；1. 0血/min;检测波长；232nm;进样量；20yL。
[0044] 2)实验步骤
[0045] 精密称取4-[(4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷lOmg于lOmL容量瓶中，用己膳溶解， 稀释至刻度，混匀，得供试品液（Img/ml)。
[0046]连施例6
[0047] 1)仪器与检测条件
[0048] 美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由大赛端公司生产 的化iralpakIA手性分析柱（4. 6X250mm，5ym);流动相比例正庚焼一己醇8:2;柱温： 25°C;流速；1. 0血/min;检测波长；232皿；进样量；20yL。
[004引2)实验步骤
[0050] 精密称取4- [ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷lOmg于10血容量瓶中，用己膳溶解， 稀释至刻度，混匀，得供试品溶液（Img/ml)。
[00引]连施例7
[0052] 1)仪器与检测条件
[0053] 美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由大赛端公司生产 的化iralpakIA手性分析柱（4.6X250mm，5ym);流动相比例正庚焼一己醇7:3;柱温： 40°C;流速；1. 0血/min;检测波长；232nm;进样量；20yL。
[0054] 2)实验步骤
[005引精密称取4- [ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷lOmg于10血容量瓶中，用己膳溶解， 稀释至刻度，混匀，得供试品溶液（Img/ml)。
[0056] 不同流动相比例对分离度的影响见表1。
[0057] 表1流动相比例筛选
[0058]
[0059]
[0060] 从表1可W看出，当正庚焼一己醇为85:15时，4-[(4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷 和对氣苯胺的分离度达1. 93,分离效果最佳。
[0061] 连施例8
[0062] 1)仪器与检测条件
[0063] 美国Waters公司生产的E2695高效液相色谱仪，自动进样器，由大赛端公司生产 的ChiralpakIA手性分析柱（4. 6X250mm，5ym);流动相比例正庚焼一己醇85:15 ;柱温： 40°C;流速；1. 0血/min;检测波长；232nm;进样量；20yL。
[0064] 2)实验步骤
[0065] 2. 1系统适应性试验
[0066] 精密称取4-[(4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷、对羟基苯甲酵、对氣苯胺各lOmg分 别于10血容量瓶中，用己膳溶解，稀释至刻度，混匀，得3份供试品胆备溶液（Img/ml);从W 上3份溶液中各取2mL等体积混匀，作为系统适应性溶液。
[0067] 系统适应性试验结果；对羟基苯甲酵的保留时间为7. 818min、对氣苯胺的保留时 间为9. 147min、4-[ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷的保留时间为9. 845min;
[006引 4-[(4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷和对氣苯胺的分离度为2. 19,对羟基苯甲酵和 对氣苯胺的分离度为4. 17。
[0069] 表2系统适应性试验
[0070]
[0071] 2. 2重复性试验
[0072] 供试品溶液配制：精密称取4-[ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷lOmg置于10血容 量瓶中，用己膳溶解并稀释至刻度，混匀，得供试品溶液（Img/ml)。同法配制6份，在进样测 定前用己膳溶解并稀释至刻度。
[0073] 测定方法；精密量取供试品溶液20uL注入液相色谱仪进行测定，记录色谱图。 计算主峰4-[(4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷、对羟基苯甲酵、对氣苯胺峰面积和含量的 RSD%〇
[0074] 试验结果：结果显示，溶液的精密度良好，见表3。
[00巧]表3重复性试验结果
[0076]
[0077] 溶液稳定性试验
[0078] 供试品溶液配制：精密称取4-[ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷lOmg置于10血容 量瓶中，用己膳溶解并稀释至刻度，混匀，得供试品溶液（Img/ml)。在进样测定前用己膳溶 解并稀释至刻度。
[0079] 测定方法；精密量取供试品溶液20yL连续进样测定6次，每针运行30min，记录 色谱图。计算主峰4-[(4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷、对羟基苯甲酵、对氣苯胺的峰面积和 含量的RSD〇/〇。
[0080] 试验结果：表4结果显示，溶液稳定性较差，连续进样3小时内有关物质明显增加， 含量情况，即4-[ (4-氣苯基亚胺）甲基]-苯酷溶液易分解为两个原料，因此样品溶液须现 配现测。
[0081] 表4溶液稳定性试验结果
[0082]
【主权项】
1. 一种4-[(4_氟苯基亚胺）甲基]-苯酚的检测方法，其特征在于，该检测方法采用正 相液相色谱法，其色谱条件如下： 色谱柱：硅胶柱、氨基柱、氰基柱、苯基柱、手性柱； 流动相组成：正己烷（A)--异丙醇（B)、正己烷（A)--乙醇（B)、正庚烷（A)--异 丙醇（B)、正庚烷（A)--乙醇（B); 流动相配比（A:B) :95:5~70:30 ; 流动相流速：〇. 2-2. OmL/min ; 检测波长：200~400nm ; 柱温：25~40°C ; 检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器。2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，该检测方法色谱条件流动相优选组 成：正庚烷（A)--乙醇（B)。3. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，该检测方法色谱条件中流动相流速： I. 0-2. OmL/min〇4. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，该检测方法色谱条件中检测波长： 232nm。5. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，该检测方法色谱条件中柱温：40°C。6. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱选自Zorbax NH2 柱（4. 6 X 250mm，5 u m)、Spherisorb Silica 柱（4. 6 X 150mm，5 u m)、Spherisorb CN 柱（4. 6 X 150mm，5 u m)、Chiralpak AD-H 柱（4. 6 X 250mm，5 u m)、Chiralpak OJ-H 柱 (4. 6 X 250mm, 5 u m)、Chiralpak IA 柱（4. 6 X 250mm, 5 u m),最优选为 Chiralpak IA 柱 (4. 6 X 250mm, 5 u m)。7. 根据权利要求1-6任一项所述的检测方法，其特征在于，其色谱条件如下： 色谱柱：Chiralpak IA 柱（4.6X250mm，5iim); 流动相组成：正庚烷（A)--乙醇（B); 流动相配比（A:B) :85:15 ; 流动相流速：1. OmL/min ; 检测波长：232nm ; 柱温：40 C。8. 根据权利要求1-6任一项所述的检测方法，溶解供试品的溶剂为乙醇、异丙醇、乙 腈、二甲基亚砜（DMSO)、二甲基甲酰胺（DMF)，优选为乙腈。9. 根据权利要求1-6任一项所述的检测方法，供试品溶液的浓度为0. 2-5mg/mL，优选 为 L Omg/mL〇
【专利摘要】本发明提供了一种4-[(4-氟苯基亚胺)甲基]-苯酚的液相色谱检测方法，其色谱条件如下：色谱柱：硅胶柱、氨基柱、氰基柱、苯基柱、手性柱；流动相组成：正己烷（A）——异丙醇（B）、正己烷（A）——乙醇（B）、正庚烷（A）——异丙醇（B）、正庚烷（A）——乙醇（B）；流动相配比（A:B）：95:5～70:30；流动相流速：0.2-2.0mL/min；检测波长：200～400nm；柱温：25～40℃；检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器。该检测方法采用正相液相色谱法。本发明提供的检测方法具有较高的灵敏度和专属性，操作简捷，分离度符合标准，可快速准确的检测出4-[(4-氟苯基亚胺)甲基]-苯酚的有关物质和含量，可用于4-[(4-氟苯基亚胺)甲基]-苯酚的质量控制，这对于胆固醇吸收抑制剂——依折麦布的合成具有十分重要的意义。
【IPC分类】G01N30/06, G01N30/62, G01N30/02
【公开号】CN104977368
【申请号】CN201410129470
【发明人】郝英魁, 金松子, 吴学丹, 蒋庆峰
【申请人】天津药物研究院
【公开日】2015年10月14日
【申请日】2014年4月2日