一种同时快速检测饲料中9种有害物质的检测盘的制作方法_2

文档序号:8638834阅读:来源:国知局
、图4所不,一种冋时快速测定词料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉稀酮、伏马毒素、呕吐毒素、盐酸克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺、氯霉素和呋喃唑酮的检测盘,该检测盘包括一圆形盘体,盘体材料为PVC材料,所述盘体由上盘体I和下盘体3固定连接而成,所述上盘体中央有一个圆形加样孔2,加样孔2底部设有一个圆形样品垫I 4,所述样品垫I 4比加样孔2直径大1mm,所述下盘体3分为3个区域,分别为检测区I,检测区II和检测区III,所述的3个检测区分别用隔板14隔开,其中检测区I为霉菌毒素类检测区,包括黄曲霉毒素BI检测试纸条5、玉米赤霉烯酮检测试纸条6、伏马毒素检测试纸条7和呕吐毒素检测试纸条8 ;检测区II为瘦肉精类检测区,包括盐酸克伦特罗检测试纸条9、沙丁胺醇检测试纸条10和莱克多巴胺检测试纸条11 ;检测区III为抗生素类检测区,包括氯霉素检测试纸条12和呋喃唑酮检测试纸条13,所有检测试纸条共用样品垫I 4,且围绕样品垫I 4呈放射性环形阵列,每个检测试纸条的两侧用卡条15固定。
[0025]每种检测试纸条均由底板16、样品垫II 17、涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜18、包被膜19和吸水纸20组成,其中,包被膜19粘贴在底板16上面,在该包被膜19两端的上面分别粘贴涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维膜18和吸水纸20,在该涂覆胶体金颗粒标记抗体的玻璃纤维素膜18远离包被膜19的一端的上面粘贴样品垫II 17,在所述包被膜19的上面设有检测线22和质控线21,每种检测试纸条的吸水纸20位于所述环形阵列的径向外端,9种检测试纸条质控线21上均包被抗鼠抗体,所述包被膜19为硝酸纤维素膜。
[0026]黄曲霉毒素BI检测试纸条5中玻璃纤维膜18为涂覆胶体金颗粒标记抗黄曲霉毒素BI抗体,检测线22上包被黄曲霉毒素Bl-BSA偶联物,玉米赤霉烯酮检测试纸条6中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗玉米赤霉烯酮抗体,检测线上包被玉米赤霉烯酮-BSA偶联物,伏马毒素检测试纸条7中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗伏马毒素抗体,检测线上包被伏马毒素-BSA偶联物,呕吐毒素检测试纸条8中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗呕吐毒素抗体,检测线上包被呕吐毒素-BSA偶联物,盐酸克伦特罗检测试纸条9中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗盐酸克伦特罗抗体,检测线上包被盐酸克伦特罗-BSA偶联物,沙丁胺醇检测试纸条10中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗沙丁胺醇抗体,检测线上包被沙丁胺醇-BSA偶联物,莱克多巴胺检测试纸条11中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗莱克多巴胺抗体,检测线上包被莱克多巴胺-BSA偶联物,氯霉素检测试纸条12中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗氯霉素抗体,检测线上包被氯霉素-BSA偶联物,呋喃唑酮检测试纸条13中玻璃纤维膜为涂覆胶体金颗粒标记抗呋喃唑酮抗体,检测线上包被呋喃唑酮-BSA偶联物。
[0027]本实用新型所述检测盘采用间接竞争法,每种纸条均采用两条带显色的胶体金层析法制备,显带颜色为红色线条,具体制备工艺如下:
[0028](一)黄曲霉毒素BI检测试纸条5的制备:
[0029](I)胶体金溶液的制备:将双蒸水置磁力搅拌器上搅拌加热至沸腾,按终浓度为万分之二的量迅速加入浓度为1%的氯金酸溶液,煮沸5分钟;再按所加入氯金酸溶液1.8倍的体积量加入浓度为1%的柠檬酸三钠溶液,煮沸10分钟后,冷却至室温,用双蒸水定容至氯金酸终浓度为万分之二,常温避光保存备用。
[0030](2)金标抗体玻璃纤维膜的制备:用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7.5,按8Pg抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗黄曲霉毒素BI的单克隆抗体,混匀,静置5分钟;再按5%体积量加入浓度为10%的BSA溶液,混匀,静置5分钟;1000rpm离心30分钟,弃上清,沉淀用标记洗涤液洗涤一次,离心后弃上清,沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解,然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上,真空干燥3小时后,置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
[0031](3)硝酸纤维素包被膜的制备:在硝酸纤维素膜上喷涂黄曲霉毒素Bl-BSA偶联物及抗鼠IgG抗体,并呈两条线平行排列,分别形成所述的检测线和质控线,37°C烘干处理2小时,置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
[0032]检测线:调试喷膜仪,喷液量为?μ?/cm,用包被缓冲液稀释黄曲霉毒素Bl-BSA偶联物,浓度为0.5mg/mL,用喷膜仪喷涂划线。
[0033]质控线:调试喷膜仪,喷液量为?μ?/cm,用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体,浓度为1.0mg/mL,用喷膜仪喷涂划线。
[0034]包被膜上所划两条线应细致均匀,相邻两线间隔0.4cm。
[0035](4)大板组条:大板组条各组分规格(长X宽):底板:30cmX7.6cm ;样品垫II:30cmX3.0cm ;金标记抗体玻璃纤维膜:30cmX0.7cm ;硝酸纤维素包被膜:30cmX2.0cm ;吸水纸:30cmX3.2cm。
[0036]各组分按如下方法进行组条:将硝酸纤维素包被膜的底面粘贴在底板上,在该包被膜两端的上面粘贴金标记抗体玻璃纤维膜和吸水纸,在该玻璃纤维素膜远离包被膜的一端的上面粘贴样品垫II,组成大板。组装车间的湿度要控制在30%以下。
[0037](5)切条:用切条机将大板切成单份,每份宽度为4毫米,随机抽检,灵敏度能检出室内质控品,无非特异性条带。
[0038](二)玉米赤霉烯酮检测试纸条6的制备:
[0039](I)胶体金溶液的制备:同黄曲霉毒素BI胶体金溶液的制备。
[0040](2)金标抗体玻璃纤维膜的制备:用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7.5,按7Pg抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗玉米赤霉烯酮的单克隆抗体,混匀,静置5分钟;再按5%体积量加入浓度为10%的BSA溶液,混匀,静置5分钟;1000rpm离心30分钟,弃上清,沉淀用标记洗涤液洗涤一次,离心后弃上清,沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解,然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上,真空干燥3小时后,置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
[0041](3)硝酸纤维素包被膜的制备:在硝酸纤维素膜上喷涂玉米赤霉烯酮-BSA偶联物及抗鼠IgG抗体,并呈两条线平行排列,分别形成所述的检测线和质控线,37°C烘干处理2小时,置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
[0042]检测线:调试喷膜仪,喷液量为?μ?/cm,用包被缓冲液稀释玉米赤霉烯酮-BSA偶联物,浓度为0.7mg/mL,用喷膜仪喷涂划线。
[0043]质控线:调试喷膜仪,喷液量为?μ?/cm,用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体,浓度为1.0mg/mL,用喷膜仪喷涂划线。
[0044](4)大板组条:同黄曲霉毒素BI大板组条。
[0045](5)切条:同黄曲霉毒素BI切条。
[0046](三)伏马毒素检测试纸条7的制备:
[0047](I)胶体金溶液的制备:同黄曲霉毒素BI胶体金溶液的制备。
[0048](2)金标抗体玻璃纤维膜的制备:用5M碳酸钾调节胶体金溶液pH值至7.5,按7.5Pg抗体/毫升胶体金溶液的比例浓度加入抗伏马毒素的单克隆抗体,混匀,静置5分钟;再按5%体积量加入浓度为10%的BSA溶液,混匀,静置5分钟;1000rpm离心30分钟,弃上清,沉淀用标记洗涤液洗涤一次,离心后弃上清,沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗体保存液溶解,然后按每毫升溶液铺10平方厘米的量涂覆在玻璃纤维膜上,真空干燥3小时后,置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
[0049](3)硝酸纤维素包被膜的制备:在硝酸纤维素膜上喷涂伏马毒素-BSA偶联物及抗鼠IgG抗体,并呈两条线平行排列,分别形成所述的检测线和质控线,37°C烘干处理2小时,置装有干燥剂的密封袋中保存备用。
[0050]检测线:调试喷膜仪,喷液量为?μ?/cm,用包被缓冲液稀释伏马毒素-BSA偶联物,浓度为0.8mg/mL,用喷膜仪喷涂划线。
[0051]质控线:调试喷膜仪,喷液量为?μ?/cm,用包被缓冲液稀释抗鼠IgG多克隆抗体,浓度为1.0mg/mL,用喷膜仪喷涂划线。
[0052](4)大板组条:同黄曲霉毒
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