28]在要将作为蛋白质200的抗CD3抗体固相化的情况下，抗CD3抗体的固相化浓度优选设为10?300ng/cm2。这是因为，若使抗CD3抗体的固相化浓度为lOng/cm2以上，则能够有效地使淋巴细胞活化，然后能够高效地使淋巴细胞增殖。另一方面，若抗CD3抗体的固相化浓度大于300ng/cm2，则抗⑶3抗体漂浮在培养袋100内的培养液中，有时对淋巴细胞造成过量的刺激，因此不优选。
[0129]作为本实施方式中的溶解蛋白质的液滴，没有特别限定，但可以适当地使用磷酸缓冲液。
[0130]另外，本实施方式中的溶解有蛋白质的液滴的大小(液滴量)优选设为Icc?20cc。这是因为，当液滴在培养袋100的内表面移动时，在液滴与内表面之间产生摩擦力，因此若液滴的大小过小，则无法适宜地进行移动。另外，若液滴过大，则液滴中的蛋白质浓度降低，并且液滴的每单位体积的气液界面的面积减少，因此吸附效率降低。从这样的观点出发，更优选将液滴的大小设为Icc?1cc，进一步优选设为Icc?5cc，更进一步优选设为2cc左右。
[0131]本实施方式中，作为封入到培养袋100的气体，没有特别限定，但优选设为不活泼气体，可以使用空气、氮气等。例如可以利用气体供给装置经由管130将这样的气体注入到培养容器100。
[0132]另外，封入到培养袋100的气体的量更优选设为每Icm2的培养袋100内的底面积为
0.1?4ml，进一步优选设为I?3ml。若使所封入的气体的量为这样的范围，则能够防止培养袋100的内表面中相对的容器壁发生接触，因此能够使溶解有蛋白质200的液滴在培养袋100内高效地移动。
[0133]培养袋100例如可以如下所述地进行制造。
[0134]首先，使用塑料挤出成形装置将低密度聚乙烯挤出成形，形成膜。然后，使用脉冲热封机由该膜制造培养袋100。如图10所示，培养袋100以装有管130的方式进行制造。
[0135]然后，将培养袋100载置于装载台，封入规定量的气体，并且接着封入溶解有蛋白质200的缓冲液。然后，通过摇动培养袋100等方式，使缓冲液的液滴在培养袋100内的底面上移动。由此，可以使缓冲液中含有的蛋白质200附着到培养袋100内的底面上，得到固相化有蛋白质200的培养袋100。
[0136][固相化装置]
[0137]然后，参照图11?图15对能够在本实施方式的培养容器的制造方法中适当地使用的本实施方式的固相化装置、和该固相化装置中使用的保持构件进行说明。图11示出固相化装置的俯视图，图12示出其主视图。图13示出利用固相化装置的固相化的样子。图14示出保持单元的主视图和侧视图，图15示出保持单元的使用形态。
[0138]图11中，下侧示出固相化装置300的正面侧，上侧示出固相化装置300的背面侧，左侧示出固相化装置300的左侧，右侧示出固相化装置300的右侧。另外，该图中，将左右方向(后述的装载台的长边方向)设为X轴方向，将上下方向(同装载台的短边方向)设为Y轴方向。
[0139]固相化装置300具备X轴方向移动用支承台310、和Y轴方向移动用支承台360。培养袋100中封入溶解有蛋白质的液滴和规定量的气体后载置于Y轴方向移动用支承台360。这些X轴方向移动用支承台310与Y轴方向移动用支承台360—体地进行运动。以下，有时将X轴方向移动用支承台310和Y轴方向移动用支承台360总称为装载台。
[0140]X轴方向移动用支承台310通过固定于基台400而立设的二个支承柱320在长边方向的中央在正面侧和背面侧这两侧得到支承。
[0141]另外，X轴方向移动用支承台310经由X轴方向移动用齿轮箱340与X轴方向移动用伺服电动机330(长边方向移动用驱动单元)连接。
[0142]通过驱动该X轴方向移动用伺服电动机330，由此X轴方向移动用支承台310能够以Y轴方向为中心轴左转和右转交替地进行旋转运动。由此，X轴方向移动用支承台310可以左右地进行所谓的跷跷板运动。
[0143]因此，载置于装载台的培养袋100内的溶解有蛋白质的液滴可以在培养袋100内从左端至右端左右地进行往复运动。
[0144]此时，X轴方向移动用支承台310的旋转运动的角度相对于水平方向可以设为例如-10°?+ 10°的范围。此外，图11、12中，将左侧变高时称作负(_)，将右侧变高时称作正(+ )。
[0145]另外，X轴方向移动用支承台310的旋转运动的速度可以设为如下的速度:使培养袋100内的溶解有蛋白质的液滴例如以5m/分钟?15m/分钟的速度在培养袋100内进行移动的速度。
[0146]Y轴原点限度检测传感器350用于检测Y轴的原点和限度。
[0147]Y轴方向移动用支承台360通过立设于X轴方向移动用支承台310的左右端部的二个支承部在短边方向的中央在左侧和右侧这两侧受到支承。
[0148]另外，Y轴方向移动用支承台360经由Y轴方向移动用齿轮箱380与Y轴方向移动用伺服电动机370(短边方向移动用驱动单元)连接。
[0149]通过驱动该Y轴方向移动用伺服电动机370，由此Y轴方向移动用支承台360能够与X轴方向移动用支承台310—起以X轴方向为中心轴左转和右转交替地进行旋转运动。由此，装载台可以左右地(图11中为上下地)进行所谓的跷跷板运动。
[0150]因此，载置于装载台的培养袋100内的溶解有蛋白质的液滴可以在培养袋100内从下端至上端地进行移动。
[0151]此时，Y轴方向移动用支承台360的旋转运动的角度相对于水平方向可以设为例如-50°?+50°的范围。此外，图11中，将正面侧变高时称作负(_)，将背面侧变高时称作正(+ )。
[0152]另外，期望液滴沿Y轴方向的移动每次以液滴的大小以下的距离进行。通过这样地使液滴在Y轴方向上移动、并且在X轴方向上在培养袋100内从左端至右端地移动，由此能够使液滴移动到培养袋100内的整个底面，能够使液滴中含有的蛋白质高效地吸附到培养袋100。
[0153]X轴原点限度检测传感器390用于检测X轴的原点和限度。
[0154]然后，对使用了本实施方式的固相化装置300的培养袋100的制造方法进行说明。
[0155]首先，将培养袋100载置于装载台后封入规定量的空气，接着注入溶解有蛋白质的液滴。然后，驱动Y轴方向移动用伺服电动机370，如图13所示，以X轴方向为中心轴使装载台向正面侧旋转移动，使液滴移动到培养袋100内的正面侧端部。
[0156]然后，驱动X轴方向移动用伺服电动机330，以Y轴方向为中心轴，使装载台左右地旋转运动，从而使液滴在培养袋100内在左端与右端之间左右地移动。
[0157]然后，驱动Y轴方向移动用伺服电动机370，使装载台向背面侧稍微旋转移动，使液滴向背面侧稍稍移动，然后，再次驱动X轴方向移动用伺服电动机330，使装载台左右地旋转运动，从而使液滴在培养袋100内在左端与右端之间左右地移动。重复进行以上的动作，直至液滴移动到培养袋100内的背面侧端部，从而在左端与右端之间左右地移动。
[0158]这样地使用固相化装置300使蛋白质吸附到培养袋100内，由此能够进一步提高蛋白质的固相化效率。
[0159]此外，本实施方式的固相化装置300不仅能够适合地用于在培养袋100中将蛋白质固相化的情况，也能够适合地用于在烧瓶、其他容器中将蛋白质固相化的情况。
[0160]然后，对本实施方式的固相化装置中使用的保持构件进行说明。
[0161]保持构件为用于以使培养容器的底面形成半圆筒形状的方式保持培养容器的构件，保持构件被固定于装载台，或者与装载台一体地形成。
[0162]如图14所示，保持构件500具备主体部510、上盖部520和挤压部530。
[0163]主体部510具备用于使培养袋100弯曲地保持的半圆筒形状的凹部510-1。上盖部520覆盖该凹部510-1地安装于主体部510。上盖部520向主体部510的安装方法没有特别限制，例如可以进行螺丝固定。
[0164]在上盖部520安装有用于从外面挤压培养袋100的挤压部530。通过使该挤压部530向下方移动，由此对配置于主体部510的凹部510-1的培养袋100进行挤压，从而能够使培养袋100的底面稳定地呈半圆筒形状。
[0165]关于挤压部530向上盖部520的安装，只要能够使挤压部530向下方移动从而挤压培养袋100，则没有特别限定，例如可以通过将上盖部520与挤压部530螺丝缔合。
[0166]另外，挤压部530的形状并不限定为图14所示的棒状，也可以为其他形状。例如，也优选使挤压部530的下方前端部分枝、或者为使下方呈曲面的半球状，由此将培养袋100的底面进一步稳定地维持为半圆筒形状。
[0167]另外，图14中示出在上盖部520安装了3个挤压部530的状态，但挤压部530的安装个数没有特别限制，也可以为I个、2个或4个以上。
[0168]图15示出保持构件500的使用形态，示出了使培养袋100保持于保持构件500的样子。
[0169]首先，在保持构件500的主体部510的凹部510-1配置培养袋100。此时，以使培养袋100的底面沿凹部510-1成为曲面的方式进行配置。
[0170]然后，在主体部510安装上盖部520，使挤压部530向下方移动。由此，能够将培养袋100的底面维持为半圆筒形状。
[0171]保持构件500以使凹部510-1的半圆筒形状的中心轴的方向与装载台的长边方向为相同方向的方式固定于固相化装置300的装载台后使用。另外，也可以以这样的位置关系将保持构件500与装载台一体地形成。
[0172]将培养袋100的底面维持为半圆筒形状地保持于这样的保持构件500、并使培养袋100内的液滴沿Y轴方向移动时，液滴通常位于保持构件500中凹部510-1的最下部，因此能够精密地控制液滴在Y轴方向上的移动。
[0173]如以上所说明的，根据本发明的培养容器的制造方法，能够将蛋白质高效地固相化于培养容器内表面，能够缩短固相化所需要的时间，并能够提高向培养容器的吸附率，能够以少量的蛋白质进行必要量的固相化。因此，能够降低未固相化而被废弃的蛋白质量。另夕卜，通过使用本实施方式的固相化装置，能够更进一步提高蛋白质的固相化效率。进一步，通过使用保持构件，能够更精密地控制液滴的移动，能够更进一步提高蛋白质的固相化效率。
[0174]实施例
[0175]以下参照图6和图7对本发明的实施方式所涉及的培养容器、和淋巴细胞的培养方法的实施例和比较例进行说明。图6为示出实施例和比较例的示意图，图7为示出实施例和比较例的实验结果的图表的图。此外，图6为用于示出实施例和比较例的区别的图，省略了培养部容积的扩大。
[0176][实验1:培养容器的制造]
[0177](实施例1)
[0178]使用LaboPlasto Mill(株式会社东洋精机制作所制)作为塑料挤出成形装置，将低密度聚乙烯挤出成形，成形出厚度ΙΟΟμπι的膜。然后，使用脉冲热封机，用该膜制作IlcmX22.5cm(约225cm2)的袋，对该袋进行γ射线灭菌后供于实验。
[0179]然后，在该袋中封入空气约600ml，并且接着封入溶解有50yg的抗CD3抗体(Miltenyi B1tec株式会社制)的磷酸缓冲液(Japan Life Technologies株式会社制)10ml。此时，以使磷酸缓冲液的液滴仅与袋内表面的一面(固相化面)接触的方式进行。
[0180]然后，在26°C的条件下手动摇动袋I分钟，使磷酸缓冲液的液滴以1m/分钟的速度在袋内的底面上移动，在袋内形成固相化面，制造培养容器。
[0181]此外，制造2个该培养容器，一个用于固相化浓度的测定，另一个用于淋巴细胞的培养试验。其他实施例和比较例也与此相同。
[0182]以下述方式进行固相化浓度的测定。
[0183]首先，除去培养容器内的液体，使固相化面与包含I%十二烷基硫酸钠(日本西格玛奥德里奇合同会社制)的磷酸缓冲液(同上)500μ1接触，静置30分钟后，用Present Mixer(Tietech株式会社制)施加强振动，剥离所吸附的抗体。使用Micro BCATM Protein AssayKit