专利名称：一种快速直接建立合欢再生植株体系的方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域中的植物组织培养技术；特别涉及一种快速 直接建立合欢再生植株体系的方法。用于木本植物合欢快速繁殖、转基因 及再生植株体系建立的生物技术领域。
背景技术：
在木本植物合欢再生植株体系建立中，存在着难以快速直接获得再生 植株的难题，快速直接建立合欢再生植株体系对于减少母本植株应用数量、 降低种苗生产成本具有重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种快速直接建立合欢再生植株 体系的方法。建立了一套高效、可靠、重复性好的合欢高频植株再生系统， 达到减少母本植株应用数量、降低种苗生产成本。 本发明的技术方案是
一种快速直接建立合欢再生植株体系的方法，其特征在于将合欢种 子经表面消毒后无菌播种于培养基上， 一周左右，切取无菌播种苗下胚轴 置于诱导与分化合一的TJ801培养基上离体培养建立高频再生系统，将直 接分化出的不定芽诱导生根，移栽。
1) 植物组织培养是在无菌条件下实施；其过程包括
2) 将合欢种子经表面消毒后无菌播种于培养基上，种子萌发一周后，切取
无菌播种苗下胚轴置于诱导与分化合一的U801培养基上离体培养建立高 频再生系统；
3) 将直接分化出的不定芽与植株进行诱导生根，移栽。
快速直接建立合欢再生植株体系的方法是利用合欢种子无菌播种苗下 胚轴置于诱导与分化合一的TJ801培养基上离体培养建立高频再生系统，
将直接分化出的不定芽诱导生根、移栽的方法，其特征在于 植物组织培养是在无菌条件下实施；其过程包括1) 将合欢种子在500 800倍多菌灵溶液中浸泡20min,用自来水冲 洗干净后，在超净工作台内用0.1X的升汞溶液浸泡8min，溶液中加2滴 吐温-80，通过磁棒搅动或不断震荡摇动，无菌水冲洗5 6次后，用镊子 将种子直接播种于无激素的培养基上。
2) 将培养瓶置于培养室中进行培养，培养室中的温度为25土rc、 光照条件2000 25001ux; 14h/d光照；
3) 3 4天后，种子萌发，第5 7天，取出无菌播种苗，切取下胚轴 长2cm左右，每段0. 5 lcm置于诱导与分化合一的TJ801培养基上进行 离体培养。
4) 将培养瓶置于培养室中进行培养，培养室中的条件与2)相同；
5) 从10 12天开始，外植体膨大并形成愈伤组织，16天后愈伤组织 变绿并长出芽点，30天左右芽点长出小植株。
6) 45 50天后，将直接分化出的不定芽与植株进行诱导生根，移栽。
7) 接种后日常管理将培养材料置于满足植物组织培养的温度(25± 1 。C)、光照条件(2000 25001ux) (16h/d光照)的房间或设施(如温室)内 进行培养。
本发明具有以下优点和特点 本发明解决了木本植物合欢再生植株体系建立中难以快速直接获得再生 植株的难题，建立了一套高效、可靠、重复性好的合欢高频植株再生系统， 该方法独特且简单实惠，应用价值高。
针对木本植物合欢再生植株体系建立中难以快速直接获得再生植株的 问题，发明人进行了大量的研究工作，最终获得了利用合欢种子无菌播种 苗下胚轴置于诱导与分化合一的TJ801培养基上离体培养建立高频再生系 统，将直接分化出的不定芽诱导生根、移栽的方法，从而在短时间内大量 获得合欢再生植株，建立试管苗的无菌繁殖体系，进而为木本植物合欢快速 繁殖、再生植株体系建立及转基因技术研究提供了物质基础和技术保障。
本发明旨在提供一种木本植物合欢再生植株体系建立中难以快速直接 获得再生植株的问题的方法；通过该方法在短时间内大量获得无菌再生植 株，为木本植物合欢快速繁殖、再生植株体系建立及转基因技术研究提供 了物质基础和技术方法。
1.该技术具有独特且简单实惠、重复性强、应用价值高等优点；将其 应用到木本植物合欢转基因技术研究、快速繁殖及再生植株体系建立提供了物质基础和最佳的技术方法。它能在较短的时间内大量获得无菌再生植 株，可以节约大量时间和人力和经费，具有很好的实际应用效果。
2.本方法利用合欢种子无菌播种苗下胚轴置于诱导与分化合一的
TJ801培养基上离体培养建立高频再生系统，将直接分化出的不定芽诱导
生根、移栽，从而在短时间内大量获得合欢再生植株，建立试管苗的无菌
繁殖体系的方法；与国内目前大多数人所采用的传统常规再生植株体系建 立的方法相比，可以较好地解决了合欢组织培养与转基因中再生植株体系 难以快速直接获得的问题。利用此方法，1个月至1个半月就能大量获得 合欢再生植株，植株再生率可以达到65 70%。
图1是合欢组织培养无菌植株再生体系获得的方法技术路线图
具体实施例方式
如图1所示一种快速直接建立合欢再生植株体系的方法是利用合欢种 子无菌播种苗下胚轴置于诱导与分化合一的TJ801培养基上离体培养建立 高频再生系统，将直接分化出的不定芽诱导生根、移栽，从而在短时间内
大量获得合欢再生植株，建立试管苗的无菌繁殖体系的方法，其特征在于 植物组织培养是在无菌条件下实施；其过程包括将合欢种子无菌消 毒后，将种子直接播种于无激素的培养基上，在培养室中进行培养发芽； 种子萌发第5 7天后，取无菌播种苗下胚轴接种于诱导与分化合一的 TJ801培养基上进行离体培养；外植体膨大并形成愈伤组织、愈伤组织变 绿并长出芽点及小植株；将分化出的不定芽与植株进行诱导生根，移栽。 本发明较好地解决了合欢组织培养与转基因中再生植株体系难以快速直接 获得的问题，从而形成了一种简单、易行且在无菌条件下短时间内大量获 得合欢再生植株，建立试管苗的无菌繁殖体系的方法。 下面通过具体实施例，进一步详细介绍本发明；
实施例1
1)将合欢种子在500 800倍多菌灵溶液中浸泡20min，用自来水冲 洗干净后，在超净工作台内用O. 1X的升汞溶液浸泡8min，溶液中加2滴 吐温-80，通过磁棒搅动或不断震荡摇动，无菌水冲洗5 6次后，用镊子 将种子直接播种于无激素的培养基上。2) 将培养瓶置于培养室中迸行培养，培养室中的温度为25±rc、
光照条件2000 25001ux; 14h/d光照;
3) 3 4天后，种子萌发，第5 7天，取出无菌播种苗，切取下胚轴 长2cm左右，每段0. 5 lcm置于诱导与分化合一的TJ801培养基上进行 离体培养。
4) 将培养瓶置于培养室中进行培养，培养室中的条件与2)相同；
5) 从10 12天开始，外植体膨大并形成愈伤组织，16天后愈伤组织 变绿并长出芽点，30天左右芽点长出小植株。
6) 45 50天后，将直接分化出的不定芽与植株进行诱导生根，移栽。
7) 接种后日常管理将培养材料置于满足植物组织培养的温度(25± 1 °C)、光照条件(2000 25001ux)(16h/d光照)的房间或设施(如温室)内 进行培养。
权利要求
1、一种快速直接建立合欢再生植株体系的方法，其特征在于将合欢种子经表面消毒后无菌播种于培养基上，一周左右，切取无菌播种苗下胚轴置于诱导与分化合一的TJ801培养基上离体培养建立高频再生系统，将直接分化出的不定芽诱导生根，移栽1)植物组织培养是在无菌条件下实施；其过程包括2)将合欢种子经表面消毒后无菌播种于培养基上，种子萌发一周后，切取无菌播种苗下胚轴置于诱导与分化合一的TJ801培养基上离体培养建立高频再生系统；3)将直接分化出的不定芽与植株进行诱导生根，移栽。
2、 根据权利要求1所述的一种快速直接建立合欢再生植株体系的方法，其特 征在于-1) 将合欢种子在500 800倍多菌灵溶液中浸泡20min，用自来水冲洗干 净后，在超净工作台内用0. 1%的升汞溶液浸泡8 min，溶液中加2滴吐温-80， 通过磁棒搅动或不断震荡摇动，无菌水冲洗5 6次后，用镊子将种子直接播 种于无激素的培养基上；2) 将培养瓶置于培养室中进行培养，培养室中的温度为25士rc、光 照条件2000 25001ux; 14h/d光照；3) 3 4天后，种子萌发，第5 7天，取出无菌播种苗，切取下胚轴长 2cra左右，每段0. 5 lcm置于诱导与分化合一的TJ801培养基上进行离体培 养；4) 将培养瓶置于培养室中进行培养，培养室中的条件与2)相同；5) 从10 12天开始，外植体膨大并形成愈伤组织，16天后愈伤组织变 绿并长出芽点，30天左右芽点长出小植株；6) 45 50天后，将直接分化出的不定芽与植株进行诱导生根，移栽。
全文摘要
一种快速直接建立合欢再生植株体系的方法，用于木本植物基因受体生物技术领域。将合欢种子经表面消毒后无菌播种于培养基上，一周左右，切取无菌播种苗下胚轴置于诱导与分化合一的TJ801培养基上离体培养，建立高频再生系统，将直接分化出的不定芽诱导生根，移栽。本发明的方法简单易行，用本发明的技术所建立的“两步法”直接出芽程序为合欢遗传转化研究提供一个良好的再生体系，也为今后开展合欢的快速繁殖、转基因与分子育种提供良好的技术平台。本方法具有一步成苗可快速建立基因转化受体系统的优点，重复性强和简单容易。
文档编号A01H4/00GK101658133SQ20081005434
公开日2010年3月3日 申请日期2008年8月29日 优先权日2008年8月29日
发明者付任胜, 周祥明, 夏时云 申请人:天津市农业生物技术研究中心