多种可选的可药用载体 (Remington' S Pharmaceutical Sciences第16版，Osol，A.(编辑）（1980))混合，W冻干组 合物或水溶液的形式制备本文所述的多特异性抗体的药物组合物。可药用载体一般在所利 用的剂量和浓度下对受体无毒性，且包括但不限于:缓冲剂，如憐酸、巧樣酸和其他有机酸； 抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸;防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化锭;氯己双锭;氯 节烧锭;节索氯锭;苯酪;下醇或节醇;对径基苯甲酸烷基醋，如对径基苯甲酸甲醋或丙醋； 邻苯二酪；间苯二酪;环己醇；3-戊醇；和间甲酪）；低分子量（少于约10个残基）多肤；蛋白 质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，如聚乙締化咯烧酬;氨基酸，如甘氨酸、 谷氨酷胺、天冬酷胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸;单糖、二糖和其他糖类，包括葡萄糖、甘露糖 或糊精;馨合剂，如抓TA;糖，如薦糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇;成盐抗衡离子，如钢;金属络 合物(例如Zn-蛋白质络合物）；和/或非离子型表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)。本文的示例 性可药用载体进一步包括间质药物分散剂，如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白 (sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，如巧UPH20(JHI YLENIDC潑,Baxter International，Inc.)。包括rhuP肥0的某些示例性sHASEGP和使用方法描述于美国专利公 开号2005/0260186和2006/0104968中。在一方面，将sHASEGP与诸如软骨素酶的一种或多种 附加的糖胺聚糖酶组合。
[0210] 示例性冻干抗体制剂/组合物描述于美国专利号6,267,958中。水性抗体制剂/组 合物包括描述于美国专利号6，171，586和WO 2006/044908中的那些，后一种制剂/组合物包 含组氨酸-乙酸缓冲液。
[0211] 本文公开的组合物还可W根据所治疗的具体适应症的需要包含一种W上活性成 分，优选相互无不利影响的具有互补活性的那些。运类活性成分W对预期目的有效的量适 宜地组合存在。
[021引活性成分可W包载在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微囊(例如，分别 为径甲基纤维素微囊或明胶微囊和聚-(甲基丙締酸甲醋)微囊）中、胶体药物递送系统（例 如脂质体、白蛋白微球、微乳、纳米颗粒和纳米囊(nanocapsule))中或粗滴乳状液中。运类 技术公开于Remington' S Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.(编辑）（1980)中。
[0213] 可W制备缓释制剂。缓释制剂的适宜的实例包括含有抗体的固体疏水聚合物的半 透性基质，该基质是成形物品的形式，例如膜或微囊。
[0214] 待用于体内施用的组合物通常是无菌的。无菌可W容易地例如通过滤过无菌滤膜 来达到。
[0215] 本文所用的"处理"（及其语法变形）指改变所处理的个体的自然过程的尝试中的 临床干预，且可W为了预防而进行或在临床病理的过程中进行。希望得到的处理作用包括 但不限于防止疾病的发生或复发、减轻症状、减少疾病的任意直接或间接的病理结果、防止 转移、降低疾病进展的速率、改善或缓和疾病状态及消退或改善的预后。在一些实施方案 中，用本发明的抗体来延迟疾病的发展或减慢疾病的进展。
[0216] 本发明的一个方面是包含本发明的多特异性抗体的药物组合物。
[0217] 本发明的另一个方面是本发明的多特异性抗体在制备药物组合物中的用途。
[0218] 本发明的另一个方面是用于制备包含本发明的多特异性抗体的药物组合物的方 法。
[0219] 在另一方面，本发明提供组合物，例如药物组合物，其包含与可药用载体配制在一 起的本发明的多特异性抗体。
[0220] 本发明的另一方面是该药物组合物用作药物。本发明的另一方面是该药物组合物 用于治疗癌症。
[0221] 本发明的另一方面是本发明的多特异性抗体用作药物。本发明的另一方面是本发 明的多特异性抗体用于治疗癌症。
[0222] 本发明的另一方面是本发明的多特异性抗体在制备药物中的用途。本发明的另一 方面是本发明的多特异性抗体在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
[0223] 本发明的另一方面是通过对需要运种治疗的患者施用本发明的多特异性抗体来 治疗患有疾病的患者的方法。本发明的另一方面是通过对需要运种治疗的患者施用本发明 的多特异性抗体来治疗患有癌症的患者的方法。
[0224] 本发明的药物组合物可W通过本领域已知的多种方法施用。如熟练的技术人员将 理解，施用的途径和/或方式将取决于希望得到的结果而不同。为了通过某些给药途径施用 本发明的化合物，可W有必要用防止其失活的材料包被化合物，或者与防止其失活的材料 共同施用化合物。例如，化合物可W在适当的载体(例如脂质体)或稀释剂中对个体施用。可 药用稀释剂包括盐水和水性缓冲溶液。药物载体包括无菌水溶液或分散体及用于临时制备 无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。运类介质和物质在药物活性物质中的用途为本领域 已知。
[0225] 本文所用的短语"肠胃外施用"指肠内和局部施用之外的施用方式，通常通过注 射，且非限制性地包括静脉内、肌内、动脉内、銷内、囊内、眼眶内、屯、内、真皮内、腹膜内、经 气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。
[0226] 本文所用的术语癌症指增生性疾病，如淋己癌、淋己细胞性白血病、肺癌、非小细 胞肺(NSCL)癌、支气管肺泡细胞肺癌、骨癌、膜腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子 宫癌、卵巢癌、直肠癌、肛区癌、腹部癌（stomach cancer)、胃癌（gastric cancer)、结肠癌、 乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食管癌、小肠 癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺 癌、膀脫癌、肾或输尿管癌、肾细胞癌、肾孟癌、间皮瘤、肝细胞癌、胆管癌、中枢神经系统 (CNS)寶生物、脊柱肿瘤、脑干神经胶质瘤、多形性胶质母细胞瘤、星细胞瘤、施万细胞瘤、室 管膜瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、鱗状细胞癌、垂体腺瘤和尤因肉瘤，包括任意W上癌症的 难治形式、或一种或多种W上癌症的组合。
[0227] 运些组合物还可W包含佐剂，如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。可W通过上文 的灭菌流程及通过包含多种抗细菌和抗真菌剂(例如对径苯甲酸醋、=氯叔下醇、苯酪、山 梨酸等)二者来确保防止微生物的存在。还可W希望在组合物中包含等渗剂，例如糖、氯化 钢等。此外，可W通过包含延迟吸收的物质如单硬脂酸侣和明胶来产生可注射药物形式的 延长吸收。
[0228] 无论选择何种给药途径，都通过本领域技术人员已知的常规方法将本发明的化合 物(其可W适宜的水合形式使用)和/或本发明的药物组合物配制为可药用剂型。
[0229] 为了获得对就具体患者、组合物和施用方式达到希望得到的治疗反应有效而对患 者没有毒性的活性成分量，本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可W不同。所 选择的剂量水平将取决于多种药代动力学因素，其包括所利用的本发明的具体组合物的活 性;给药途径;施用时间;所利用的具体化合物的排泄速率;处理持续时间；与所利用的具体 组合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料;所处理的患者的年龄、性别、体重、状态、一 般健康和过往病史;和医学领域公知的类似因素。
[0230] 组合物必须无菌，且为流体，至可通过注射器递送组合物的程度。除水外，载体优 选等渗缓冲盐溶液。
[0231] 可W例如通过使用诸如卵憐脂的包衣、在分散体的情况下通过维持所需的颗粒大 小及通过使用表面活性剂，来维持恰当的流动性。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗 剂，例如糖、多元醇(如甘露醇或山梨醇)和氯化钢。
[0232] 提供W下实施例和附图来辅助理解本发明，本发明的真正范围在所附权利要求中 给出。应理解，可W在所示流程中进行修改而不背离本发明的精神。
[0233] 3.本发明的具体实施方案
[0234] 下文中列出本发明的具体实施方案：
[0235] 1.多特异性抗体，其包含：
[0236] a)两条修饰重链，其中各重链按C端至N端方向包含重链恒定结构域3、2和UCH3、 C肥和CH1)及轻链可变结构域(VL)，其中该轻链可变结构域(VL)是共同轻链的可变结构域；
[0237] b)-条修饰轻链，其中该修饰轻链按C端至N端方向包含K同种型的恒定轻链结构 域(CL)，和源自特异性结合第一抗原的抗体的可变重链结构域(VHi);和
[0238] C)-条修饰轻链，其中该修饰轻链按C端至N端方向包含A同种型的恒定轻链结构 域和源自特异性结合第二抗原的抗体的可变重链结构域(VH2);
[0239] 其中该可变结构域V出和化形成特异性结合第一抗原的第一抗原结合部位，且其 中该可变结构域V出和VL形成特异性结合第二抗原的第二抗原结合部位。
[0240] 2.实施方案1的抗体，其中该抗体是双特异的。
[0241] 3.实施方案I或2的抗体，其中该抗体是二价的。
[0242] 4.前述实施方案中任一个的抗体，其中该抗体是双特异的和二价的。
[0243] 5.前述实施方案中任一个的抗体，其中该抗体属于IgGi或IgG4亚类。
[0244] 6.前述实施方案中任一个的抗体，其中该抗体属于I gGi亚类。
[024引7.前述实施方案中任一个的抗体，其中该抗体属于IgG4亚类。
[0246] 8.前述实施方案中任一个的抗体，其中该修饰重链包含在其氨基酸序列上100% 同一的化-CHl结构域。
[0247] 9.前述实施方案中任一个的抗体，其中未通过氨基酸取代改变该多特异性抗体的 重链恒定结构域C册来支持异二聚化。
[0248] 10.前述实施方案中任一个的抗体，其中未按照巧入白技术通过氨基酸取代改变 该多特异性抗体的重链恒定结构域CH3来支持异二聚化。
[0249] 11.前述实施方案中任一个的抗体，其中该多特异性抗体的重链恒定结构域CH3在 其氨基酸序列上100%同一。
[0250] 12.前述实施方案中任一个的抗体，其中：
[0251] a)该修饰重链按C端至N端方向由CH3-CH2-较合部-CHl-化组成，其中该化是共同 轻链的可变结构域；
[0252] b)第一修饰轻链按C端至N端方向由K同种型的恒定轻链结构域(CL),和源自特异 性结合第一抗原的抗体的可变重链结构域(VHi)组成;和
[0253] C)第二修饰轻链按C端至N端方向由A同种型的恒定轻链结构域(CL)和源自特异性 结合第二抗原的抗体的可变重链结构域(VH2)组成。
[0254] 13.用于制备前述实施方案中任一个的多特异性抗体的方法，其包括步骤：
[0255] a)用包含编码前述实施方案中任一个的多特异性抗体的核酸分子的表达载体转 化宿主细胞；
[0256] b)在允许合成该多特异性抗体分子的条件下培养该宿主细胞;和
[0257] C)从该培养物回收该多特异性抗体分子。
[0258] 14.实施方案13的方法，其中用=种不同表达载体转化该宿主细胞，其中第一表达 载体包含编码含有K同种型的恒定轻链结构域的修饰轻链的核酸分子，其中第二表达载体 包含编码含有A同种型的恒定轻链结构域的修饰轻链的核酸分子，其中第=表达载体包含 编码修饰的重链的核酸分子。
[0259] 15.核酸，其编码实施方案1至12中任一个的抗体的轻链。
[0260] 16.核酸，其编码实施方案1至12中任一个的抗体的重链。
[0261] 17.核酸，其编码实施方案1至12中任一个的多特异性抗体。
[0262] 18.表达载体，其包含实施方案15至17中任一个的核酸。
[0263] 19.实施方案18的表达载体，其能够在原核或真核宿主细胞中表达该核酸。
[0264] 20.宿主细胞，其包含实施方案18或19的表达载体。
[0265] 21.实施方案20的宿主细胞，其中该宿主细胞包含=种不同表达载体，其中第一表 达载体包含编码含有K同种型的恒定轻链结构域的修饰轻链的核酸分子，其中第二表达载 体包含编码含有A同种型的恒定轻链结构域的修饰轻链的核酸分子，其中第=表达载体包 含编码修饰的重链的核酸分子。
[0266] 22.实施方案20或21的宿主细胞，其中该宿主细胞是真核的或原核的。
[0267] 23.实施方案20或21的宿主细胞，其中该宿主细胞是真核的。
[0268] 24.实施方案20或21的宿主细胞，其中该宿主细胞是原核的。
[0269] 25.用于产生基于特异性结合第一抗原的第一抗体和特异性结合第二抗原的第二 抗体的多特异性抗体的方法，其中该第一抗体和该第二抗体包含共同轻链，该方法包括步 骤：
[0270] a)通过用源自该第一抗体的重链的重链可变结构域（V出）取代轻链可变结构域 (VL)和可选地用K同种型的恒定轻链结构域取代原来的恒定轻链结构域，来修饰源自该第 一抗体的轻链，W获得按C端至N端方向包含K同种型的恒定轻链结构域和重链可变结构域 (VHi)的轻链；
[0271] b)通过用源自该第二抗体的重链的重链可变结构域(V出）取代轻链可变结构域 (VL)和可选地用A同种型的恒定轻链结构域取代原来的恒定轻链结构域，来修饰源自该第 二抗体的轻链，W获得按C端至N端方向包含A同种型的恒定轻链结构域和重链可变结构域 (V出）的轻链；
[0272] C)通过用源自该第一抗体的轻链的轻链可变结构域（VL)取代重链可变结构域 (V化），来修饰源自该第一抗体的重链，W获得按C端至N端方向包含重链恒定结构域3、2和1 (C册、C肥和CHl)及轻链可变结构域(VL)的重链;和/或
[0273] 通过用源自该第二抗体的轻链的轻链可变结构域（VL)取代重链可变结构域 (V出），来修饰源自该第二抗体的重链，W获得按C端至N端方向包含重链恒定结构域3、2和1 (C册、C肥和CHl)及轻链可变结构域(VL)的重链。
[0274] 26.实施方案25的方法，其用于产生实施方案1至12中任一个的多特异性抗体。
[0275] 27.多特异性抗体，其通过实施方案25或26的方法获得。
[0276] 28.药物组合物，其包含与至少一种可药用赋形剂组合的实施方案1至12和26中任 一个的多特异性抗体。
[02W] 29.实施方案28的药物组合物，其中该药物组合物包含治疗有效量的多特异性抗 体。
[0278] 30.实施方案1至12和26中任一个的多特异性抗体，其用作药物。
[0279] 31.实施方案1至12和26中任一个的多特异性抗体，其用于治疗癌症。
[0280] 32.实施方案28或29的药物组合物，其用作药物。
[0281 ] 33.实施方案28或29的药物组合物，其用于治疗癌症。
[0282] 34.实施方案1至12和26中任一个的多特异性抗体的用途，用于制备药物。
[0283] 35.实施方案1至12和26中任一个的多特异性抗体的用途，用于制备用于治疗癌症 的药物。
[0284] 36.用于治疗需要治疗的患者的方法，其特征在于对该患者施用治疗有效量的实 施方案1至12和26中任一个的多特异性抗体。
[0285] 37.用于治疗需要治疗的癌症患者的方法，其特征在于对该患者施用治疗有效量 的实施方案1至12和26中任一个的多特异性抗体。
[0286] 序列描述
[0287] 沈Q ID N0:1修饰重链CH3-CH2-CH1-化（化C-Fc cross-Mab)的核巧酸序列，其中 VL是共同轻链的可变结构域
[028引 SEQ ID NO: 2修饰轻链的核巧酸序列，该修饰轻链包含由CU-VHi-CU组成的多 肤，其中V化是来自结合第一抗原的抗体的可变重链结构域（[抗-DR5 2A11 VHi]-化K)
[0289] SEQ ID N0:3修饰轻链的核巧酸序列，该修饰轻链包含由CU-VHi-CU组成的多 肤，其中V化是来自结合第一抗原的抗体的可变重链结构域（[抗-DR5 8E11 VHi]-化K)
[0290] SEQ ID N0:4修饰轻链的核巧酸序列，该修饰轻链包含由CU-VHi-CU组成的多 肤，其中V化是来自结合第一抗原的抗体的可变重链结构域（[抗-DR5 21C11 VHi]-化K)
[0291] SEQ ID NO:5修饰轻链V出-CU的核巧酸序列，其中V出是来自结合第二抗原的抗体 的可变重链结构域（[抗-FAP 3C6 V出]-化入）
[0292] SEQ ID ^:6修饰重链邸3-邸2-邸1-化的氨基酸序列，其中化是共同轻链的可变 结构域（化C-Fc crosS-Mab)
[0293] SEQ ID N0:7修饰轻链的氨基酸序列，该修饰轻链包含由化K-V出-化K组成的多 肤，其中V化是来自结合第一抗原的抗体的可变重链结构域（[抗-DR5 2A11 VHi]-化K)
[0294] SEQ ID N0:8修饰轻链的氨基酸序列，该修饰轻链包含由化K-V出-化K组成的多 肤，其中V化是来自结合第一抗原的抗体的可变重链结构域（[抗-DR5 8E11 VHi]-化K)
[0295] SEQ ID N0:9修饰轻链的氨基酸序列，该修饰轻链包含由化K-V出-化K组成的多 肤，其中V化是来自结合第一抗原的抗体的可变重链结构域（[抗-DR5 21C11 VHi]-化K)
[0296] SEQ ID NO: 10修饰轻链V出-CU的氨基酸序列，其中V出是来自结合第二抗原的抗 体的可变重链结构域（[抗-FAP 3C6 V出]-化入）
[0297] 实施例1
[0298] 共同轻链文库(CLCL)的产生和结合剂产生
[0299] 产生了用于隧菌体展示的文库，使其全部多样性位于重链中。从来自之前的人源 化项目的已有抗体选择轻链(WO 2013/026832中所述的抗-MCSP抗体1X007(1X007人源化抗 体ML1VL)的人源化轻链）。
[0300] 选择两种不同重链包含在此文库中。第一种是DP47,另一种是DP88QMGT检索号分 别为IGHV3-23 * Ol和IGHV1-69 * 06) J元件分别为 JH4(FDYWGQGTLVTVSS)和 JH6 (MDAWGQGTTVTVSS)。用所述基于立核巧酸构件的随机化引物（Virnekis等；Nuc 1 ei C Acids Res. 1994 Dec 25;22(25) :5600-7.)多样化两种重链的CDR3。对于对应于D元件(氨 基酸95-98、95-100或95-lOOb)的序列，两个文库中CDR3环的长度为4、6或8个氨基酸长。抗 体文库W化b型式克隆在常规M13隧菌体展示系统中（de化ard等;Journal of Biological Chemistry 274卷，26期，1999年6月25日，18218-18230页）。