一种地佐辛有关物质的检测方法
【专利摘要】本发明提供一种地佐辛有关物质的检测方法，采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈?三乙胺溶液[取1000ml水，加5ml三乙胺和2ml四丁基氢氧化铵水溶液，用稀磷酸(1—5)调到pH3.2](200：800)为流动相；流速为每分钟0.6ml，检测波长281nm。本发明地佐辛有关物质检测方法通过增加缓冲盐浓度，加强洗脱及增加离子对试剂，改善峰形，克服了原方法理论板数较低，主峰不能被迅速洗脱，而导致峰宽较宽且拖尾严重等问题。
【专利说明】
_种地佐辛有关物质的检测方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种地佐辛有关物质的检测方法，属于药物化学分析技术领域。
【背景技术】
[0002] 地佐辛属于一种(Dezocine)属于一种典型的阿片生物碱类镇痛药，由瑞典Astra 公司开发。地佐辛为人工合成的混合型阿片受体激动-拮抗剂，当稳态血药浓度达到5_9yg/ L时即产生缓解疼痛作用，它的镇痛效果是哌替啶的5-9倍，与吗啡相当。它一方面对K受体 完全激动，产生确切的镇痛作用，同时又部分拮抗μ受体，使呼吸抑制和成瘾的发生率降低， 且地佐辛对δ阿片受体活性极弱，不产生烦躁焦虑感。因此，被列入非麻醉品的范畴，广泛应 用于临床术后镇痛。适用于治疗手术后中等至剧烈疼痛、内脏绞痛及晚期癌症患者的疼痛。 由于地佐辛具有良好的耐受性和安全性，成为在临床上具有良好发展前景的药物。
[0003] 地佐辛为白色或类白色结晶性粉末，无臭，甲醇、乙醇或冰醋酸中溶解，在丙酮、乙 酸乙酯或氯仿中略溶，在水中几乎不溶，对高温、氧化等环境较为敏感。
[0004] 目前，地佐辛有关物质检测一般采用标准号ΥΒΗ09172006(扬子江药业集团有限公 司的地佐辛质量标准）的方法:有关物质检测方法，采用反相色谱法，用十八烷基硅烷键硅 胶为填充剂，检测波长为281nm，以三乙胺溶液[取水1000ml加2.5ml三乙胺，用稀磷酸（1 一 5)调节PH值至3.2] -乙腈(80: 20)为基础流动相研究，浓度为1.4mg/ml。从谱图可知，理论 板数较低，主要由于主峰不能被迅速洗脱，导致峰宽较宽且拖尾严重，因此有关物质检测需 要做进一步改进;因此需要开发更灵敏、更耐用的检测方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于克服现有检测方法的不足，提供一种地佐辛有关物质的检测方 法，可以更灵敏、更有效的检测地佐辛中有关物质。
[0006] 本发明技术方案如下：一种地佐辛有关物质的检测方法，采用以十八烷基硅烷键 合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈-三乙胺溶液[取1000ml水，加5ml三乙胺和2ml四丁基氢 氧化铵水溶液，用稀磷酸（1 一5)调到pH3.2 ] (200:800)为流动相;流速为每分钟0.6ml，检测 波长281nm，理论板数按地佐辛峰计算应不低于3000。地佐辛峰和相邻杂质峰的分离度应 符合要求。
[0007] 测定方法:取地佐辛约35mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈5ml，置热水浴中稍 加热振摇使溶解，用三乙胺溶液[取l000ml水，加5ml三乙胺和2ml四丁基氢氧化铵水溶液， 用稀磷酸（1 一5)调到pH3.2]稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液;量取供试品溶液lml，置 100ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，作为对照溶液。量取对照溶液20μ1，注入液相色谱 仪，调节检测灵敏度使主成份峰高约为记录仪满量程的10~20%。再精密量取供试品溶液、 对照溶液各20μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成份峰保留时间的2倍。供试品溶液色 谱图中如有杂质峰，单个杂质峰的面积不得大于对照溶液主成份峰面积的1/10(0.1%)，量 取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液主成份峰面积(1. 〇 %)。
[0008] 本发明地佐辛有关物质检测方法具有如下有益效果：
[0009] (1)增加缓冲盐浓度，加大三乙胺浓度，增强洗脱能力；
[0010] (2)增加离子对试剂四丁基氢氧化铵，改善峰形；
[0011] (3)克服了原方法理论板数较低，主峰不能被迅速洗脱，而导致峰宽较宽且拖尾严 重等问题。
【附图说明】
[0012] 图1为采用YBH09172006法检测有关物质方法谱图。
[0013]图2为采用本发明方法检测有关物质方法谱图。
[0014] 图3为本发明方法检测地佐辛线性关系数据图(n = 10)。
【具体实施方式】
[0015] 为了使本技术领域的技术人员更好地理解本发明方案，下面结合【具体实施方式】对 本发明作进一步的详细说明。
[0016] 实施例1 .YBH09172006检测方法试验
[0017]采用YBH0917 2006 (扬子江药业集团有限公司的地佐辛质量标准)地佐辛原料的有 关物质检测方法：
[0018] 色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以乙腈-三乙胺溶 液[取1 000ml水，加2.5ml三乙胺，用稀磷酸（1 一5)调到pH3.2] (200:800)为流动相;流速为 每分钟0.6ml，检测波长281nm，理论板数按地佐辛峰计算应不低于3000。地佐辛峰和相邻杂 质峰的分离度应符合要求。
[0019] 测定法取本品约35mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈5ml，置热水浴中稍加热 振摇使溶解，用三乙胺溶液稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液；量取供试品溶液lml，置 100ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，作为对照溶液。量取对照溶液20μ1，注入液相色谱 仪，调节检测灵敏度使主成份峰高约为记录仪满量程的10~20%。再精密量取供试品溶液、 对照溶液各20μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成份峰保留时间的2倍。供试品溶液色 谱图中如有杂质峰，单个杂质峰的面积不得大于对照溶液主成份峰面积的1/10(0.1%)，量 取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液主成份峰面积(1. 〇 %)。
[0020] 表 1
[0022] 从谱图（图1)可知，理论板数较低，主要由于主峰不能被迅速洗脱，导致峰宽较宽 且拖尾严重。
[0023] 实施例2.采用本发明地佐辛原料的有关物质检测方法：
[0024]色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；以乙腈-三乙胺溶 液[取1 000ml水，加5ml三乙胺和2ml四丁基氢氧化铵水溶液，用稀磷酸（1 一5)调到pH3.2 ] (200:800)为流动相;流速为每分钟0.6ml，检测波长281nm，理论板数按地佐辛峰计算应不 低于3000。地佐辛峰和相邻杂质峰的分离度应符合要求。
[0025]测定法取本品约35mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈5ml，置热水浴中稍加热 振摇使溶解，用三乙胺溶液稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液；量取供试品溶液lml，置 100ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，作为对照溶液。量取对照溶液20μ1，注入液相色谱 仪，调节检测灵敏度使主成份峰高约为记录仪满量程的10~20%。再精密量取供试品溶 液、对照溶液各20μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成份峰保留时间的2倍。供试品溶液 色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰的面积不得大于对照溶液主成份峰面积的1/10(0.1%)， 量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液主成份峰面积(1. 〇 %)。
[0030] 从谱图2可知，本品的理论板数基本满足有关物质方法分析要求，主峰保留时间为 8.389分钟，杂质A和杂质B的相对保留时间为3.1和5.9，说明本发明分析方法可用于地佐辛 及其注射液有关物质的检测。
[0031] 实施例3.本发明有关物质分析方法的验证
[0032] 1、专属性试验
[0033] (1)、分离度试验
[0034] 对合成中的起始原料和各主要中间体，以及与可能产生的已知杂质进行分离度试 验研究，实验结果见下表，
[0035] 表4地佐辛有关物质分离度实验结果表
[0038] 由上述数据得知，在本发明色谱条件下，地佐辛与其中可能存中间体和已知杂质 等均能得到较好的分离，分离度均大于1.5。
[0039] (2)、强制降解试验
[0040] 取地佐辛样品适量，分别进行酸、碱、光照、高温和氧化破坏，考察本色谱条件对降 解产物的检测和分离能力，试验操作过程见表5,实验结果见表，6。
[0041] 表5地佐辛强制降解试验方案表
[0043]表6地佐辛强制降解试验结果表
[0045]
[0046] 结果可知，地佐辛在氧化破坏条件下有大量降解，在强碱条件下略有降解;在强酸 条件下稍有降解，在强光和高温条件下破坏几乎没有降解，在各降解条件下产生的降解杂 质均能与产品主峰有较好的分离度；同时试验结果表明在破坏性试验中产生的降解杂质能 在本色谱条件下被有效检出。
[0047] 通过专属性试验研究可知，采用本发明色谱条件可以测定本品中存在的已知杂质 和降解产物或未知杂质，分离度较好且检测不受杂质的干扰。
[0048] (3)、峰纯度检查
[0049]供试品溶液：分别取地佐辛精品、粗品约35mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈 5ml，置热水中稍加热振摇使溶解，用三乙胺溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
[0050]精密量取供试品溶液和地佐辛强制降解试验条件下溶液各20ul，注入液相色谱 仪，在200nm-400nm进行全波长3D检测，结果见表7 〇 [0051 ] 表7峰纯度检测结果表
[0054]从上表结果可知:a、纯度因子均大于纯度阈值，说明本品在该有关物质谱图中主 峰的纯度满足有关物质分析要求。
[0055] b、本品在该色谱条件下最大吸光度波长为281nm。
[0056] 2、重复性试验
[0057]确认用该仪器系统运行地佐辛有关物质的测试方法的验证是否符合要求。
[0058]取本品适量，加乙腈5ml，置热水中稍加热振摇使溶解，用三乙胺溶液稀释制成每 lml中含1.4mg的溶液，作为供试品溶液，在上述色谱条件下重复连续进样6次，按峰面积归 一化法计算总杂质和单个最大杂质，并计算总杂质的数量。结果见表8，
[0059]可接受标准：杂质峰与地佐辛峰的分离度应符合要求。理论板数按地佐辛峰计算 不低于2000,重复进样6针，按峰面积归一化法计算总杂质和单个最大杂质的量，RSD均应小 于10.0%，保留时间的RSD应小于2.0%。
[0060] 表8重复性试验结果
[0062]结果表明，重复进样6次的总杂质、单个最大杂质和杂质数量、保留时间的相对标 准偏差均小于10%，说明本方法测定地佐辛有关物质重复性良好。
[0063] 3、检测限与定量限
[0064] (1)、地佐辛的检测限与定量限
[0065] 确定在地佐辛有关物质色谱条件下，地佐辛可以被检出的最低限度和可以被准确 定量的最低限度。
[0066] 把已知浓度的样品溶液稀释到低浓度的试样，测出的信号与空白处的信号（基线 嗓音)进行比较，检测限以信噪比S/N=2~3倍计;定量限以信噪比S/N=10计。结果见表9。
[0067] 表9地佐辛有关物质检测限定量限
[0069] 经计算，地佐辛的检测限为2.41 ng;地佐辛的定量限为8.04ng
[0070] 4、线性和范围
[0071] (1)、地佐辛线性和范围
[0072] 精密称取对照品25.02mg，置25ml量瓶中，加乙腈5ml，置热水中稍加热振摇使溶 解，用三乙胺溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取4ml置于100ml量瓶中，用三乙胺溶液-乙腈 (80 : 20)稀释制成每lml中含地佐辛40.032yg的溶液，再分别精密量取4.5ml、3.5ml、3ml、 2.5ml、2ml、1.5ml、lml、0.4ml、0.35ml、和0.3ml置于10ml量瓶中，再用三乙胺溶液-乙腈 (80:20)分别稀释成每11111中含地佐辛18.0144以8、14.0112以8、12.0096以8、10.008以8、8.0064 yg、6 · 0048yg、4 · 0032yg、1 · 60128yg、1 · 40112yg和 1 · 20096ug的溶液，分别精密量取上述 10 种溶液各20μ1注入液相色谱仪中，记录色谱图，量取峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵 坐标进行线性回归，测定结果见表10,图3。
[0073]表10地佐辛线性关系数据表(η = 10)
[0075] 结果表明，地佐辛在1.20096以8/!111(0.12%)~18.0144以8/1111(1.8%)范围内的线 性回归方程为：A= 18.04 XC-4.7284,相关系数为0.9997，说明本品在1.20096μg/ml (0.12%)~18.0144以8/1111(1.8%)范围内线性良好。
[0076] 结论:本品杂质在本色谱条件下的响应值与本品响应值相当或一致的情况下，在 0.12%~1.8%的杂质范围内是能准确检出。
[0077] 6、精密度试验
[0078] (1)中间精密度
[0079]取工艺验证批三批产品，照地佐辛有关物质色谱条件，由不同人员在不同时间和 不同仪器上，用不同色谱柱进行检测，考察仪器、人员、时间及色谱柱对有关物质方法检测 的综合影响，计算有关物质检测结果之间的差异，结果见表11。
[0080]表11地佐辛有关物质中间精密度条件表
[0082]表12地佐辛有关物质中间精密度实验结果表
L〇〇84」检测结果显示，样品的杂质个数、杂质的量及杂质归属均一致，说明方法的中间精 密度良好。
[0085] 7、溶液的稳定性试验
[0086] 地佐辛有关物质测定溶液在室温放置一定时间后，评估检测结果受影响的程度。 [0087]供试品溶液:取地佐辛约35mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈5ml，置热水中稍 加热，振摇使溶解，用三乙胺溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
[0088] 将供试品溶液在室温条件下放置，分别于0、1、2、3、4、5、8小时取样进行检测，试验 结果见表13。
[0089] 表13地佐辛有关物质分析方法的溶液稳定性试验结果表
[0090]
[0091] 结果表明：供试品溶液在室温条件下放置8小时，杂质个数及杂质的量基本一致， 有关物质检测结果无明显变化，说明供试品溶液在室温条件下放置8小时内稳定。
[0092] 8、方法耐用性
[0093]在地佐辛有关物质方法中色谱条件（色谱柱、流动相的比例、色谱柱、流速、进样 量、波长和柱温进行小范围的变动）的参数有微小变动时，评估测定结果受影响的程度，确 定该方法用于有关物质检测时结果的可靠性。
[0094] (1)、供试品溶液
[0095]取地佐辛35mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈5ml，置热水中稍加热，振摇使溶 解，用三乙胺溶液稀释至刻度，摇匀，即得。
[0096] (2)、色谱条件的变化
[0097] a)改变流速:检测方法其他条件不变，将流速改变为0.58ml/min与0.62ml/min
[0098] b)改变柱温:检测方法其他条件不变，将柱温改变为39 °C与41°C
[0099] c)改变波长:检测方法其他条件不变，将波长改变为280nm和282nm
[0100] d)改变进样量:检测方法其他条件不变，将进样量改变为18ul和22ul
[0101] e)改变色谱柱:检测方法其他条件不变，更换相同填料，不同厂家的色谱柱
[0102] (3)、可接受标准
[0103] 主峰与其相邻杂质峰可以达到良好分离，不同条件下系统适用性试验结果符合要 求，检测出杂质个数、最大单杂和总杂RSD<10%。
[0104] (4)、精密量取供试品溶液20μ1注入液相色谱仪，记录各个条件下的色谱图，方法 耐用性试验结果见表14。
[0105] 表14地佐辛有关物质分析法的耐用性试验结果
[0106]
[0107] 注:色谱柱改变见中间精密度
[0108] 试验结果表明：本品在进样量、流速、波长、柱温、流动相比例有适当变化范围内， 保留时间、最大单杂和总杂质的RSD分别为1.58%、1.49%、1.49%均小于2.0%，对本品有 关物质结果影响不明显;通过适当改变色谱柱型号、流速、波长、进样量、流动相比例和柱温 等参数，检测条件均能满足有关物质的检测要求，说明本方法的耐用性较好。
[0109] 本品质量标准中检查项下的有关物质分析方法经过方法学研究的验证，说明本发 明方法可准确地检测出相关杂质。
【主权项】
1. 一种地佐辛有关物质的检测方法，其特征是，采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂的色谱柱，以乙腈-三乙胺溶液[取1000ml水，加5ml三乙胺和2ml四丁基氢氧化铵水溶液， 用稀磷酸（1 一5)调到pH3.2] (200:800)为流动相;流速为每分钟0.6ml，检测波长281nm。2. 如权利要求1所述的地佐辛有关物质的检测方法，其特征是，测定方法具体是，取地 佐辛35mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈5ml，置热水浴中稍加热振摇使溶解，用三乙胺 溶液稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液;量取供试品溶液lml，置100ml容量瓶中，用流动相 稀释到刻度，作为对照溶液;量取对照溶液20μ1，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度使主成 份峰高约为记录仪满量程的10~20% ;再精密量取供试品溶液、对照溶液各20μ1，注入液相 色谱仪，记录色谱图至主成份峰保留时间的2倍。
【文档编号】G01N30/02GK106018584SQ201610312659
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月12日
【发明人】许祚芝, 彭丽, 周春红, 陈洪生, 姜洋
【申请人】华润双鹤利民药业（济南）有限公司