙酮中的一种或几 种。4. 根据权利要求1所述的分离测定方法，色谱柱选自品牌为Agi 1 ent、OHI0 VALLEY、 Phenomenex或SGE的色谱柱。5. 根据权利要求1所述的分离测定方法，色谱柱为弱极性或非级性聚硅氧烷类毛细管 色谱柱。6. 根据权利要求1所述的分离测定方法，其特征在于，包括以下几个步骤： 1) 取克利贝特适量，加无水乙醇溶解制成每lml中含克利贝特50mg的溶液，作为供试品 溶液；另取克利贝特有关物质2-溴2-甲基丁酸乙酯、2-甲基丁酸、环己酮和苯酚适量，加无 水乙醇溶解制成每lml中含各有关物质0.05mg的溶液，作为对照品溶液； 2) 设置进样口温度为150~180°C，载气流速为0.8~1.2mL/min，程序升温法，升温程序 为初始温度40°C，恒温0~3min，以每分钟8~15°C的升温速率至150°C，恒温8~15min，检测器 温度为250~350°C，分流比为10:1~50:1; 3) 取1)中供试品溶液和对照品溶液0.8~3yL，按2)的色谱条件，注入气相色谱仪，完成 克利贝特有关物质的分离测定。7. 根据权利要求5所述的分离分析方法，步骤2 )所说的载气为氮气或氦气。8. 根据权利要求5所述的分离分析方法，步骤2 )所说的程序升温法， 升温速率（°C/min) I温度（°C) I保持时间(min) _/__40__0_ 10 150 9 优选以上升温程序。
【文档编号】G01N30/06GK105842361SQ201610189072
【公开日】2016年8月10日
【申请日】2016年3月29日
【发明人】孙冬雪, 刘秋叶
【申请人】北京万全德众医药生物技术有限公司