。通过反相色谱法(胖曰16'3 869可曰4 018柱）使用160护此0 (0-50%)作为洗脱剂纯化反应混合物。将包含产品的级分组合、浓缩至干燥并冻干W得到 化合物 25(280mg)。计算的 C6 讯 i〇8NaN3〇27 的 m/z = 1326.7。实测值=1348.7(Μ+Ν3)</Η-Μ? (400MHz，D2〇):S4.94(d，J = 4.0Hz，lH)、4.81(dd，J = 6.8Hz，J = 3.2Hz，lH)、4.43(d，J = 8.4Hz，lH)、3.90(br t，J=9.2Hz，1H)、3.81-3.78(m，3H)、3.75-3.71(m，2H)、3.70-3.67(m， 2H)、3.65-3.58(m，46H)、3.54-3.52(m，2H)、3.48(br t，J = 6.0Hz，lH)、3.36(br d，J = 9.6Hz，IH)、3.29(s，3H)、3.27-3.18(m，5H)、2.43(t，J = 6.0Hz，2H)、2.25(bt，J = 12.4Hz， IH)、2.08-2.05(m，IH)、1.97(s，3H)、1.79-1.76(m，2H)、1.68-1.2119-1.04(m， 細）、0.86-0.76(111，甜）。参见图10。
[0227]化合物45的合成:将化合物25(300mg)溶解于3mL DMF中。在室溫下加入二异丙基 乙胺(60μυ和HATU(131mg)。揽拌5分钟后，逐滴加入二甲胺（2.3mL，2M的THF溶液）。将反应 在室溫下揽拌1小时。将反应混合物在真空下浓缩至干燥。将残余物溶解于水中并装载于 lOg的C-18柱上。用水接着用1/1水/MeOH洗脱提供化合物45(100mg)。计算的C62Hii4N4〇26的m/ z = 1330.8。实测值 = 1353.6(M+Na)。lH匪R 400MHz(D20，设置为4.80邮m)δ0.87(t，J = 7.6Hz，3H)、0.94-0.99(m，2H)、1.20-1.25(m，4H)、1.25(d，J=6.4Hz，3H)、1.26-1.45(m， 4H)、1.52-1.73(m，細）、1.79-1.88(m，3H)、2.00(s，3H)、2.11-2.19(br d，lH)、2.33(tt，J= 12.4Hz，J = 3.2Hz，lH)、2.53(t，J = 6.4Hz，2H)、2.95(s，3H)、3.06(s，3H)、3.28(t，J = 12.5Hz，lH)、3.31-3.38(m，8H)、3.51-3.54(m，2H)、3.61(dd，J = 8.0Hz，J = 0.8Hz，lH)、3.63 (dd，J = 8.0Hz，J = 2.0Hz，lH)、3.70(s，44H)、3.73-3.76(m，lH)、3.78(t，J = 6.0Hz，lH)、 3.81-3.82(m，lH)、3.88(dd，J = 8.0Hz，J = 3.6Hz，lH)、3.99(bs，lH)、4.54(dd，J = 8.細z，J = 2.0Hz，2H)、4.91(q J = 6.細z，lH)、5.04(dJ = 3.細z，lH)。
[0。引化合物26的合成:如化合物25(参见图ID)所描述的合成化合物26，除了PEG反应物 具有η为8(即，8个PEG重复单元)而不是如化合物25的合成的12。
[0。9] 化合物26:
[0230]
[023。计算的C5抽93化023的m/z = 1127.6。实测值=1151.6(M+Na)</H NMR 600ΜΗζ(020,设 置为4.67卵m)d 0.71 (t，J = 7.2Hz，3H)、0.76(br quin, J= 12.0Hz，2H)、0.99-1.06(m，4H)、 1.08(d，J = 6.6Hz，3H)、1.15-1.19(br quin，J = 6.細z，lH)、1.21-1.25(m，2H)、l. 39-1.48 (m，甜）、1.50-1.60(m，3H)、l.70(brd，J=10.2Hz，2H)、1.91(s，3H)、1.99(m，lH)、2.16(brt， J = 12.6Hz，1H)、2.36( t，J =細z，2H)、3.11-3.15(m，2H)、3.18( t，J = 9.6Hz，3H)、3.22(s， 3H)、3.38(dd，J = 7.8Hz，J = 4.2Hz，2H)、3.46(dd，J = 4.2Hz，lH)、3.47(s，lH)、3.52-3.55(m 27H)、3.56-3.59(m，3H)、3.61-3.64(m，3H)、3.65(d，J = 3.6Hz，lH)、3.72(dd，J= 10.2Hz，J = 3.0Hz，lH)、3.80(d，J = 2.4Hz，lH)、3.85(br s，lH)、3.94(dd，J = 9.6Hz，J = 3.Wz，lH)、 4.36(br s，lH)、4.77(q，J = 6.細z，lH)、4.88(d，J = 4.2Hz，lH)。
[0232] 化合物27的合成:如图2所述合成化合物27。 脚引 化合物27 ：
[0234]
[02对将化合物19(0.05g)溶解于C出Cl2(10mU中。在室溫下在揽拌下向此溶液中加入Pd [(Ph3)P]4(5mg)、Bu3SnH( 0.0011血)和（CF3CO) 2〇(0.0015mL)。在室溫下持续揽拌30miη。将反 应混合物减压蒸发至干燥并通过柱色谱(硅胶)纯化残余物W得到化合物27A(0.030g)。
[0236] W如化合物21所描述的完全相同的方式，用10%Pd-C使化合物27A(0.025g)经历 氨化并在过滤催化剂后蒸除溶剂。如化合物22所描述的，将残余物用含化OMe的MeOH处理， 用IR-12(KH+)树脂中和，过滤并蒸除溶剂。通过反相(C18)HPLC纯化残余物W得到化合物27 (7mg)。计算的C33也2的0化的m/z = 759.3。实测值=782.3 (M+Na)。 脚7] 化合物28的合成: 脚引 化合物28:
[0239]
[0240]
[0241]
[0242] 将可商购获得的化合物27B (0.014g)溶解于DMF (ImL)中。向此溶液中加入DIPEA (0.00175mL)和HATU(0.038g)并将反应混合物在室溫下揽拌2min。加入化合物23(0.035g) 并将反应混合物在室溫下揽拌化。蒸除溶剂并通过HPLC(C18)纯化残余物W得到化合物28 (17mg)。
[02创化合物29的合成:
[0244] 化合物29:
[0248] W如化合物28所描述的完全相同的方式，将可商购获得的化合物27C(0.021g)与 化合物23(0.035g)反应并通过HPLC(C18)纯化W得到化合物29(0.020邑）。
[0249] 实施例2
[0250] E-选择素活性一一结合测定
[0251] 筛选和表征E-选择素的糖模拟物括抗剂的抑制测试是竞争性结合测试，其允许测 定IC50值。通过在37°C解育2小时将E-选择素/Ig嵌合体固定在96孔微量滴定板中。为了降低 非特异性结合，将牛血清白蛋白添加至各个孔并在室溫解育2小时。洗涂板，并且在生物素 化的sLea聚丙締酷胺与链亲和素/辣根过氧化酶的偶联物的存在下将测试化合物的系列稀 释物添加至孔中，并且在室溫下解育2小时。
[0252] 为了测定洗涂后结合至固定的E-选择素的sLea的量，添加过氧化酶底物一-3， 3 '，5，5 '四甲基联苯胺(TMB)。3分钟后，通过添加出P〇4使酶反应停止，并且测定在450nm波长 的光吸收。测定了抑制50%的结合所需要的测试化合物的浓度并且报道为如下方表格所示 的各个糖模拟物E-选择素括抗剂的IC50值。在下列表格中提供本文公开的示例性化合物的 ICso 值。
[0253] 糖模拟物化合物的E-选择素括抗剂活性 [0 巧 4]
[0255] 除了报告如上测量的ICso的绝对值，通过测量的测试化合物的ICso和各个测定指 定的内对照(参照）的IC50的比率测定IC50的相对值(rICso)。
[0256] 用Ξ氣甲基(-CF3)基团对化合物22中R3位置的甲基基团的取代没有显著地改变化 合物22的E-选择素括抗剂的活性;然而，取代的确增加了分子的疏水性，从而改善糖模拟物 化合物的生物利用率。
[0巧7]实施例3
[0258] 粘膜炎测定一-肠的重量
[0259] 在第0天和第10天，用150mg/kg 5-氣尿喀晚（5-FU)腹膜内（ip)处理小鼠（C57bl/ 6)。在第二次注射5-即后，用E-选择素括抗剂(20mg/kg的盐水溶液，ip，每日两次)或单独用 盐水(0.15M NaCl)处理小鼠4天。随后将小鼠处死并将小肠去除并称量W测定炎症的程度。 图3示出了显示代表性实施例的结果的数据。
[0260] 实施例4
[0%1 ]粘膜炎测定一一肠的巨隧细胞浸润
[0262]使小鼠经历全身照射(S.OGy)并紧接着用E-选择素括抗剂（20mg/kg的盐水溶液， ip，每日两次)或单独用盐水(0.1 5M化C1)处理6天。在第6天将小肠去除并消化W释放细 胞。通过流式细胞术测定来自小肠的CDUb卞4/80+巨隧细胞的数量。图4示出了显示代表性 实施例的结果的数据。
【主权项】
1. 治疗和/或预防粘膜炎的方法，其包括对有此需要的个体施用有效量的至少一种选 自以下的化合物:E-选择素拮抗剂、E-选择素拮抗剂的药物可接受的盐、E-选择素拮抗剂的 前药和E-选择素拮抗剂的前药的药物可接受的盐。2. 如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种化合物是糖模拟物。3. 如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种化合物选自式(I)的E-选择素拮抗剂：式（I)的E-选择素拮抗剂的药物可接受的盐、式（I)的E-选择素拮抗剂的前药，以及式 (I)的E-选择素拮抗剂的前药的药物可接受的盐， 其中 R1选自8烷基、C2-8烯基、C2- 8炔基、8卤代烷基、C2-8卤代烯基和C2-適代炔基； R2选自 H、-M 和-L-M; R3选自8烷基、C2-8烯基、C2- 8炔基、8卤代烷基、C2-8卤代烯基和C2-適代炔基； R4选自-OH和-NZt2，其中Z1和Z2独立地选自H、Ch烷基、C 2-8烯基、C2-8炔基、Ch卤代烷 基、C2-8卤代烯基和C2-8卤代炔基，Z 1和Z2可以是相同的或不同的，其中Z1和Z2可以连接在一 起以形成环； R5选自C3-8环烷基； R6选自-OH、Ci-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、Ci-8卤代烷基、C 2-8卤代烯基和C2-適代炔基； R7选自-CH2OH、8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、8卤代烷基、C 2-8卤代烯基和C2-適代炔基； R8选自8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、8卤代烷基、C2-8卤代烯基和C 2-適代炔基； L选自连接基团；以及 Μ是非糖模拟物部分，其选自聚乙二醇、噻唑基、色烯基，-c( = 0 )NH(CH2) P4NH2、&-8烷基 和-c ( = Ο) ΟΥ，其中Y选自Ci-4烷基、C2-4烯基和C2-4炔基。4. 如权利要求3所述的方法，其中妒、妒、1?6、1?7和1?8中的至少一个选自&-適代烷基。5. 如权利要求4所述的方法，其中各个Ci-s卤代烷基独立地选自-0^、-(^2-(012)"-CH 2X、-CHX2、-CH2-(CH2 )m-CHX2、-CX3和-CH2- (CH2 )m-CX3基团，其中各个m独立地选自 1 至6的整 数并且各个X独立地选自F、C1、Br和I。6. 如权利要求5所述的方法，其中至少一个X是F。7. 如权利要求5所述的方法，其中至少一个&―適代烷基选自-CH2X、-CHX2和-CX 3基团。8. 如权利要求7所述的方法，其中X是F。9. 如权利要求6所述的方法，其中R4是N (CH3) 2。10. 如权利要求9所述的方法，其中Z选自&-適代烷基。11. 如权利要求10所述的方法，其中所述&-適代烷基选自CH2X。12. 如权利要求11所述的方法，其中X是F。13. 如权利要求3所述的方法，其中R5是环己基。14. 如权利要求3所述的方法，其中R2是聚乙二醇。15. 如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种化合物具有下式：其中η选自1至100的整数。16. 如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种化合物具有下式：17. 如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种化合物具有下式：18. 如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种化合物具有下式：19. 如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种化合物具有下式：20. 如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中施用所述至少一种化合物减少患者患 有粘膜炎的天数。21. 如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述粘膜炎是口腔粘膜炎、食道粘膜 炎和/或胃肠道粘膜炎。22. 如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述粘膜炎是消化道粘膜炎。23. 如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述粘膜炎是食道粘膜炎。24. 如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述粘膜炎是胃肠道粘膜炎。25. 如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述粘膜炎是口腔粘膜炎。26. 如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述个体患有癌症。27. 如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述个体患有头颈癌、乳腺癌、肺癌、 卵巢癌、前列腺癌、淋巴癌，白血病和/或胃肠道癌症。28. 如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述粘膜炎与放射治疗和/或化学治 疗相关。29. 如权利要求1至19中任一项所述的方法，还包括施用有效量的维拉夫明和/或帕利 夫明。30. 如权利要求1至19中任一项所述的方法，还包括施用有效量的至少一种另外的选自 以下的化合物:MMP抑制剂、炎性细胞因子抑制剂、肥大细胞抑制剂、NSAID、NO抑制剂和抗菌 化合物。31. 如权利要求1至19中任一项所述的方法，还包括施用至少一种药物可接受的成分。
【专利摘要】治疗和/或预防粘膜炎的方法，其包含对有此需要的个体施用有效量的至少一种选自以下的化合物：E-选择素拮抗剂、E-选择素拮抗剂的药物可接受的盐、E-选择素拮抗剂的前药和E-选择素拮抗剂的前药的药物可接受的盐，以及包含至少一种此类化合物的组合物。
【IPC分类】A61K31/7034, C07H15/207
【公开号】CN105683208
【申请号】
【发明人】约翰·L·麦格纳尼, 约翰·M·彼得逊, 英格里德·G·文克勒
【申请人】糖模拟物有限公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2014年9月29日