一种4-[(4-氟苯基亚胺)甲基]-苯酚的有关物质检测方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种4-[ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷 的有关物质检测方法及其应用。
【背景技术】
[000引 4-[ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷(英文名；4-[ (4-Fluorophenylimino)methyl] 地enol)，分子式为C13H10FN0,分子量为215. 22,CAS登录号；3382-63-6。4-[ (4-氣苯基亚 胺）甲基]-苯酷纯品为淡黄色晶体，其烙点为173-176C。其结构如下所示。
[0003]
[0004] 4-[ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷是治疗原发性高胆固醇血症药物依折麦布的重 要中间体。依折麦布是一类全新的降胆固醇药物，相对于他汀类药物抑制肝脏中胆固醇的 合成，依折麦布则是通过选择性地抑制胆固醇在肠道中的吸收而发挥作用。另外，依折麦 布与他汀类药物联用可W达到更为优越的降低低密度脂蛋白胆固醇的疗效。目前，国内临 床应用依折麦布主要为进口制剂，如依折麦布片剂(益适纯)、依折麦布\辛伐他汀复方片剂 (谋至能）等。
[0005] 作为依折麦布的重要中间体，4-[(4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷的质量控制研究非 常关键。4-[(4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷是对羟基苯甲酵与对氣苯胺的缩合产物，在甲 醇、己醇、异丙醇中易溶，在己膳、二氯甲焼中溶解；在含水溶剂中极不稳定，反相高效液相 色谱法显示该中间体迅速分解为原料对羟基苯甲酵与对氣苯胺。因此，常规的反相高效液 相色谱法不适用于4-[ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷的有关物质检测，需要发明一种新方 法对其有关物质进行质量监控。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种4-[(4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷的有关物质检测方 法。
[0007] 本发明的再一个目的是提供一种4- [ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷的有关物质检 测方法的应用。
[0008] 该检测方法采用正相高效液相色谱法，其色谱条件如下：
[0009] 流动相组成；正己焼（A)-异丙醇（B)、正己焼（A)-己醇（B)、正庚焼（A) -异丙 醇（B)、正庚焼（A)-己醇（B);优选组成；正庚焼（A)-己醇（B);
[0010]流动相配比（A:B) ;95:5 ~70:30 ;
[0011] 流动相流速；0. 2-2. 0血/min;优选1. 0-2. 0血/min;更优选1. 0血/min；
[0012] 检测波长；200~400nm;优选200~300nm;更优选232nm;
[001引 柱温；25~4(TC;优选4(TC;
[0014] 检测器；紫外检测器或二极管阵列检测器。
[0015] 溶解供试品的溶剂为己醇、异丙醇、己膳、二甲基亚讽值MS0)、二甲基甲醜胺 (DMF)，优选为己膳。
[0016] 供试品溶液的浓度为0. 2-5mg/mU优选为1.Omg/mL。
[0017] 单针进样量为1-40yL，优选为20yL。
[001引根据本发明提供的检测方法，其中，所述色谱柱选自ZorbaxN肥柱 (4. 6X250mm,SlimKSpherisorbSilica柱（4. 6X150mm,SlimKSpherisorbCN柱 (4. 6X150mm,Sum)、畑iralpakAD-H柱（4. 6X250mm,Sum)、畑iralpakOJ-H柱 (4. 6X250mm，5ym)、ChiralpaklA柱（4. 6X250mm，5ym)，最优选为ChiralpaklA柱 (4. 6X250mm, 5ym)。
[0019] 本发明提供的一种4-[ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷的有关物质检测方法，实现 了 4-[ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷与杂质的分离，具有较高的灵敏度和专属性，操作简 捷，分离度符合标准（即分离度R大于1.50。分离度为相邻两峰的保留时间之差与平均峰 宽的比值，也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。R越大，表明相邻两组分分离越好。一 般说当R< 1时，两峰有部分重叠；当R=l. 0时，分离度可达98% ;当R=l. 5时，分离度可达 99. 7%。通常用R=1.5作为相邻两组分已完全分离的标志。当R=1时，称为4 0分离，两 峰基本分离，裸露峰面积为95. 4%，内侧峰基重叠约2%。R= 1. 5时，称为6 0分离，裸露峰 面积为99. 7%。R> 1. 5称为完全分离。《中国药典》规定R应大于1. 5。分离度计算公式： R=2 (tR2-tRl) / (W1+W2))，可用于4-[ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷的质量控制，具有现实 意义。
【附图说明】
[0020] 图1是实施例5中系统适应性溶液的液相色谱图；
[0021] 图2是实施例8中混合物系统适应性溶液的液相色谱图。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
[0023] 连施例1
[0024] 溶剂的选择及溶液的浓度的选择：
[0025] 溶解样品的溶剂的选择，我们分别用二甲基亚讽、二甲基甲醜胺、己醇、异丙醇、己 膳溶解样品，对样品都易溶。二甲基亚讽、二甲基甲醜胺在液相色谱柱产生较大溶剂峰，且 容易残留在进样针和色谱柱中影响检测，考虑优先选择己醇或异丙醇。经考查发现，样品在 己醇和异丙醇溶液中放置一段时间都会发生分解，因此选择己膳溶解样品，现配现测。
[0026] 我们使用己膳作为样品的溶剂，分别配成0. 2mg/mL、l.Omg/mL和5mg/mL，虽然都 能进行分离，但是由于0. 2mg/mL的响应太小，而lOmg/mL的浓度太大不利于样品的分离，我 们最终选择1.Omg/mL作为供试品溶液的浓度。
[OOW]连施例2
[0028] 流动相种类及流速的选择：
[0029] 我们选择常用的正相液相色谱流动相体系：正己焼一异丙醇、正己焼一己醇、正庚 焼一异丙醇、正庚焼一己醇、环己焼一异丙醇、环己焼一己醇筛选，结果显示正己焼、环己焼 体系中样品主峰较宽，与杂质的分离度不能达到1. 5W上；正庚焼体系中主峰与杂质的分 离度都大于1.5,相比样品主峰的理论培板数，正庚焼一己醇体系高于正庚焼一异丙醇体 系，故选择正庚焼一己醇作为流动相体系。
[0030] 我们对流速进行了考察，0. 2-2. 0血/min该个范围都能实现技术方案，但是 0. 2mL/min的流速太慢，样品出峰时间太长，峰形过宽；2.OmL/min的流速导致样品出峰时 间过早，不能与杂质完全分离。选择1.OmL/min的流速可W实现合适的出峰时间，且分离度 达到要求。
[0031]连施例3
[0032] 1)仪器与检测条件
[0033] 美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由大赛端公司生产 的化iralpakIA手性分析柱（4.6X250mm，5ym);流动相比例正庚焼：己醇（95:5);柱温： 35°C;流速；1. 0血/min;检测波长；232nm;进样量；20yL。
[0034] 2)实验步骤
[0035] 精密称取4-[(4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷lOmg于lOmL容量瓶中，用己膳溶解， 稀释至刻度，混匀，得供试品溶液（Img/ml)。
[0036]连施例4
[0037]1)仪器与检测条件
[0038] 美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由大赛端公司生产 的ChiralpakIA手性分析柱（4.6X250mm，5ym);流动相比例正庚焼一己醇（70:30);柱 温；4(TC;流速；1. 0血/min;检测波长；232nm;进样量；20yL。
[00測 2)实验步骤
[0040] 精密称取4-[(4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷lOmg于lOmL容量瓶中，用己膳溶解， 稀释至刻度，混匀，得供试品溶液（Img/ml)。
[0041]连施例5
[0042] 1)仪器与检测条件
[0043] 美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由大赛端公司生产 的ChiralpakIA手性分析柱（4. 6X250mm，5ym);流动相比例正庚焼：己醇（85:15);柱 温；4(TC;流速