专利名称：用于提高家畜产品的芳氧基丙醇胺的制作方法
背景技术：
畜牧业中一个重要的目标是开发可以增加从家畜中获得的肉的数量和提高肉的质量的生物活性剂。
＂增加从家畜中获得的食物的数量＂是指，尤其是指，促进家畜生长，增加用于喂养家畜的饲料利用率和/或增加家畜瘦肉产量。能产生这些效果的生物活性剂通常被称为＂合成代谢剂＂。
＂提高从家畜中获得的食物的质量＂是指，尤其是指在保持肌肉内脂肪的同时减少肉中皮下脂肪的数量。皮下脂肪通常称为＂修整脂肪＂，可能会在食用大量肉的人体中引起胆固醇和/或甘油三酯的量升高，它的营养价值极小，而且可能降低肉的总产率。因此，人们希望能从肉中减少或消除这类脂肪。另一方面，肌肉内脂肪通常称为＂五花肉＂，绝对有助于保持肉的香味和肉的高质量等级。因此，五花肉是一种所希望的品质。适当脂解的生物活性剂可以在保持肌肉内脂肪的同时减少皮下脂肪。
看来，某些出版物已经大略公开了芳基丙醇胺类，例如US5 013761和WO97/10825。但是，需要有一种生物活性剂，其既合成代谢强，又能适当脂解。具有这些性质的生物活性剂可以用于家畜以通过增加肉的产率(提高成品等级)而提高肉产品的经济效益。具有这些性质的生物活性剂还可以通过生产高质量等级的肉而增加肉产品的收益性，所述高质量等级肉因为其食用更健康并能保持肉的香味，因此肉联厂主和消费者可能认可其具有相对高的价格。
发明简述业已发现由结构式(I)表示的芳氧基丙醇胺中B环的2位上存在酰胺基时，如下文所示，会产生具有强的合成代谢性能的化合物。相应的在4位上带有酰胺基的区域异构体的合成代谢很明显要低。例如，用2-酰胺区域异构体处理的牛中表征合成代谢作用的血清尿素氮含量(SUN)的减少百分数比起用相应的4-酰胺区域异构体处理的动物中血清尿素氮含量的减少百分数要大(参见实施例17中表1)。另外，用2-酰胺区域异构体处理的牛中表征脂解效果的游离脂肪酸含量(NEFA)适当，而用4-酰胺区域异构体处理的牛通常则显示出更强的增加(见实施例17中表1)。
另外，已经发现由结构式(I)表示的芳氧基丙醇胺中B环的2位上存在酰胺基时，如下文所示，会得到一种化合物，当在雄性童子鸡28天喂饲期，特别是在其生存期的第35-49天期间，用所述化合物饲喂这些小鸡时，能使小鸡体重增加显著加快(参见实施例20的表4)。而且，可以观察到一种趋势，即在整个28天喂饲期内饲料转化率得到了提高。最后，对于经处理过的禽类，相对于对照例，以下畜体参数也显示出显著的增加热胴体重量；带骨的，带皮的整条腿重量；以及带骨的，带皮的胸肉重量(参见实施例20的表4)。
基于这些结果，本发明公开提高家畜肉产品的新化合物以及新方法。
本发明的一个实施方案是由结构式(I)表示的化合物 和其生理学可接受的盐；其中R1为取代或未取代的芳基，但条件是当-X-为-CH-时，R1不是取代的或未取代的咔唑基；R2和R3独立地为氢，C1-C4直链或支链烷基；R4和R5独立地为氢，C1-C4直链或支链烷基，或与和其相连的氮原子一起作为非芳族杂环；X为-N-或-CH-；和环A和环B还独立地不被取代或被一或二个取代基取代。
本发明的另一个实施方案是由结构式(II)表示的化合物 和其生理学可接受的盐在结构式(II)中，R1为取代或未取代的芳基；R2-R5以及环A-B与上面描述的结构式(I)相同。
本发明的另一个实施方案是增加从家畜中获得的肉的数量和提高肉质量的方法。该方法包括给予动物有效量的一种或多种由结构式(I)或(II)表示的化合物或其生理学可接受的盐。
本发明的化合物具有强的合成代谢性能和适中的脂解功能。因此，这些化合物可以施于家畜以增加从该动物中获得的肉的数量。它们也可通过在保持肌肉内脂肪的同时减少皮下脂肪的量来提高肉的质量。因此，本发明的化合物可用于生产更大量的食用更健康的，同时保持正常肉味，即保持五花肉和高质量等级的肉，并因此可以增加肉产品的收益性。本发明的化合物意欲用于处理健康动物。
图4示出用如下方法处理二十八天后牛的校正的第十二肋骨膘厚曲线a)每天每公斤体重0.0毫克化合物6；每天每公斤体重0.125毫克化合物6；每天每公斤体重0.250毫克化合物6；和每天每公斤体重0.5毫克化合物6；图5示出用如下方法处理二十八天后牛的平均肋部眼肌面积曲线a)每天每公斤体重0.0毫克化合物6；每天每公斤体重0.125毫克化合物6；每天每公斤体重0.250毫克化合物6；和每天每公斤体重0.5毫克化合物6；图6示出用如下方法处理二十八天后牛的畜体软组织组成曲线a)每天每公斤体重0.0毫克化合物6；每天每公斤体重0.125毫克化合物6；每天每公斤体重0.250毫克化合物6；和每天每公斤体重0.5毫克化合物6；图7示出用如下方法处理二十八天后的牛肉的计算成品等级曲线a)每天每公斤体重0.0毫克化合物6；每天每公斤体重0.125毫克化合物6；每天每公斤体重0.250毫克化合物6；和每天每公斤体重0.5毫克化合物6；图8示出用如下方法处理二十八天后的牛肉的构造分数曲线a)每天每公斤体重0.0毫克化合物6；每天每公斤体重0.125毫克化合物6；每天每公斤体重0.250毫克化合物6；和每天每公斤体重0.5毫克化合物6；发明详述本发明目的在于提供一种由结构式(I)或(II)表示的化合物。也包括通过给予家畜一种或多种本发明的化合物而提高畜牧产品的方法。
在一个优选实施方案中，本发明的化合物由结构式(III)表示
R1如以上结构式(II)所定义。优选，R1由结构式(IV)，(V)，(VI)，(VII)或(VIII)表示 环C-环I独立地是取代或未取代的。优选，环C-环I是未取代的。
芳基包括碳环芳香基，例如苯基，1-萘基，2-萘基，1-蒽基和2-蒽基，和杂芳基，例如N-咪唑基，2-咪唑基，2-噻吩基，3-噻吩基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基，2-嘧啶基，4-嘧啶基，2-吡喃基，3-吡喃基，3-吡唑基，4-吡唑基，5-吡唑基，2-吡嗪基，2-噻唑基，4-噻唑基，5-噻唑基，2-噁唑基，4-噁唑基和5-噁唑基。
芳基也包括其中一个碳环芳环或杂芳环与一个或多个其它杂芳环稠合的稠合多环芳环体系。例子包括1-苯并咪唑啉基，2-苯并咪唑啉基，1-亚氨苄基噻唑啉基，2-亚氨苄基噻唑啉基，1-咔唑基，2-咔唑基，3-咔唑基，4-咔唑基，3-吲唑基，4-吲唑基，5-吲唑基，6-吲唑基，2-苯噻吩基，3-苯并噻吩基，2-苯并呋喃基，3-苯并呋喃基，2-吲哚基，3-吲哚基，2-喹啉基，3-喹啉基，2-苯并噻唑基，2-苯并噁唑基，2-苯并咪唑基，2-喹啉基，3-喹啉基，1-异喹啉基，3-喹啉基，1-异氮茚基和3-异氮茚基。如在本发明中使用的，术语芳基也包括其中一个或多个碳环芳环和/或杂芳环稠合到环烷基或非芳族杂环上的基团。
非芳族杂环是在环中包括一个，两个或三个选自氮，氧和硫的杂原子的能提供稳定结构的非芳族碳环。所述环可以是五、六、七或八元环。例子包括2-四氢呋喃基，3-四氢呋喃基，2-四氢噻吩基，3-四氢噻吩基，2-吗啉代，3-吗啉代，4-吗啉代，2-硫代吗啉代，3-硫代吗啉代，4-硫代吗啉代，1-吡咯烷基，2-吡咯烷基，3-吡咯烷基，1-哌嗪基，2-哌嗪基，1-哌啶基，2-哌啶基，3-哌啶基，4-哌啶基和4-噻唑烷基。
如在本发明使用的，脂族基包括直链、支链或环状的C1-C20的完全饱和或包含一个、两个或三个不饱和单元的烃基。
脂族基、芳族基(碳环和杂芳基)、非芳族杂环或苄基上适合的取代基是那些不显著降低化合物合成代谢作用或改变化合物脂解效果的基团。例子包括-OH、卤素(-Br、-Cl、-I和-F)、-OR、-O-COR、-CN、-NO2、-COOH、-NH2、-NHR、-NR2、-COOR、-COR、-CHO、-CONH2、-CONHR、-CONR2、-SH、-SR和-NH-C(＝NH)-NH2。R为C1-C6烷基、苄基或苯基。
取代的非芳族杂环还可以具有＝O、＝S、＝NH或＝NR作为取代基，其中R如上定义。取代的脂族、取代的芳族、取代的非芳族杂环或取代的苄基基团可以含有一个、两个或三个取代基。
本发明公开的化合物的生理学可接受的盐包括由结构式(I)、(II)和(III)表示的化合物，也包括表1所示的化合物的盐。盐可以由含有酸性官能团的那些化合物与适合的碱反应形成。这种盐包括来源于如铵的无机碱以及碱金属和碱土金属氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等的盐和来源于碱性有机胺，如脂族和芳香族胺、脂族二胺、羟烷基胺等的盐。因此，用于制备本发明盐的碱包括氢氧化铵、碳酸钾、碳酸氢钠、氢氧化钙、甲胺、二乙胺、乙二胺、环己胺、乙醇胺等。
由于胺片断，本发明公开的化合物的盐也可以通过与适合的酸反应进行制备。通常用于形成盐的酸包括无机酸，如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸和磷酸，以及有机酸，如对甲苯磺酸、甲基磺酸、草酸、对溴苯基磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、安息香酸、乙酸和相关的无机和有机酸。因此，这种生理学可接受的盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸单氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、醋酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐，琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、2-丁炔-1，4-二酸盐、3-己炔-2，5-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、羟基苯酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、马尿酸盐、β-羟基丁酸盐、甘醇酸酯、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐等。优选氯化铵、草酸铵、乙酸铵和4-羟基苯甲酸铵盐。特别优选的是化合物6的乙酸铵和4-羟基苯酸铵盐。
在本发明描述的结构式中，化学基团或片断连接到分子或化合物其余部分的键用以下符号来表示 例如，在结构式(IV)-(VIII)中，相应的符号表示双环体系的苯环连接到由结构式(I)、(II)或(III)表示的分子的3位氧原子上的键。
本发明包括结构式I化合物的溶剂合物及其生理学可接受的盐。本发明具体的化合物或其生理学可接受的盐可以与水或常见的有机溶剂形成溶剂合物。这种溶剂合物包括在本发明化合物的范围内。
另外，应该理解，对于结构式I化合物来说可能存在非对映体，并且，取决于取代基，还可能存在其它非对映体。本发明的化合物包括两种或多种非对映体以及各自的立体异构体的混合物。
也应该理解，一些杂环可能以互变异构形式存在。所有这些形式均包括在本发明的范围内。
家畜是为了生产食物而喂养的动物。反刍类或＂反刍咀嚼＂动物，如奶牛、公牛、小母牛、阄公牛、绵羊、水牛、野牛、山羊以及羚羊均是家畜的例子。家畜的其它例子包括猪和禽(即家禽)，如鸡、鸭、火鸡和鹅。家畜的其它例子还包括水产养殖的鱼、牡蛎和甲壳类动物。也包括用于产生食物的外来品种动物，如鳄鱼、水牛和平胸类鸟(如鸸鹋、美洲鸵或鸵鸟)。本发明的方法优选用于反刍动物，如奶牛、小母牛、公牛和阄公牛、以及禽，如鸡、火鸡和鸭。
本发明化合物的＂有效量＂是指一定的量，当给予家畜这一量的化合物时，从所述动物中获得的肉的数量和/或质量增加。
增加所得肉的数量指的是与不进行处理的动物相比，能促进处理过的动物有更大的生长量。或者，增加所得肉的数量指的是促进瘦肉的形成。促进瘦肉形成是指，例如当与不进行处理的动物相比，进行处理的结果是有更高的肌肉脂肪比。或者，增加所得肉的数量指的是提高饲料利用效率。相对于没有进行处理的动物来说，当所处理的动物消耗每一定量的食物体重增加能够更多时，我们就说饲料利用更加有效。
提高肉的质量指的是提高所述动物的胴体品质。提高胴体品质是指，例如在保持肌肉内脂肪(质量等级)的同时，形成更少的脂肪组织(皮下脂肪)和/或更多的瘦肉(提高成品等级)。因此提高胴体品质通常会形成食用更加健康的肉，如很少会引起甘油三酯和/或胆固醇含量升高，同时还保持肉的香味。
本发明使用的＂适中的脂解剂＂意味着能使血液中非酯化脂肪酸含量的改变为约1-500、优选约1-300的化合物。
给予动物的有效量在某种程度上将随待处理的具体的动物品种和所使用的具体的活性成分的不同而变化，但通常每日摄食量总数为约0.2-约1000ppm(ppm毫克化合物/公斤饲料)。这种用量将提供的剂量为约0.002-50毫克/公斤体重。一个优选实施方案使用了约0.5-200ppm，更优选约1-40ppm。例如，当在动物，如反刍动物或猪中实施所述方法时，化合物将以日饲料配给大约1-100ppm的量被加入到日饲料配给中。
本发明的方法优选通过经口服施予家畜有效量的本发明化合物而实施。可以使用其它给药途径，例如通过卵、鼻内(如通过鼻内喷雾器)或皮下、肌内或静脉注射的方式。但是，这些途径是不太经常使用的。
对经口服给药来说，本发明的化合物优选与适合的载体或通常用于畜牧业的稀释剂混合。含有本发明化合物的动物饲料被作为本发明的另一个实施方案。通常用于饲料的载体和稀释剂包括玉米粉、玉米棒渣、豆饼、苜蓿草粉、稻壳、大豆磨渣、棉籽油粉、骨粉、碾谷、玉米棒子粉、麦麸、灰石、磷酸二钙、氯化钠、尿素、干烧酒糟、维生素和/或矿物混合物、甘蔗糖蜜或其它液体载体等。这种载体促进活性成分的均匀分布，更一般的含量为饲料的约20-98wt％。
虽然对经口服给药施予本发明化合物来说，优选的方法是经由每日饲料配给，但该化合物可以被引入到盐块和矿物质舐砖中，以及为方便经口摄食而直接加入连接水槽制剂或饮用水中。另外，为长期长效，化合物也可以与多晶型材料、蜡等进行配制，并仅仅作为需要以丸剂或片剂给予动物以保持所希望的每日需求的活性成分。化合物也可以通过填喂法处理经口服施用和/或经皮肤施用。
对肠胃外给药法，本发明的化合物可以与通用的载体混合，如水、丙二醇、聚乙二醇、N-甲基吡咯烷酮、甘油甲缩醛、玉米油、芝麻油、硬脂酸钙、聚合物材料等。这种制剂可以模制成丸，以针剂或缓释皮下植入物、持续的反刍传送设备或鼻内设备的形式施用。这种给药方式可以按需要经常使用以确保适当的活性成分剂量以获得想要的促进增长率和瘦肉及饲料转化率的提高。
本发明化合物可以通过在Bell等人的WO97/10825、Crowell等人的WO98/09625、US5 808 080和US6 046 227中公开的方法进行制备。这些参考文献全部在此引入作为参考。制备这些化合物的反应流程显示在如下的方案I和II中方案I
方案II 在方案I和II中，R1-R5，X和环A-B如上所述。
在方案I和II中，环氧化物的胺化在本领域公知的进行这类反应的条件下进行。例如，环氧化物可以与胺在室温到反应混合物的回流温度下的醇中，优选在乙醇中相结合。例如，反应通常在Atkins等人在Tetrahedron Letters，272451，(1986)中描述的条件下进行，所述文献全部在此引入作为参考。用于环氧化物与胺反应的具体条件的例子见实施例5。
方案II中表示的水解反应可以按照本领域公知的方法进行，使用例如多磷酸、H2O2和二甲亚砜中的K2CO3，H2O2和氢氧化铵，H2O2和氢氧化钠，氢氧化钾和叔丁醇、或水和HCl。用于腈水解的具体条件的例子见实施例6。
制备表1化合物6的优选方法包括用由以下结构式(b)表示的胺胺化由以下结构式(a)表示的环氧化物 其中R6为甲基或乙基，然后用氨酰胺化COOR6基团以形成化合物6。根据这种方法用于合成化合物6的具体条件的例子见实施例13-15。
可以存在对方案I和II有干扰的取代基，条件是它们首先被转化为受保护的形式。适合的保护基对于本领域技术人员来说是已知的，公开于Green和Wuts的＂有机合成中的基团保护＂，John Wiley and Sons，1991一书中，该文献在此引入作为参考。
本发明化合物的单独的旋光活性异构体可以由其各自的旋光活性前体通过如上所述方法或通过拆分外消旋混合物而进行制备。所述拆分可以通过用手性试剂衍生随后用色谱法或反复结晶法而实施。通过标准方法除去手性助剂可以获得本发明化合物或其前体的基本上旋光纯的异构体。关于拆分的更详细的资料可以从Jacques等人的＂Enantiomers，Racemates，and Resolutions＂，John Wiley & Sons，1981一书得到。
在本发明化合物的合成中用作起始原料的化合物是公知的，对于非市售的化合物，可以通过本领域普通技术人员通用的标准方法很容易地进行合成。
通过以下实施例说明本发明，但这并不意味着对本发明任何方式的限定。实施例实施例14-[(2S)-环氧乙基甲氧基]-1H-吲哚的制备 在N2保护下，在室温下将粉末K2CO3(40克，289mmol，300目)加入到含H2O(4毫升)的二甲亚砜(DMSO)(200毫升)中，搅拌混合物30分钟。将4-羟基吲哚(25.2克，189mmol)加入到该混合物中(微温升到27℃)，搅拌混合物10分钟。加入(S)缩水甘油基nosylate(50.0克，193mmol，98.5％ee)(轻微的吸热)。浆液在20-25℃搅拌30分钟，在25-27℃搅拌23小时，直到反应完成。用丙酮(400毫升)稀释混合物，然后过滤。滤饼用丙酮(400毫升)洗涤，合并滤液并在真空下将其浓缩到体积大约为250毫升，保持温度低于35℃。冰水浴下，在大约2小时内将浓缩液逐滴加入到温度为15-20℃的去离子水(650毫升)中。在此温度下将产品浆液搅拌1小时，然后在5-10℃下搅拌30分钟。过滤分离固体，用冷的去离子水(150毫升)对其进行洗涤。在真空下，35℃温度下干燥固体，得到30.3克产品。
在室温下，向以上粗产品(30.3克，171mmol)的CH2Cl2(100毫升)溶液中加入硅胶62(1.6克，0.05％wt/wt)，N2保护下，将浆液搅拌1小时。然后混合物被真空过滤，滤饼用CH2Cl2(20毫升)漂洗。室温下，1小时内，向滤液中逐滴加入庚烷(500毫升)以沉淀产品。所得浆液在室温下搅拌30分钟，然后再于0-5℃下搅拌30分钟。过滤混合物，并用冷的庚烷(150毫升)漂洗，再于35℃/5 Torr下真空干燥，得到26.5克产品(收率79％)，熔点72.4-74.0℃，然后将其固化并在79.8-81.3℃下重新熔融。实施例24-(2-甲基-2-硝基丙基)苯酚的制备 在室温、机械搅拌条件下，向2-硝基丙烷(260毫升，2.90摩尔)，4-羟基苄基醇(65.0克，524mmol)的二甘醇二甲醚(260毫升)溶液中加入叔丁醇钾(29.6克，264mmol)。加入期间反应温度从25℃升高到39℃。加热反应混合物到回流状态并于大约137℃下搅拌6小时，用Dean-Stark分水器除去形成的水(馏出液总体积28毫升，7mL水相)，冷却到室温后，向反应液中加入去离子水(325毫升)和乙酸乙酯(520毫升)。分离各相，用去离子水(2×325毫升)洗涤有机相。通过旋转蒸发器在78℃下浓缩有机相得到181.2克油，该油溶于甲醇(65毫升)以用于下一步反应。通过1H NMR分析，所得溶液的浓度为56.3wt％(收率99.6％)。
实施例34-(2-氨基-2-甲基丙基)苯酚乙酸盐的制备 向N2脱气的4-(2-甲基-2-硝基丙基)苯酚(45.0克，230mmol)的甲醇(450毫升)溶液中加入5％的Pd/C(13.5克50％的水润湿的催化剂，以干燥催化剂计为15wt％)。用氢气将混合物加压到35-40psi，并在剧烈搅动下将其加热到60℃。当反应完成时(大约6小时)，混合物被冷却到室温，谨慎地通过Hy-流动助滤剂过滤除去催化剂。用50℃的甲醇(135毫升)洗涤滤饼，合并滤液，并通过旋转蒸发将其浓缩到净重大约120克。用乙酸乙酯(500毫升)稀释浓缩液，在30分钟内，向所得溶液中加入乙酸(14.2克，235mmol)的乙酸乙酯(250毫升)溶液。所得浆液在室温下搅拌2小时。过滤浆液，用乙酸乙酯(2×100毫升)洗涤固体。产品在65℃/5Torr下真空干燥24小时得到46.5克(89.6％)的白色结晶固体，熔点209-215.9℃。实施例42-[4-(2-氨基-2-甲基丙基)苯氧基]-3-腈基吡啶的制备 在装有机械搅拌器、带有冷凝器的Dean-Stark分水器、和热电偶的三颈烧瓶中，放入4-(2-氨基-2-甲基丙基苯酚乙酸盐(50.78克，0.23摩尔)，2-氯烟碱腈(32.8克，0.24摩尔)和K2CO3粉末(77.7克，0.56摩尔)。向该固体中加入N，N-二甲基乙酰亚胺(609毫升)和异辛烷(2，2，4-三甲基戊烷，122毫升)。Dean-Stark分水器中加入异辛烷，用N2对体系进行吹扫。然后在强烈搅拌下将体系加热到回流并保持回流1小时。然后在1小时内将橄榄绿的反应混合物冷却到30℃，用滤纸将混合物过滤。用DMAC(250毫升)洗涤滤饼，80℃下在家用真空条件下对滤液进行汽提1.5小时，得到稠的深绿色的油。该油在二氯甲烷(580毫升)中处理并用去离子水(1160毫升)洗涤。分离各层，有机层用更多的水(250毫升)洗涤。然后有机层与水(1升)混合，用25毫升浓HCl将其pH调节到大约为1。分离各层，水/产品层用二氯甲烷(250毫升)洗涤。然后水相与二氯甲烷(1升)混合，并用5N NaOH将其pH调节到12-13。分离各层，有机层用Na2SO4干燥，过滤并汽提，得到棕色固体产品(53克，88％，用HPLC分析＞99％，HPLC条件SB-C18柱，40/60的乙腈、0.1％三氟乙酸水溶液的恒溶剂混合物，产品保留时间为3.3分钟)。取20克产品，用甲苯(60毫升)和庚烷(200毫升)进行重结晶，得到用于分析表征的样品，熔点91.0-94.5℃，C16H17N30的计算值C，71.89；H，6.41；N、15.72。元素分析值C，71.20；H，6.38；N，15.61。实施例5(S)-2-[4-[2-[2-羟基-3-(1H-吲哚-4-基氧)丙基氨基]-2-甲基丙基]-苯氧基]-3-吡啶腈，盐酸盐的制备 在装有冷凝器、氮气进口、机械搅拌器和热电偶的三颈圆底烧瓶中放入4-[(2S)-环氧乙烷基甲氧基]-1H-吲哚(8.5克，44.9mmol，98.5％ee)，2-[4-(2-氨基-2-甲基丙基)-苯氧基]-3-腈基吡啶(21.01克，78.6mmol)和异丙醇(255毫升)。N2保护下，反应加热回流(78℃)17小时。然后将溶液冷却到室温并搅拌1小时。冷却的混合物通过Hy-Flo助滤剂(16.5克)过滤，滤饼用异丙醇(43毫升)洗涤。50℃下，完全真空条件下将滤液浓缩到净重55克。向浓溶液中加入乙酸乙酯(85毫升)，所得溶液在相同条件下浓缩到净重52克。然后浓缩液导入乙酸乙酯(230毫升)中，加入2.5wt％/vol NaCl溶液(150ml)。剧烈搅拌两相系统，并用冰醋酸将其pH调节到7.2。分离各相，用2.5％盐水(2×50毫升)萃取有机相。依次用NaOH/NaCl溶液(50毫升，0.89克NaOH)和水(50毫升)洗涤有机相。
盐的形成在以上提到的条件下将有机相浓缩到净重40克。浓缩物用乙酸乙酯稀释，并共沸汽提得到44.9克干燥溶液。然后将溶液平均分成三部分，三分之一的溶液浓缩到14克(约6.83克游离碱)。考虑到产品浓缩物中的剩余溶剂，向浓缩物中加入足够量的乙酸乙酯(40毫升)和乙醇(18.7毫升)以使溶液中乙醇与乙酸乙酯的比例为1/3.5，稀释因子为12.3毫升/克产品。使溶液回流并用0.5N HCl的乙酸乙酯(约30.7毫升)溶液将pH调节到3.5。现在，溶液中乙醇与乙酸乙酯的比例大约为1/4.3，稀释因子大约为14.5毫升/克产品。将溶液冷却到室温并搅拌15小时，此时将溶液在冰浴中冷却并在0℃搅拌3小时。然后过滤浆液，用冷1∶4乙醇/乙酸乙酯(10毫升)洗涤晶体。产品在真空，50℃下干燥过夜，得到5.5克(75％)的白色结晶固体，熔点188.8-191.0℃。C27H29ClN4O3计算值C，65.78；H，5.93；Cl，7.19；N，11.36。元素分析值C，65.59；H，6.12；Cl，7.25；N，11.36。
剧烈搅拌含有MTBE(80mL)的两相系统，用1N NaOH溶液将以上处理得到的酸性含水水萃取液的pH调节到12-13。分离各层，有机萃取液用Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到固体，收率80-90％。实施例6由(S)-2-[4-[2-[2-羟基-3-(1H-吲哚-4-基氧)丙基氨基]-2-甲基丙基]-苯氧基]-3-吡啶腈盐酸盐制备游离碱化合物6 在装有氮气进口、机械搅拌器和热电偶的三颈圆底烧瓶中放入(S)-2-[4-[2-[2-羟基-3-(1H-吲哚-4-基氧)丙基氨基]-2-甲基丙基]-苯氧基]-3-吡啶腈盐酸盐(10克，20.3mmol)和DMSO(70毫升)。反应在室温下搅拌30分钟以保证完全溶解。将溶液置于冷水浴中，并在10分钟内加入2.2N NaOH(10毫升，22mmol)，保持温度低于35℃。搅拌30分钟后，在40分钟内，以七等分加入30％H2O2水溶液(2.71毫升)，同时保持温度低于35℃。30分钟后反应完成。在15分钟内向反应混合物中分4部分加入Na2SO3的水溶液(1.60克，12.7mmol溶于35毫升水中形成的溶液)，同时保持反应温度低于35℃。15分钟后，稠溶液中检验不到过氧化物。加入乙酸乙酯(75毫升)，溶液搅拌30分钟。另外加入乙酸乙酯(100毫升)和H2O(100毫升)，并分离各相。有机相用H2O(100毫升)进行洗涤。合并水相，用乙酸乙酯(100毫升)对其进行反萃取，所得有机相与原先的有机部份合并。一部分溶液(10％)保留作为化合物6的粗游离碱，通过除去溶剂得到化合物6。通过电喷离子化质谱对化合物6进行分析；分子离子峰为475.0(计算的分子量为474.56)。
合并的其余的有机萃取液通过在50℃旋转蒸发浓缩到净重18-20克。残留物溶于乙酸乙酯和乙醇中，使得乙酸乙酯/乙醇的比例为7∶1，游离碱的浓度为8毫升/克。通过费歇尔滴定法测定水的百分含量。晶体最高产率时的最高含水量应该在1.0-2.0％w/w之间。将溶液加热到回流后加入冰醋酸(1.10克，18.3mmol)，溶液中出现种晶。浆液冷却到室温并搅拌过夜。在0℃冷却2小时后，过滤产品，滤饼用7∶1的乙酸乙酯/乙醇(20毫升)洗涤，固体空气干燥1小时。产品在70℃真空干燥过夜，得到7.4克白色结晶固体产品(纯度96％，收率86％)，熔点137(收缩)，143.1-153.2℃。C27H30N4O4-C2H4O2计算值C，65.15；H，6.41；N，10.48；元素分析值C，65.55；H，6.37；N，10.88。实施例7化合物6的盐的制备盐酸盐回流下，向化合物6游离碱(2.0克，4.2mmol)的乙醇溶液中加入HCl的乙醇溶液(7.04毫升的0.6M溶液，4.22mmol)。根据需要加入三乙胺或HCl，谨慎地将其pH调节到3.0。溶液出现种晶，并使其冷却到室温，此时搅拌过夜。浆液冷却到0℃2小时，过滤，滤液用3毫升的冷乙醇洗涤。白色固体在50℃/5Torr下真空干燥过夜，得到1.90克白色固体(收率88％)，熔点207.0-211.0℃。C27H30N4O4-HCl的计算值C，63.46；H，6.11；N，10.96。元素分析值C，63.00；H，6.19；N，11.04。乙酸盐回流下，向化合物6游离碱(2.0克，4.2mmol)的乙酸乙酯(14.0毫升)溶液中加入乙酸(278毫克，4.6mmol)的乙醇溶液(2.0毫升)。溶液出现种晶，慢慢地冷却到室温并搅拌过夜。浆液在0℃冷却2小时，过滤，滤液用冷的7∶1的乙酸乙酯/乙醇(4毫升)洗涤。白色固体在70℃/5Torr下真空干燥过夜，得到1.94克白色固体(收率86％)，熔点148.7-154.2℃。C27H30N4O4-C2H4O2的计算值C，65.15；H，6.41；N，10.48。元素分析值C，65.72；H，6.30；N，11.06。
其它各种用相似的方法制备的化合物的X射线粉末衍射表明其为结晶固体。4-羟基苯甲酸盐将4-羟基苯甲酸(12.53克，90.7mmol)的热乙醇(171毫升)溶液加入到回流的游离碱(42.8克，90.2mmol)的乙酸乙酯(343毫升)溶液中，所得溶液回流15分钟。溶液经倾析除水，分离出少量不溶残渣并出现种晶。溶液慢慢地冷却到室温并搅拌过夜。浆液冷却到0℃2小时。过滤固体，用冷的2∶1乙酸乙酯/乙醇对其进行洗涤，在70℃/5Torr下真空干燥过夜，得到45.4克白色固体(收率82％)，熔点148.3-150.5，该固体固化并在159-186.9℃重新熔融。湿滤饼和干固体的X射线粉末衍射均表明其为结晶体。酸盐向回热的游离碱(250毫克，0.53mmol)的甲醇(2.5毫升)溶液中加入热的草酸(37.8毫克，0.42mmol)的甲醇(2.5毫升)溶液。溶液加热回流1小时。溶液慢慢地冷却到室温并搅拌过夜。浆液冷却到0℃2小时。过滤出固体，用冷甲醇洗涤，在70℃/5Torr下干燥过夜，得到194毫克白色固体(65％)，熔点214.9℃。湿滤饼和干固体的X射线粉末衍射均显示其为结晶体。实施例82-[4-(2-氨基-2-甲基丙基)苯氧基]-3-吡啶羧酸乙酯的合成 4-(2-氨基-2-甲基丙基)苯酚(55.18克，244.9mmol)加入到5.05N的KOH中(97.2mmol，2.0当量)。混合物加热到50℃，得到均匀的黄色溶液。加入氯苯(1104毫升)和N，N-二甲基乙酰胺(10.7克，122mmol)，混合物加热到回流(大约100℃)。经由Dean-Stark分水器共沸除去水。大约125℃时，开始形成固体。当釜温达到132℃时，水已经被除去，反应混合物为一种稠的但是可搅拌的浆液(需要机械搅拌)。除去Dean-Stark分水器，除去另外的100毫升氯苯。向浆液中加入干燥氯苯(50毫升)，随后加入2-氯烟酸乙酯(50.0克，269mmol)的氯苯(50毫升)溶液。在回流下加热浆液直到反应完成(大约24小时)。反应进行过程中，浆液变稀并变成米色。冷却到室温后，在混合物中加入水(385毫升)和1N NaOH(25毫升，0.1当量)，分离各相。用水(285毫升)洗涤有机相，溶液浓缩到净重700克(HPLC检测，效验9.83％，收率89％)，用于下一步反应。实施例92-[4-(2-氨基-2-甲基丙基)苯氧基]-3-吡啶羧酸乙酯，乙酸盐的制备2-[4-(2-氨基-2-甲丙基)苯氧基]-3-吡啶羧酸乙酯(10.3克，32.8mmol)溶于乙酸乙酯(52毫升)和庚烷(41毫升)中，溶液被加热到回流状态。加入乙酸(1.97克，38.8mmol)，溶液出现种晶，慢慢地冷却到室温。在室温下30分钟后，浆液冷却到0℃并搅拌1.5小时。过滤产品，用冷的1∶1乙酸乙酯/庚烷(20毫升)洗涤，在50℃下真空干燥18小时，得到10.29克产品(纯度97％，收率81％)，熔点122.9-124.5℃。实施例10(S)-2-[4-[2-[2-羟基-3-(1H-吲哚-4-基氧)丙基氨基]-2-甲基丙基]-苯氧基]-3-吡啶羧酸乙酯，及其4-羟基苯甲酸盐的制备4-[(2S)-环氧乙烷基甲氧基]-1H-吲哚(9.00克，47.6mmol)加入到2-[4-(2-氨基-2-甲基丙基)-苯氧基]-3-吡啶羧酸乙酯(162.8克的10.1％w/w的氯苯溶液，52.3mmol)的溶液中，所得溶液加热回流37小时。当环氧化物消耗完时，溶液冷却到80℃，一次性加入50℃的4-羟基苯甲酸(6.57克，47.6mmol)的2B-3乙醇(34克)溶液。在70℃，均匀的溶液出现种晶，并在搅拌下慢慢地冷却到室温。0℃下搅拌1小时后，过滤浆液，用氯苯(3×50毫升)洗涤，并在70℃真空干燥18小时，得到20.82克白色固体产品(收率68％)，熔点172.4-175℃。C29H33N3O5-C7H6O3计算值C，67.38；H，6.12；N，6.54；元素分析值C，67.18；H，6.07；N，6.77。实施例11(S)-2-[4-[2-[2-羟基-3-(1H-吲哚-4-基氧)丙基氨基]-2-甲基丙基]-苯氧基]-3-吡啶羧酸，乙酯的制备搅拌下，将该题头化合物(17.1克，26.6mmol)的4-羟基苯甲酸盐加入到甲基叔丁基醚(200毫升，MTBE)和1N NaOH(7 5毫升)的混合物中。当所有起始固体都溶解了时，剩余少量易于通过过滤(Whatman 1#纸)除去的深绿色固体。用盐水(2×30毫升)洗涤有机相，并用无水MgSO4干燥。过滤除去干燥剂。如下用甲醇交换MTBE溶剂，通过旋转蒸发浓缩溶液，再将残留物溶于甲醇中，然后再次浓缩。重复此方法，使残留物溶于无水甲醇并直接用于随后的反应。实施例12(S)-2-[4-[2-[2-羟基-3-(1H-吲哚-4-基氧)丙基氨基]-2-甲基丙基]-苯氧基]-3-吡啶酰胺，乙酸盐的制备 (S)-2-[4-2-[2-羟基-3-(1H-吲哚-4-基氧)丙基氨基]-2-甲基丙基]-苯氧基]-3-吡啶羧酸乙酯(13.2克，26.1mmol)的甲醇(66毫升)溶液倾入加压的并用25磅/平方英寸(psig)氨气置换3次的容器中。然后，容器内的压力用氨气调节到50psig，所述黄色溶液在24℃搅拌18小时。通过旋转蒸发除去溶剂和氨气直到烧瓶中剩余25克。加入乙醇(100毫升，2B-3)，再次通过旋转蒸发除去溶剂直到剩余26克。乙醇的加入和蒸发重复3次以上以将溶剂替换为乙醇并除去氨气。最后一次蒸发后，称取烧瓶内的物料25.0克并作为理论的12.5克游离碱和12.5克乙醇。加入乙酸乙酯(87.7毫升)和H2O(1.0毫升)，将溶液加热到回流。加入乙酸(1.73克，28.8mmol)，溶液出现种晶。1小时后，不再对白色混合物进行加热。在24℃搅拌1小时后，通过真空过滤收集白色固体并用7∶1的乙酸乙酯∶乙醇(20毫升)洗涤两次，并用7∶1的乙酸乙酯∶乙醇10(毫升)洗涤1次。在50℃/5Torr下真空干燥过夜，得到11.6克白色固体(纯度96.9％，收率97％)，熔点157-158℃。C27H30N4O4计算值C，65.15；H，6.41；N，10.48。元素分析值C，65.01；H，6.28；N，10.26。实施例13(S)-2-[4-[2-[2-羟基-3-(1H-吲哚-4-基氧)丙基氨基]-2-甲基丙基]-苯氧基]-3-吡啶羧酸，乙酯，及其4-羟基苯甲酸盐的制备4-[(2S)-环氧乙基甲氧基]-1H-吲哚(8.00克，42.3mmol)加入到2-[4-(2-氨基-2-甲基丙基)-苯氧基]-3-吡啶羧酸乙酯(14.4克，46.5mmol)的2B-3乙醇(80毫升)溶液中，所得溶液加热回流20小时直到环氧化物消耗完。溶液冷却到70-75℃，一次加入70-75℃的4-羟基苯甲酸(5.9克，42.3mmol)的2B-3乙醇(20毫升)溶液，均匀的溶液出现种晶，并在70-75℃继续搅拌1小时。混合物冷却到26℃并搅拌1小时，然后冷却到5℃再搅拌1小时。通过过滤收集固体，用2B-3乙醇(45毫升)洗涤，在50℃真空干燥45小时，得到21.8克白色固体产品(收率80.4％)，熔点174-176℃。实施例14(S)-2-[4-[2-[2-羟基-3-(1H-吲哚-4-基氧)丙基氨基]-2-甲基丙基]-苯氧基]-3-吡啶羧酸乙酯的制备搅拌下，将该题头化合物(40.0克，62.3mmol)的4-羟基苯甲酸盐加入到甲基叔丁基醚(350毫升，MTBE)和甲醇(20毫升)的混合物中。继续搅拌90分钟直到固体得到较好的分散，然后加入1N氢氧化钠(160毫升)和去离子水(40毫升)。一旦固体溶解，则分离各层，有机相用去离子水(120毫升)和氯化钠(8.0克)的溶液萃取两次。冷却到0-5℃后，用玻璃纸过滤，有机层在40℃和24-28英寸汞柱下浓缩到80毫升。加入甲醇(160毫升)并再次将体积减少到80毫升。用甲醇将总体积调节到240毫升，所得溶液直接用于随后的反应。实施例15(S)-2-[4-[2-[2-羟基-3-(1H-吲哚-4-基氧)丙基氨基]-2-甲基丙基]-苯氧基]-3-吡啶酰胺乙酸盐的制备(S)-2-[4-2-[2-羟基-3-(1H-吲哚-4-基氧)丙基氨基]-2-甲基丙基]-苯氧基]-3-吡啶羧酸乙酯(31.4克，62.3mmol)的甲醇(264毫升)溶液加压，并用5psig氨气置换3次。然后用氨气将容器内的压力调节到5psig，黄色溶液在40℃搅拌22小时。在30-40℃和25英寸汞柱下将体积浓缩到60毫升。加入甲基乙基酮(450毫升，MEK)，再次在40-50℃和25英寸汞柱下将体积减少到60毫升，再次加入甲乙酮(200毫升)并将体积减少到60毫升。在15-20℃，用甲乙酮将物质的总体积调节到300毫升，用20微米多孔玻璃过滤漏斗过滤，然后用甲乙酮漂洗，得到总体积为310毫升的滤液。溶液被加热到65℃，在65℃加入冰醋酸(3.75克，62.4mmol)的甲乙酮(15毫升)溶液。出现种晶后，混合物在65℃搅拌90分钟，然后在14小时内，搅拌下将其冷却到25℃。混合物冷却到3℃并搅拌1小时。通过过滤收集浆液，用甲乙酮(90毫升)洗涤，在70℃真空干燥46小时，得到30.3克白色固体产品(收率90.9％)，熔点156-158℃。实施例164-羟基吲哚及其它R1-OH化合物的制备可以按照Davies公开在J.Chem.Soc.19552412(1955)和H.D.Porter和W.D.Peterson公开在＂Organic Synthesis＂，第III累积卷，660页的方法制备4-羟基吲哚。这些参考文献全部在此引入作为参考。用于制备4-羟基吲哚的具体条件如下所述。A.从2-甲基-3-硝基苯胺制备4-硝基吲哚 亚硝酸钠(20克，0.29摩尔)溶于50毫升水中。接近零度时，所有该溶液立刻加入到2-甲基-3-硝基苯胺(20克，0.13摩尔)的冰醋酸溶液中，用架空搅拌器剧烈搅拌反应液。加入亚硝酸钠溶液时立即出现沉淀。使反应达到室温后搅拌过夜。滤出沉淀并真空浓缩滤液。暗橙色固体悬浮在水中，过滤，干燥，得到14-21克暗橙色固体(收率99％)。B.从4-硝基吲哚制备4-氨基吲哚 在Parr氢化容器中，加热下将4-硝基吲哚(12克)溶于乙醇(300ml)。(5％的钯/碳(12克)加入到容器中。反应加压到50 PSI并摇动1小时。TLC显示产品形成和原料损失。通过Celite过滤反应混合物。用甲醇充分洗涤催化剂直到将所有产品均冲洗掉。浓缩滤液得到暗灰色固体，其溶于乙酸乙酯中并经二氧化硅衬垫过滤。浓缩滤液得到淡褐色固体(9.6克，收率97％)。C.从4-氨基吲哚制备4-羟基吲哚 将4-氨基吲哚(9.6克，0.072摩尔)溶解到装在反应容器中的7.2克浓硫酸的75毫升水溶液中。然后密封到一个不锈钢高压釜中，加热到170℃过夜。反应混合物包含许多黑色沉淀。用乙酸乙酯和水稀释反应混合物并装入分离用漏斗中进行分配。水层用乙酸乙酯萃取若干次直到所有产品不存在水。合并有机部分，并用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩成暗褐色或黑色油。通过将其经由二氧化硅衬垫，用50％乙酸乙酯/己烷混合物纯化产品，得到白色固体(3.3克，收率33％)。
利用本发明描述的一般方法，本领域技术人员可以类似地制备其它R1-OH芳氧基化合物和其盐，例如本发明的化合物2，4和8-13(参见通过如上所述方法制备化合物2，4和8和通过电喷离子化质谱对其进行分析。化合物2的分子离子峰为476.0(计算的分子量为475.55)；化合物4为508.0(计算的分子量为507.61)；化合物8为492.24(计算的分子量为492.01)。实施例17在牛体静脉注射施用本发明的化合物在牛体通过静脉注射施用本发明的化合物可增加血清非酯化脂肪酸和降低血清尿素。在该实施例中，用于该研究的安格斯牛(angus)/安格斯杂交小牛，小母牛和阄公牛的起始重量为大约282磅(128公斤)到788磅(357.8公斤)，其被圈入栏中，每栏中5头小牛。在开始研究前至少1星期将牛驯化以使它们适应所圈养的栏。
小牛每日不限量喂饲两次，(大约6-15磅(2.7-6.8公斤)/天)。在处理期间，上午，供料时间交错以保证所有动物均在进行给药之前大约1小时被喂饲。下午，牛在接受下午注射后立即喂饲。
从每个动物身上采集预处理(T＝0)血样后，在上午630和下午230通过颈静脉静脉施用试验化合物，剂量为每公斤40ug。每个试验化合物在处理介质中的施用浓度为1.00-1.25毫克/毫升，处理介质为50/50的聚乙二醇200/水的混合物。
处理后15分钟采集一个血样(T+15min)。然后小牛回到各自的栏中直到下一次处理，下次处理大约在8小时后。次日早晨630，从所有小牛采集处理后24小时的血样(T+24h)。分析所有血样的非酯化脂肪酸量(NEFA)和血清尿素含氮量(SUN)。对于每个单独的动物，比较其处理后NEFA和SUN的量与处理以前的量。结果列于表1。
表1结构 ΔNEFA*ΔNEFA**Δ％SUN***15分钟 24小时24小时仅仅是介质～0 ～0 ～0 化合物6 40.7-1.44 -47 化合物7 134.1 -4.2 -9.7 *对每个个体来说，与基准(T＝0)相比较，用所示试验化合物处理15分钟时动物血中NEFA的增加(微摩尔/升)(ΔNEFA＝T+15min的NEFA值-T＝0的NEFA值)。该值为五个动物的平均值。**对每个个体来说，与基准(T＝0)相比较，用所示试验化合物处理24小时时动物血中NEFA的增加(微摩尔/升)(ΔNEFA＝T+24h的NEFA值-T＝0的NEFA值)。该值为五个动物的平均值。***对每个个体来说，与基准(T＝0)相比较，用所示试验化合物处理24小时时动物血中SUN减少百分数。该值为五个动物的平均值。%ΔSUN=(T+24h SUN)-(T=0SUN)T=0SUN×100%]]>从表1所示血清尿素氮量的变化可以看出，3-酰胺区域异构体(化合物2，4，6和8)施药后24小时时的合成代谢作用显著大于相应的5-羧酰胺区域异构体(化合物1，3，5和7)。通过表1非酯化脂肪酸量在施药后15分钟和24小时的结果可以看出，化合物2，4，6和8也具有适中的脂解效果。
用2-酰胺区域异构体(化合物9-13)重复上面描述的试验，结果如下。试验中未使用相应于化合物9-13的4-酰胺区域异构体。结果示于下表2表2结构 ΔNEFA*ΔNEFA**Δ％SUN***15分钟 24小时 24小时 基于表1和2提供的数据可以发现，上文所示由结构式(I)表示的芳氧基丙醇胺中B环的2位存在酰胺基时，会使化合物具有强的合成代谢性能。相应的在5位上带有酰胺基的区域异构体的合成代谢很明显要低(表1)。另外，业已发现，上文所示的由结构式(I)表示的芳氧基丙醇胺中B环的3位上存在酰胺基时，会使化合物具有适中的脂解性能。相应的酰胺基位于5位上的区域异构体则表现出更加强的脂解效果。实施例18化合物6在肌肉和脂肪含量方面的效果在28天牛的研究中发现化合物6可以提高肌肉含量，减少脂肪含量。32头安格斯杂种阄公牛按重量分成重型(4个最重组，平均起始体重＝1226磅(557公斤))和轻型(4个最轻组，平均起始体重＝1164磅(528公斤))两组。每组内的阉公牛分4份处理(8头/处理)以研究经口服施用化合物6对于生长和胴体测定的影响，喂食28天后立即屠宰。处理包括一个对比例(0.0毫克化合物6每公斤体重)和三个级别的化合物6(LOW，0.125毫克化合物6每公斤体重；MED，0.250毫克化合物6每公斤体重；HIGH，0.500毫克化合物6每公斤体重)。化合物6与磨碎的玉米混合作为它们每日饲料催肥喂给阉公牛。对比例的阉公牛接受相似量的磨碎的玉米作为催肥添料。在发给剩余量的饲料以前要求阉公牛消耗掉起始饲料和催肥添料。基础日粮为市售的饲料(19.3％CP，DM基)。饲料和水都不限量供应。阉公牛分别圈在12英尺×48英尺的装有单独的饲喂槽和自动饮水器的栏中。在第28天，将阉公牛称重并于运到屠宰厂屠宰之前采集血样以及随后进行胴体评定。
用化合物6处理的牛的活体性能参数得到了提高。LOW，MED和HIGH比起对比例来说显示出54％-73％的平均日增重(ADG，磅/天)的增加，明确地分别为6.31，7.07，6.74，和4.08磅/天(2.86，3.21，3.06和1.85公斤/天)；P＜0.0002；见
图1。处理期间的日摄入的干物质不变(P＞0.47)。与对比例相比，LOW，MED，HIGH的饲料利用率(磅饲料每磅增重)得到了提高(分别为4.36，4.19，4.18，和7.04；见图2)。
畜体中的增重提高可以通过LOW，MED和HIGH与对比例相比热胴体重量的提高(P＜0.0001)得到证明，明确地分别为848，855，854和781磅(384，388，388和355公斤)(图3)。用化合物6处理后，催肥百分数也趋向更高(F试验P＝0.1138；处理P＜0.05)，正交比较说明加入化合物6时有显著的(P＜0.0043)低剂量平稳响应。第十二肋骨处的脂肪厚度没有什么不同(P＞0.78；图4)，但是LOW，MED，和HIGH的第十二肋骨处的背最长肌面积相对于对比例增加10.7-18.9％(P＜0.0068)(分别为13.5，14.3，14.5，12.2英寸2；图5)。
胴体组成包括％脂肪，％蛋白质，％水分和％骨，用Hankins，O.G.和Howe，P.E.1946.US Department of Agriculture TechnicalBulletin No.926 pp.1-20(图6)提出的方程式计算。在使用任何组分的处理中，胴体成分在统计学上没有什么不同(P＞0.12)，但用化合物6处理的％脂肪比对比例在数字上较小(约1.2-2.7％)。然而，由于用LOW，MED，和HIGH处理所观测到的胴体重量更重，因此计算的收率或蛋白质和水分的磅(图6)明显比对比例更大(P＜0.0036)(蛋白质分别为115.8，115.1，115.8，103.1磅(52.6，52.3，52.6，46.8公斤)；水分分别为389.2，384.7，393.4，34 5.3磅(176.7，174.7，178.6，156.8公斤))。
肉类科学家对畜体进行了评价并测定了美国农业部(USDA)质量等级和五花肉的评分。处理中USDA质量等级和五花肉评分均相同(P＞0.90)。从必要组分的测量来计算成品等级(YG)值(图7)。YG是零售切块肉量的标志，值越低表示高价值适销肉量越大。与对比例相比，三个用化合物6处理的例子的YG趋向于更低(F试验P＝0.0632；处理P＜0.09)。比较对比例、LOW、MED和HIGH的正交分析表明随着化合物6剂量增加YG直线降低，最后在MED和HIGH剂量下形成平台(P＝0.0021；YG分别为3.14，2.76，2.51，和2.46)。用化合物6处理的例子相对于对比例，用于主观度量肌肉发育程度的构造评分(图8)更高，这表明化合物6处理的畜体比对比例畜体的肌肉更厚，肌肉发育更好。
使用几种不同的测量方法测定了背最长肌条状肉的质量。用Hunter a*，b*，和L*测定的色泽上处理与不处理没有什么差异(P＞.5)，或宰后放置14天后测定的pH也没有什么差异。死后大约24小时第十二肋骨处的背最长肌的主观色，纹理和坚硬度测量也表明处理与不处理没有什么差异(F试验P＞0.07)。
在14天的肉上测定了Warner-Bratzler剪切力，(国民养牛者协会，“Standardized Warner-Bratzler Shear Force Proceduresfor Genetic Evaluation”(1994)；参见Wheeler等人，J.AnimalSci.，75，2423-2432，(1997))，它是一种机械的＂柔软性＂预测值(值越低，越柔软)。比较对比例，LOW，MED和HIGH，14天的肉的剪切值(分别为2.25，2.92，2.55和3.01公斤)没有什么不同(F试验P＝0.106)。这4种处理的正交对比显示了低剂量平稳响应(P＝0.0294)。虽然用化合物6处理的阉公牛的肉的剪切值数字上更高，但观测到的剪切值在2.27-3.58公斤范围之内，Boleman等人在J.Anim.Sci.75521-1524，1997中认为数值在这个范围的肉是＂柔软的＂，其低于需要被认为是“坚韧的”5.90公斤。
总之，将化合物6喂食阉公牛会使增重效率提高，比相同量的饲料喂食增重高54-73％。畜体增重越高，表明热胴体重量越高。额外的胴体重主要来自于增加的肌肉发育量。通过测定畜体14天的条状肉的五花肉评分、色泽、pH和Warner-Bratzler剪切力可以看出，肌肉发育增加量都对于肉的质量没有任何明显的有害影响。实施例19化合物6对于童子鸡生长期的最后14天期间增重和饲料利用效率的影响大约1500只Peterson-Hubbard，几天大的雄性小鸡用于随机进行4种处理的整组设计(对比例，1PPM克喘素，3PPM和15PPM(毫克/公斤饲料)化合物6)。试验设备包含36个栏，平分成6组。处理随机分配到每组内的栏中。每个处理由6栏组成，每栏10只鸡。
几天大的鸡来自于Goshen，In.的Pine Manor孵化场，接收到时任意地将大约40只鸡放在一栏中。长到30天时，所有的鸡均称重，选择15只最靠近组内平均的鸡。驯养这些鸡直到35天大。在第35天的那天，所有剩余的鸡再次称重，每栏中挑选10只最靠近组内平均值的鸡用于处理阶段。在整个试验中，对鸡进行不限量喂食饲料和水。从第1天直到第18天，所有的鸡均喂饲23％粗蛋白的玉米-大豆食物。从第18天直到第49天，将饲料转变为20％粗蛋白的玉米-大豆食物。使用相同的20％粗蛋白基础日粮混合处理饲料。从第35天到第49天的饲料中施用处理饲料。计算整个14天处理周期内的饲料消耗。在试验完成那天(第49天)，对鸡称重并运送到Purdue University，West Lafayette，Indiana 47907，U.S.A.肉类实验室，于第50天屠宰并进行胴体测定。称重所有动物的热胴体、脂垫和内脏。
研究结果概括于表3。数据表明，与克喘素相比，化合物6有利于童子鸡生长期的最后14天期间增重的增加和饲料利用效率的提高。用3PPM化合物6处理比对比例有3.17％的增重增加(P＝0.0987)，用15 PPM化合物6处理比对比例有3.17％的增加(P＝0.0756)。克喘素处理的鸡在14天的处理周期内显示出比对比例高2.38％的增加(P＝0.1430)。处理量为3 PPM时，化合物6将饲料利用效率提高2.50％(P＝0.2936)，处理量为15 PPM时，提高3.00％(P＝0.1957)。克喘素处理的动物与对比例相比，饲料利用效率提高0.50％(P＝0.7320)。
高剂量试验的化合物对于增重和饲料利用效率的影响由PurdueUniversity在进行胴体评定提出。对于所有的处理，取热胴体、内脏和脂垫重量。用试验化合物进行处理的热胴体重量相对于对比例均有增加。用3 PPM化合物6和15 PPM化合物6处理时，热胴体重量分别增加2.50％(P＝0.0174)和2.82％(P＝0.0078)。用克喘素处理的例子热胴体重量增加3.25％(P＝0.0027)。相对于对比例，用试验化合物进行处理的例子内脏重量均降低。用3PPM化合物6和15PPM化合物6处理的例子，内脏重量分别降低1.50％(P＝0.3981)和0.65％(P＝0.7279)。克喘素使内脏重量降低0.66％(P＝0.7215)。可以观测到一种趋势，即，两种处理均可增加脂垫重量。用3 PPM化合物6和15PPM化合物6处理的例子，脂垫重量分别增加9.68％(P＝0.1069)和4.09％(P＝0.4814)。
表3生长性能和胴体特性
(60只鸡/处理)，即6栏/处理，10只鸡/栏，Peterson x Hubbard鸡14天处理周期(第35-49天)F/G是每栏饲料摄入量/总栏重20％粗蛋白质日料(*P＜0.05)和(**P＜0.01)表明与对比例的差异实施例20化合物6对于童子鸡生长期最后28天期间增重、饲料利用效率和胸部肉，整条腿重量的影响大约2500只Peterson-Hubbard，几天大的雄性小鸡用于随机的进行4种处理的整组设计(对比例，3PPM和15PPM(毫克/公斤饲料)化合物6)。试验设备包含两个类别，每个包含30栏。每个类别中的栏被分成6组，五栏一组。处理随机分配到每组中。每个处理由12栏组成，每栏10只鸡。
几天大的鸡来自于Goshen，IN.的Pine Manor孵化场，接收到时任意地将大约40只鸡放在一栏中。长到16天时，所有的鸡均称重，选择15只最靠近组内平均值的鸡。驯养这些鸡直到21天大。在第21天的那天，所有剩余的鸡再次称重，每栏中挑选10只最靠近组内平均值的鸡用于处理阶段。在整个试验中，都采用向鸡进行不限量喂食饲料和水。从第1天直到第18天，所有的鸡均喂饲23％粗蛋白的谷粒-大豆食物。从第18天直到第49天，将饲料转变为20％粗蛋白的玉米-大豆食物。使用相同的20％粗蛋白基础日粮间杂处理饲料。从第21天到第49天的饲料中施用处理饲料。在第35天，称取中间重量。计算整个28天处理周期内的饲料消耗。在试验完成那天(第49天)，将鸡称重并运送到PurdueUniversity肉类实验室，于第50天屠宰并进行胴体测定。对所有动物取热胴体；脂垫；内脏；带骨、带皮胸；和带骨、带皮的整条腿重量。
研究结果概括于表4。用3PPM化合物6处理的鸡在第一个14天处理周期期间增重比对比例增加3.22％(P＝0.0395)。用15PPM处理的鸡在相同的周期内比对比例增加1.08％(P＝0.7600)。在最后14天的处理期间，用3PPM和15PPM化合物6处理的鸡分别增加6.67％(P＝0.0064)和1.90％(P＝0.5028)。在整个28天处理周期内，用3PPM和15PPM化合物6处理的鸡的增重分别增加5.03％(P＝0.0051)和1.01％(P＝0.5419)。
当以饲料/增重度量时，两种处理在28天处理周期内的饲料转化率均呈现出提高的趋势。相对于对比例，用3PPM化合物6和15PPM化合物6处理的例子呈现出6.85％(P＝0.1426)和4.57％(P＝0.3594)的提高。
热胴体重量的胴体评定相对于对比例有显著的增加。用3PPM化合物6和15PPM化合物6处理的动物分别显示出6.50％(P＝0.0001)和2.90％(P＝0.0434)的增加。从每只鸡上剥下脂垫(包括腹部脂肪和砂囊脂肪)，并称重以测定这些化合物对脂肪增生的影响。两种剂量的化合物6均没有明显的影响。与对比例相比时，每一处理均表现出降低内脏重量的趋势。用3PPM化合物6和15PPM化合物6处理时，分别降低1.54％(P＝0.4004)和3.29％(P＝0.0764)。
称重带骨和带皮的胸部肌肉。低剂量的化合物6显示出4.00％的增加(P＝0.0227)，而高剂量则显示出1.06％的增加(P＝0.5351)。用化合物6处理时，带骨，带皮的整条腿的重量也有非常显著的增加(即用3PPM和15PPM处理时，分别增加10.63％(P＝0.0001和5.60％(P＝0.0003))。
总之，当从生存期的第21-35天喂饲时，雄性童子鸡经口服施予化合物6不会显著地增加增重。但是，在第35-49天期间，3PPM的化合物6会使增重显著地增加(P＜0.01)。当对整个28天喂饲期进行分析时，增加也是显著的(P＜0.01)。在整个28天喂饲期内所有处理的饲料利用效率也呈现出提高的趋势。所有剂量均会使热胴体重量显著增加(P＜0.05)。两种剂量下，化合物6均能非常显著的增加带骨、带皮的整条腿的重量(P＜0.01)。3PPM剂量的化合物6就能显著增加带骨、带皮的胸部肉的重量(P＜0.05)。
表4生长性能和胴体特性
(120只鸡/处理)，即12栏/处理，10只鸡/栏，Peterson x Hubbard鸡28天处理周期(第21-49天)F/G是每栏饲料摄入量/总栏重20％粗蛋白质玉米-大豆日料(*P＜0.05)和(**P＜0.01)表明与对比例的差异以下制剂实施例仅仅在于说明本发明，目的不在于以任何方式限定本发明的范围。当然，“活性成分”意味着结构式I的化合物或其生理学可接受的盐或溶剂合物。实施例21鸡的配合添加剂成分重量百分数活性成分25磨碎的玉米 74氯化钠 1100实施例22反刍动物配合添加剂成分重量百分数活性成分30磨碎的黄玉米60苜蓿草粉10100实施例23猪的配合添加剂成分重量百分数活性成分10磨碎的玉米 88矿物油 2100以上成分混合均匀以得到干的可流动的配合添加剂，其可以与典型的动物饲料以一定的比例混合以使最终的饲料中含有约20ppm的活性成分。例如，配合添加剂可以加入到以下猪生长日粮中，用于猪便利地经口服食该活性成分。成分重量百分数 磅/吨磨碎的黄玉米76.701534大豆饼粉，溶剂萃取的，去皮的19.35387碳酸钙 1.20 24磷酸二钙，饲料级1.20 24盐(氯化钠) 0.50 10微量无机物配合添加剂，AN-0310.10 2猪维生素配合添加剂，SW-032 0.65 13维生素A配合添加剂，3M USP单元/磅3 0.05 1羟基甲硫氨酸类似物，93％0.20 4硒配合添加剂0.0051总计100.0020001每公斤配合添加剂包含50克锰，以硫酸锰计；100克锌，以碳酸锌计；50克铁，以硫酸亚铁计；5克铜，以一氧化铜计；1.5克碘，以碘化钾计和最高150克，最低130克钙，以碳酸钙计。2每公斤配合添加剂包含77161 IU维生素D2；2205 IU维生素E；411毫克维生素B2；1620毫克泛酸；2205毫克烟酸；4.4毫克维生素B12；441毫克维生素K；19180毫克胆碱；110毫克叶酸；165毫克吡哆素；110毫克维生素B1；22毫克维生素H。3每公斤配合添加剂包含6 613 800 IU维生素A。4每公斤配合添加剂包含200毫克硒，以亚硒酸钠计。
权利要求
1.一种由下列结构式表示的化合物 和其生理学可接受的盐，其中R1为取代或未取代的芳基；R2和R3独立地为氢，C1-C4直链或支链烷基；R4和R5独立地为氢，C1-C4直键或支键烷基，或与和其相连的氮原子一起作为非芳族杂环；和环A和环B还独立地不被取代或被一或二个取代基取代。
2.权利要求1的化合物，其中化合物由如下结构式表示
3.权利要求2的化合物，其中R1代表选自如下结构式的基团 其中，环C-环I独立地是取代或未取代的。
4.一种由下列结构式表示的化合物 和其生理学可接受的盐，其中R1代表选自如下的结构式
5.一种由下列结构式表示的化合物 和其生理学可接受的盐
6.权利要求5化合物的氯化铵，草酸铵，乙酸铵或4-羟基苯甲酸铵盐。
7.一种由下列结构式表示的化合物 和其生理学可接受的盐，其中R1为取代或未取代的芳基，R2和R3独立地为氢，C1-C4直链或支链烷基；R4和R5独立地为氢，C1-C4直键或支键烷基，或与和其相连的氮原子一起作为非芳香性的杂环；X为-CH-或-N-；和环A和环B还独立地不被取代，或用一或二个取代基取代，条件是当X为-CH-时，R1不是取代或未取代的咔唑基。
8.一种促进家畜动物生长、提高饲料利用效率和/或瘦肉生产的方法，包括给予动物有效量的一种或多种由下列结构式表示的化合物 和其生理学可接受的盐，其中R1为取代或未取代的芳基；R2和R3独立地为氢，C1-C4直链或支链烷基；R4和R5独立地为氢，C1-C4直键或支键烷基，或与和其相连的氮原子一起作为非芳族杂环；X为-CH-或-N-；和环A和环B还独立不被取代，或被一或二个取代基取代，条件是当X为-CH-时，R1不是取代或未取代的咔唑基。
9.一种促进家畜动物生长、提高饲料利用率和/或瘦肉生产的方法，包括给予动物有效量的一种或多种由下列结构式表示的化合物 和其生理学可接受的盐，其中R1为取代或未取代的芳基，R2和R3独立地为氢，C1-C4直链或支链烷基；R4和R5独立地为氢，C1-C4直键或支键烷基，或与和其相连的氮原子一起作为非芳族杂环；和环A和环B还独立地不被取代或被一或二个取代基取代。
10.权利要求9的方法，其中所述动物是反刍动物。
11.权利要求10的方法，其中所述反刍动物是母牛，公牛，小母牛或阉公牛。
12.权利要求9的方法，其中所述动物是家禽。
13.权利要求12的方法，其中所述家禽是鸡，火鸡或鸭。
14.一种促进家畜动物生长、提高饲料利用率和/或瘦肉生产的方法，包括给予动物有效量的一种由下列结构式表示的化合物 和其生理学可接受的盐，其中R1代表选自如下结构式的基团
15.权利要求14的方法，其中所述动物是反刍动物。
16.权利要求15的方法，其中所述反刍动物是母牛，公牛，小母牛或阉公牛。
17.权利要求14的方法，其中所述动物是家禽。
18.权利要求17的方法，其中所述家禽是鸡，火鸡或鸭。
19.一种促进家畜动物生长、提高饲料利用率和/或瘦肉生产的方法，包括给予动物有效量的一种由下列结构式表示的化合物 和其生理学可接受的盐。
20.权利要求19的方法，其中所述动物是反刍动物。
21.权利要求20的方法，其中所述反刍动物是母牛，公牛，小母牛或阉公牛。
22.权利要求21的方法，包括施用所述化合物的氯化铵，草酸铵，乙酸铵或4-羟基苯甲酸铵盐。
23.权利要求19的方法，其中所述动物是家禽。
24.权利要求23的方法，其中所述家禽是鸡，火鸡或鸭。
25.权利要求24的方法，包括施用所述化合物的氯化铵，草酸铵，乙酸铵或4-羟基苯甲酸铵盐。
26.一种增加从家畜动物获得的肉的数量或提高从家畜动物获得的肉的质量的方法，包括给予动物有效量的一种或多种由下列结构式表示的化合物 和其生理学可接受的盐，其中R1为取代或未取代的芳基，R2和R3独立地为氢，C1-C4直链或支链烷基；R4和R5独立地为氢，C1-C4直键或支键烷基，或与和其相连的氮原子一起作为非芳族杂环；和环A和环B还独立地不被取代或被一或二个取代基取代。
27.一种增加从家畜动物获得的肉的数量或提高从家畜动物获得的肉的质量的方法，包括给予动物有效量的一种或多种由下列结构式表示的化合物 和其生理学可接受的盐，其中R1代表选自由如下结构式的基团 和
28.一种增加从家畜动物获得的肉的数量或提高从家畜动物获得的肉的质量的方法，包括给予动物有效量的一种或多种由下列结构式表示的化合物 和其生理学可接受的盐。
29.权利要求28的方法，包括施用所述化合物的氯化铵，草酸铵，乙酸铵或4-羟基苯甲酸铵盐。
30.一种增加从家畜动物获得的肉的数量或提高从家畜动物获得的肉的质量的方法，包括给予动物有效量的一种或多种由下列结构式表示的化合物 和其生理学可接受的盐，其中R1为取代或未取代的芳基，R2和R3独立地为氢，C1-C4直链或支链烷基；R4和R5独立地为氢，C1-C4直键或支键烷基，或与和其相连的氮原子一起作为非芳族杂环；X为-CH-或-N-；和环A和环B还独立地不被取代，或被一或二个取代基取代，条件是当X为CH-时，R1不是取代或未取代的咔唑基。
31.一种药物组合物，其包含药理上可接受的载体或稀释剂以及由如下结构式(II)表示的化合物作为活性成分 和其生理学可接受的盐，其中R1为取代或未取代的芳基，R2和R3独立地为氢，C1-C4直链或支链烷基；R4和R5独立地为氢，C1-C4直键或支键烷基，或与和其相连的氮原子一起作为非芳族杂环；和环A和环B还独立地不被取代或被一或二个取代基取代。
32.基本上为本发明描述的实施例1到20的任何一个化学式(II)的化合物。
33.一种药物组合物，包括作为活性成分的权利要求1到7任何一个中所要求的化合物，和生理上可接受的稀释剂或载体。
34.权利要求1到7任何一个所要求的化合物作为合成代谢剂的用途。
35.权利要求1到7任何一个所要求的化合物作为适中的脂解剂的用途。
36.权利要求1中定义的化学式(II)的化合物或其生理学可接受的盐在制造用于增加从家畜获得的肉的数量或提高从家畜获得的内的质量的药剂方面的用途。
37.一种制备权利要求1到7中任何一个所要求的化合物的方法，包括用由下列结构式(b)表示的胺胺化由下列结构式(a)表示的环氧化物， 其中，R1，R2，R3，R4，R5，X，A和B如权利要求1中所定义；其中，如果需要可形成其生理学可接受的盐。
38.一种制备权利要求1到7中任何一个所要求的化合物的方法，包括(a)用由下列结构式(B)表示的胺胺化由下列结构式(A)表示的环氧化物； (b)水解氰基以形成酰胺基；其中，R1，R2，R3，X，A和B如权利要求1中所定义；其中，如果需要可形成其生理学可接受的盐。
39.一种制备权利要求1到7中任何一个所要求的化合物的方法，包括(a)用由下列结构式(B)表示的胺胺化由下列结构式(A)表示的环氧化物； 其中R6是甲基或乙基；和(b)用氨气酰胺化COOR6基；其中，R2，R3，A和B如权利要求1中所定义，R6是甲基或乙基；其中，如果需要可形成其生理学可接受的盐。
40.一种动物饲料配合添加剂，其含有如权利要求1中所定义的结构式I的化合物，或其生理学可接受的盐或溶剂合物，以及一种适合的载体。
41.权利要求40的动物饲料配合添加剂，其中如权利要求1中所定义的结构式I的化合物是化合物6或其生理学可接受的盐或溶剂合物。
42.一种动物饲料组合物，其包含如权利要求1中所定义的结构式I的化合物，或其生理学可接受的盐或溶剂合物，以及一种适合的载体。
43.权利要求42的动物饲料组合物，其中所述如权利要求1中所定义的结构式I的化合物为化合物6或其生理学可接受的盐或溶剂合物。
全文摘要
公开一种由结构式(I)表示的化合物:R1为取代或未取代的芳基,R2和R3独立地为氢,C1－C4直链或支链烷基,R4和R5独立地为氢,C1－C4直链或支链烷基,或与和其相连的氮原子一起作为非芳族杂环。环A和环B还独立地不被取代或被一或二个取代基取代。也包括如上所示结构式的生理学可接受的盐。也公开了一种促进家畜生长,提高饲料利用率和/或家畜动物中瘦肉产量的方法。该方法包括给予动物有效量的一种或多种由如上所示结构式表示的化合物或其生理学可接受的盐。
文档编号A23K1/16GK1390213SQ00815577
公开日2003年1月8日 申请日期2000年11月13日 优先权日1999年11月15日
发明者R·B·霍普金斯, D·L·汉科克, M·E·奎姆比, R·R·罗斯哈尔, J·A·韦纳 申请人:伊莱利利公司