柱切换-离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子的系统及方法
【专利摘要】本发明涉及一种柱切换?离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子的系统及方法，属于药品检测技术领域。本发明采用低配的ICS?1500离子色谱仪与淋洗液发生器配合使用，选用IonPac NG1色谱柱为预处理柱、AS19阴离子分析柱时，淋洗液浓度仅需做一阶变化即可完成目标乳酸离子与其它离子的完全分离。同时，该法淋洗液浓度比较低，节能环保。本发明建立的系统与方法还具有所需样品量少，通用性好，操作简单，易于自动化，方法简单，仪器配置要求低等优点。
【专利说明】
柱切换-离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子的系统及方法
技术领域
[0001] 本发明属于药品检测技术领域，具体涉及柱切换-离子色谱法测定洛铂中痕量乳 酸离子的系统及方法。 技术背景
[0002] 洛铂化学名为1，2-二氨甲基-环丁烷-乳酸合铂，是一种铂（n)铬合物的非对映异 构混合物，也是一种新型的抗肿瘤药物，主要用于治疗乳腺癌、小细胞肺癌及慢性粒细胞白 血病。洛铂中1，2-二氨甲基-环丁烷为稳定配基，乳酸为离去基团，其抗肿瘤活性源DNA-药 物加合物的形成，主要是GG和AG的链内交联。洛钼能影响C-my c基因的表达，而C-my c的表达 与肿瘤的发生、凋亡和细胞增殖有关。同时，它能克服一些临床前肿瘤模型对顺铂的抗性。
[0003] 工业上，洛铂合成主要以1，2-二氰基环丁烷为原料，通过还原、缩合、环合3步反 应得到。由于在环合反应中，乳酸作为原料与缩合产物结合生成洛铂，因此可以通过检测 乳酸含量来确定环合反应的转化率。
[0004] 目前乳酸的测定方法主要有滴定法、旋光法、UV酶法分析、酶电极法和离子色谱 法。旋光法测定时间长，手段繁琐;UV酶法仅限于纯度高的L乳酸测定，且测定成本相对较 高;酶电极法虽然专一性高、成本低、分析快，但多用于医学血乳酸的测定。这些方法对样品 的需要量相对较大，无法应用于样品量少的场合，而且这些方法不适用于痕量分析 [7]。
[0005] 对于单纯离子色谱系统，若将洛铂直接进样，可发现有很大基质干扰，形成一个几 分钟的包峰，严重影响乳酸离子的测量准确度。为提高准确度，采用标准加入法，结果得到 一定程度的改善，但并不能完全消除基质影响，同时由于标准加入法对于样品两次称量的 精度要求非常高，人为因素影响加大，此外，离子色谱柱、抑制器均受到基质污染，使用寿命 大大缩短。
【发明内容】
[0006] 本发明针对现有技术中存在的上述问题，利用阀切换系统，应用反相色谱在线消 除复杂基质的干扰，对消除基质后样品进行收集，再采用离子色谱法进行在线分离检测，建 立了一种可在线直接分析复杂洛铂样品中痕量乳酸离子的色谱阀切换系统，及应用该系统 直接测定洛铂中痕量乳酸离子的方法。样品需要量小，可直接在线净化样品，消除复杂基质 干扰，有效解决了测定药物洛铂中乳酸离子遇到的基质干扰问题，同时减少离子色谱柱和 抑制器的污染影响，延长使用寿命。
[0007] 本发明是通过以下技术方案来实现的： 一种柱切换-离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子的系统，所述的系统包括两个梯度 栗、进样器、十通阀、定量环、预处理柱、输液栗、六通阀、收集环、保护柱、分析柱、抑制器和 电导检测器;所述的进样器和十通阀连接，两个梯度栗与十通阀连接，预处理柱两端分别连 接十通阀和六通阀，输液栗与六通阀连接，六通阀连接保护柱后，依次连接分析柱、抑制器 和电导检测器。
[0008] 上述柱切换-离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子的系统，优选的，预处理柱为 IonPac NG1色谱柱;保护柱为IonPac AG19;分析柱为IonPac AS19。
[0009] 本发明还提供了一种柱切换-离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子的方法，所述 的方法包括基线的采集、干扰基质的消除与乳酸离子的收集、乳酸离子的色谱分离分析和 预处理柱的再生，具体步骤如下： 1) 基线的采集:将离子色谱柱切换系统中的各部件连接好，构成柱切换-离子色谱系 统，然后通过两个梯度栗将去离子水不断输入到预处理柱，通过输液栗将淋洗液不断输入 至保护柱及分析柱，待其全部达到平衡状态，开始记录基线信号； 2) 干扰基质的消除与乳酸离子的收集:待测样品通过进样器注入十通阀，定量环控制 样品容量，样品装载完毕后，十通阀和六通阀同时切换到相反位置，两个梯度栗输送去离子 水将定量环中的样品带入预处理柱中，弱极性或非极性杂质保留在预处理柱上，乳酸离子 进入收集环； 3) 乳酸离子的色谱分离分析:进样3分钟后，预处理柱上的乳酸离子完全洗脱，将十通 阀和六通阀一起切换回初始位置，输液栗输送淋洗液至收集环，将收集环中的目标阳离子 依次输送至保护柱、分析柱、抑制器和电导检测器； 4) 预处理柱的再生:通过两个梯度栗输送质量分数50%乙腈水溶液洗脱预处理柱上吸 附的杂质至废液，再用去离水平衡预处理柱，用于下一次进样； 5) 重复步骤1)~4)，测定乳酸离子标准溶液及洛铂样品，绘制乳酸离子标准曲线，然后 由标准曲线计算洛铂样品中乳酸离子的含量。
[0010] 步骤2)中，所述的定量环控制样品容量优选100yL。
[0011]步骤2)中，所述的收集环9待测样品进样量优选2 ml; 步骤3 )中，所述的淋洗液为K0H-水溶液。
[0012] 步骤3)中，所述的淋洗液中K0H浓度为：0~18 min，4 mmol/L;18~30 min，K0H 浓度由4 mmol/L梯度增加到30 mmol/L;30~35 min，4 mmol/L〇
[0013]步骤5)中，所述的标准溶液的配制方法:称取乳酸钠标准品，配制成1000 mg/L的 乳酸离子标准储备液，在4°C下保存，使用时将标准储备液逐级稀释至浓度0.01~50 mg/L 的乳酸离子标准溶液。
[0014] 上述测定方法中，两个梯度栗的总流速为0.5 mL/min，输液栗流速为1.0 mL/min。
[0015]所述的测定方法，本发明方法检测灵敏度为0.0005 mg I/1;检出限为0.0015mg L -1 〇
[0016] 本发明柱切换-离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子的系统及方法，其有益效果 如下： 1)所需样品量少。本发明建立的在线处理技术通过色谱柱实现干扰杂质的消除，进样 量只需l〇〇yL即可完成对目标化合物的分析检测，而一般的干扰杂质消除过程为离线消除， 所需样品量大，本发明所建立的方法特别适用于微量或贵重样品的检测。
[0017] 2)通用性好。本发明所建立的方法能通过色谱柱的更换，应用于一系列的类似干 扰问题，通过在线处理技术，消除干扰物质，扩展了离子色谱的应用范围。
[0018] 3)操作简单，易于自动化。
[0019] 4)方法简单，仪器配置要求低。离子色谱法分析有机酸时，主要采用AS11色谱柱， 淋洗液浓度采用多阶变化，仪器配置要求高。
[0020] 5)本发明采用低配的ICS-1500离子色谱仪，该仪器与淋洗液发生器配合使用时， 淋洗液浓度仅能做一阶变化，应用范围受到限制。选用IonPac NG1色谱柱为预处理柱，AS19 阴离子分析柱时，淋洗液浓度仅需做一阶变化即可完成目标乳酸离子与其它离子的完全分 离。同时，该法淋洗液浓度比较低，节能环保。
【附图说明】
[0021] 图1为实施例1柱切换-离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子的系统流程示意图； 图中：1和2、梯度栗，3、进样器，4、十通阀，5、定量环，6、预处理柱，7、输液栗，8、六 通阀，9、收集环，10、保护住，11、分析柱，12、抑制器。13、电导检测器； 图2为实施例2去离子水、乳酸标准品与实际样品洛铂的色谱对比谱图，其中峰1为乳酸 离子。
【具体实施方式】
[0022] 以下所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为 本发明的保护范围。
[0023] 实施例1 一种柱切换-离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子的系统(如图1所示），包括两个梯度 栗1、2,进样器3,十通阀4,定量环5,预处理柱6,输液栗7,六通阀8,收集环9,保护柱10,分析 柱11，抑制器12和电导检测器13。所述的进样器3和十通阀4连接，两个梯度栗1、2与十通阀4 连接，预处理柱6两端分别连接十通阀4和六通阀8,输液栗7与六通阀8连接，六通阀8连接保 护柱10后，依次连接分析柱11、抑制器12和电导检测器13; 其中，预处理柱6为IonPac NG1色谱柱;保护柱10为IonPac AG19;分析柱11为IonPac AS19;离子色谱仪为ICS-1500离子色谱仪。
[0024] 实施例2 测定洛铂中痕量乳酸离子，具体步骤如下： 1)溶液配制： 标准溶液:称取乳酸钠标准品，配制成1000 mg/L的乳酸离子标准储备液，在4°C下保 存，使用时将标准储备液逐级稀释至浓度0.01~50 mg/L的乳酸离子标准溶液，浓度依次 为；0.01，0.05,0.25，l，5,25,50mg/L。
[0025]样品溶液:精密称取洛铂样品25 mg置于5 mL量瓶中，用去离子水溶解并定容至刻 度。
[0026] 2)基线的采集:将离子色谱柱切换系统中的各部件连接好，构成柱切换-离子色谱 系统，初始状态时十通阀4处于Inject位，六通阀8处于Load位;然后通过梯度栗1和2将去离 子水按照总流速0.5 mL/min不断输入到预处理柱6，通过输液栗7将K0H淋洗液以流速1.0 mL/min不断输入至保护柱10及分析柱11，待其全部达到平衡状态，开始记录基线信号； 3)干扰基质的消除与乳酸离子的收集:待测样品通过进样器3注入十通阀4,定量环5控 制样品容量，样品装载完毕后，十通阀4切换到Load位(0-1.0 min)，六通阀8切换到Inject 位(0-3.0 min)，梯度栗1和2输送去离子水将定量环5中的样品带入预处理柱6中，弱极性或 非极性杂质保留在预处理柱6上，乳酸离子进入收集环9; 4) 乳酸离子的色谱分离分析:进样3min后，预处理柱6上的乳酸离子完全洗脱，将十通 阀4和六通阀8-起切换回初始位置，输液栗7输送淋洗液(K0H，0-18 min 4 mmol/L，18-30 min 4-30 mmol/L，3〇-35 min 4 mmol/L)至收集环9,将收集环9中的目标阳离子依次输送 至保护柱10、分析柱11、抑制器12和电导检测器13; 5) 预处理柱的再生:进样3-8min后，通过梯度栗1和2输送质量分数50%乙腈水溶液洗脱 预处理柱6上吸附的杂质至废液，再用去离子水平衡预处理柱6，用于下一次进样； 6) 重复步骤2)~4)，测定乳酸离子标准溶液及洛铂样品，绘制乳酸离子标准曲线，然后 由标准曲线计算洛铂样品中乳酸离子的含量。（如图2所示） 实施例2应用柱切换-离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子方法性能参数见表1，检测 结果分析见表2。
对比例1:离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子，参数见表3。
[0028]表 3
由实施例和对比例结果分析可知，本方法与现有技术中离子色谱法测定洛铂中痕量乳 酸离子方法相比，检出限低，线性范围更宽。
【主权项】
1. 一种柱切换-离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子的系统，其特征在于:所述的系统 包括两个梯度栗、进样器、十通阀、定量环、预处理柱、输液栗、六通阀、收集环、保护柱、分析 柱、抑制器和电导检测器;所述的进样器和十通阀连接，两个梯度栗与十通阀连接，预处理 柱两端分别连接十通阀和六通阀，输液栗与六通阀连接，六通阀连接保护柱后，依次连接分 析柱、抑制器和电导检测器。2. 根据权利要求1所述的系统，其特征在于:预处理柱为IonPac NGl色谱柱;保护柱为 IonPac AG19;分析柱为IonPac AS19。3. -种柱切换-离子色谱法测定洛铂中痕量乳酸离子的方法，所述的方法包括基线的 采集、干扰基质的消除与乳酸离子的收集、乳酸离子的色谱分离分析和预处理柱的再生，具 体步骤如下： 1) 基线的采集：将离子色谱柱切换系统中的各部件连接好，构成柱切换-离子色谱系 统，然后通过两个梯度栗将去离子水不断输入到预处理柱，通过输液栗将淋洗液不断输入 至保护柱及分析柱，待其全部达到平衡状态，开始记录基线信号； 2) 干扰基质的消除与乳酸离子的收集:待测样品通过进样器注入十通阀，定量环控制 样品容量，样品装载完毕后，十通阀和六通阀同时切换到相反位置，两个梯度栗输送去离子 水将定量环中的样品带入预处理柱中，弱极性或非极性杂质保留在预处理柱上，乳酸离子 进入收集环； 3) 乳酸离子的色谱分离分析:进样3分钟后，预处理柱上的乳酸离子完全洗脱，将十通 阀和六通阀一起切换回初始位置，输液栗输送淋洗液至收集环，将收集环中的目标阳离子 依次输送至保护柱、分析柱、抑制器和电导检测器； 4) 预处理柱的再生:通过两个梯度栗输送质量分数50%乙腈水溶液洗脱预处理柱上吸 附的杂质至废液，再用去离水平衡预处理柱，用于下一次进样； 5) 重复步骤1)~4)，测定乳酸离子标准溶液及洛铂样品，绘制乳酸离子标准曲线，然后 由标准曲线计算洛铂样品中乳酸离子的含量。4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述的定量环控制样品容量为 IOOyL05. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤2)中，所述的收集环待测样品进样量 为 2ml。6. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于:步骤3)中，所述的淋洗液为KOH-水溶液。7. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于:步骤3)中，所述的淋洗液中KOH浓度为:0~ 18 min, 4 mmol/L;18~30 min, 4~30 mmol/L;30~35 min， 4 mmol/L〇8. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于:步骤5)中，所述的标准溶液的配制方法:称 取乳酸钠标准品，配制成1000 mg/L的乳酸离子标准储备液，在4tC下保存，使用时将标准储 备液逐级稀释至浓度0.01~50 mg/L的乳酸离子标准溶液。9. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于:两个梯度栗的总流速为0.5 mL/min，输液 栗流速为1.0 mL/min。10. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于:检测灵敏度为0.0005 mg I/1;检出限为 0.0015mg L^10
【文档编号】G01N30/02GK105929033SQ201610222810
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月12日
【发明人】赵振东, 谢艳丽, 朱建忠, 冯玉红, 章程辉
【申请人】海南大学