专利名称：一种含石斛小菇菌丝体液的铁皮石斛组培苗的营养培养液的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物组培培养技术领域，尤其是涉及铁皮石斛组培苗培养的营养 培养液。
背景技术：
铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall, ex Lindl.)是中华人民共和国药 典一部所收载的药用石斛之一，为名贵药用植物。具有滋阴清热、益胃生津、 清嗓明目，增强人体免疫力等功效。由于过度采挖和自然资源的严重破坏，1978 年被国家列为重点保护的濒危中药材。铁皮石斛作为一种常用的中药材，市场 需求量较大，如何解决需求与资源之间的矛盾？唯一的途径就是人工栽培。国 内外学者是也对铁皮石斛的生长习性进行全面的摸索，自从组培技术应用到铁 皮石斛的人工栽培领域当中，虽获成功，但是周期长、成活率、出苗率低导致 产量与规模仍不上去；很难满足社会应用需要。
发明内容
本发明主要是描述一种含石斛小菇菌丝体液的铁皮石斛组培苗的营养培养 液的配方，使用该配方进行培养与单纯使用常规组培培养基相比，能够明显促 进铁皮石斛的生长，提高铁皮石斛组培苗生长速度，縮短组培苗出苗时间，显 著提高组培苗的成活率、出苗率，从而达到提高铁皮石斛产量的目的。
本发明所述的含石斛小菇菌丝体液的铁皮石斛组培苗的营养培养液，其组分 体积百分比为MS基本培养基50~80%、椰子汁10 20%、生长调节剂2~10%、 石斛小菇菌丝体液5~25%。其中MS基本培养基为植物组织培养的常规用营养培养基，包括有无机盐
营养成分、有机物营养成分，具体配制组分可为NH4N03 1600~1700mg、 KN03 1800~2000mg、 CaCl2 2H20 400~480mg、 MgS04 7H20 300~440mg、 KH2P03 1600~1800mg、 KI0.78~0.88mg、 H3B03 5.8 6.6mg、 MnS04 4H20 21.8 22.8mg、 ZnS04 '7H20 8.0~9.2mg、Na2MnO4 '2H20 0.2 0.3mg、 CuS04 ,0 0.02~0.03mg、 CoCl2 6H20 0.02 0.03mg、 FeS04 7H20 26.8 28.8mg、 Na2-EDTA 2H20 36.3 38.3mg、肌醇90 110mg、烟酸0.4 0.6mg、盐酸吡眵醇0.4~0.6mg、盐酸 硫胺素0.4~0.6mg、甘氨酸1.5~2.5mg、蔗糖30g，以上成分均用无菌水溶解， 最后定容至1000ml;
生长调节剂为常规植物组培试剂，对组培苗起着生长调节与促进作用，具体 配制组分可为2,4-二氯苯氧乙酸8~12mg、萘乙酸8 12mg、乙醇0.8 1.2ml、 6-苄基嘌呤8 10mg、 NaOH 3~5mg，以上成分均用无菌水溶解，最后定容至 100ml;
椰子汁是将鲜椰子打开取汁，提供组培苗生长所需营养物质； 石斛小菇菌丝体液为将从野生铁皮石斛根段分离培养出的石斛小燕在真菌 培养液进行继续培养所形成的石斛小菇菌丝体液，因为石斛小薛与铁皮石斛存 在着共生的关系，菌丝体液能很好地促进、保护铁皮石斛组培苗的生长。根据 组培过程的不同。
本发明所述的营养液可依所述配比按常规方法配制，无特殊要求。其使用也 按常规方法进行。
在铁皮石斛的组培各个过程中使用本发明所述的含石斛小菇菌丝体液的铁 皮石斛组培苗的营养培养液，均可明显促进组培苗生长，縮短组培苗出苗移栽 的时间，能显著提高铁皮石斛组培苗的成活率。用未加入石斛小菇菌丝体液的常规营养培养液进行铁皮石斛组培的出苗移栽周期为8~10个月，成活率在 50~70%;而用本发明所述的含生长促进剂的铁皮石斛组培苗的营养培养液进行
铁皮石斛组培的出苗移栽周期为5 6个月，成活率在90 100%。
具体实施例方式
实施例1:
选取生长良好的铁皮石斛萌发芽切取其茎段作为外植体，用水冲洗30min， 洗净，接种于本发明所述的营养培养液中，其组成(按体积百分比)为MS基 本培养基80%、椰子汁10%、生长调节剂5%、石斛小燕菌丝体液5%的培养基
(每1LMS基本培养基各组分的重量为NH4N03 165mg、 KN03 1900mg、 CaCl2 '2H2O440mg、 MgS04 '7H2O370mg、 KH2P03 1700mg、 Kl 0,83mg、 H3B03 6.2mg、 MnS04 4H20 22.3mg、 ZnS04 7H20 8.6mg、 Na2Mn04 2H20 0.25mg、 CuS04 5H20 0.025mg、 CoCl2 6H20 0.025mg、 FeS04 7H20 27.8mg 、 Na2-EDTA 2H20 37.3mg、肌醇100mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5mg、盐 酸硫胺素0.5mg、甘氨酸2mg、蔗糖30g，其余成分为无菌水；MS组培营养基 各母液可以从济南昊天科技发展有限公司等购买，也可自行配制。生长调节剂 采用市售试剂，也可自行配制，按每100ml生长调节剂中各组分重量为2,4-二氯苯氧乙酸10mg、萘乙酸10mg、乙醇1.0ml、 6-苄基嘌呤9mg、 NaOH4mg、 其余成分为无菌水。取MS基本培养基800ml、生长调节剂50ml、椰子汁100ml 混合均匀，灭菌后备用；再加入石斛小菇菌丝体液50ml配制而成。)中进行诱 导培养成原球茎。
选取生长良好的铁皮石斛萌发芽切取其茎段作为外植体，用水冲洗30min， 洗净，接种于本发明所述的营养培养液中，其组成为MS基本培养基85%、椰子汁10%、生长促进剂5%的培养基(每1LMS基本培养基各组分的重量为
NH4N03 165mg、 KN03 1900mg、 CaCl2 2H20 440tng、 MgS04 7H20 370mg、 KH2P03 1700mg、 KI 0,83mg、 H3B03 6,2mg、 MnS04 '4H20 22.3mg、 ZnS04 *7恥 8.6mg、 Na2Mn04 '2H2O0.25mg、 CuS04 '5H20 0.025mg、 CoCl2 '6H20 0.025mg、 FeS04 7H20 27.8mg、 Na2-EDTA 2H20 37.3mg、肌醇100mg、烟酸0.5mg、 盐酸吡哆醇0.5mg、盐酸硫胺素0.5mg、甘氨酸2mg、蔗糖30g，其余成分为 无菌水。每100ml生长调节剂中各组分重量为2,4-二氯苯氧乙酸10mg、萘乙 酸10mg、乙醇L0ml、 6-苄基嘌呤9mg、 NaOH 4mg、其余成分为无菌水。取 MS基本培养基850ml、生长调节剂50ml、椰子汁100ml混合均勻，灭菌后备用。) 中进行诱导培养成原球茎。
使用本发明所述含石斛小菇菌丝体液的营养培养液进行组培的诱导培养时 间为20天；而使用不含石斛小菇菌丝体液的常规组培营养液进行组培的诱导 时间为30天。
实施例2:
选取经过用本发明所述营养培养液进行了诱导培养、扩繁增殖、壮苗后有
4~8条根、6 10片叶的铁皮石斛组培苗，用15 20摄氏度的清水洗净，然后将 铁皮石斛栽种于浮于该发明所述的营养培养液的泡沫上，此营养培养液组成为 MS基本培养基50y。、椰子汁20%、生长调节剂5%、石斛小菇菌丝体液25%的 培养基(每1LMS基本培养基各组分的重量为NH4N03 165mg、 KN03 1900mg、 CaCl2 '2H20 440mg、 MgS04 '7H20 370mg、 KH2P03 1700mg、 KI 0.83mg、 H3B03 6.2mg、 MnS04 4H20 22.3mg、 ZnS04 7H20 8.6mg、 Na2Mn04 2H20 0.25mg、 CuS04 5H20 0.025mg、 CoCl2 6H20 0.025mg 、 FeS04 7H20 27.8mg 、 Na2-EDTA 2H20 37.3mg、肌醇100mg、烟酸0.5mg、盐酸吡眵醇0.5mg、盐酸硫胺素0.5mg、甘氨酸2mg、蔗糖30g，其余成分为无菌水。每100ml生长 促进剂中各组分重量为2,4-二氯苯氧乙酸10mg、萘乙酸10mg、乙醇l.Oml、 6-苄基嘌呤9mg、 NaOH4mg、其余成分为无菌水。取MS基本培养基500ml、 生长调节剂50ml、椰子汁200ml混合均匀，灭菌后备用；再加入石斛小竊菌丝 体液250ml配制而成。)，进行驯化培养。
选取经过用常规组培营养培养液进行了诱导培养、扩繁增殖、壮苗后有4 8 条根、6~10片叶的铁皮石斛组培苗，用15 20摄氏度的清水洗净，然后将铁皮 石斛栽种于浮于常规组培的营养培养液的泡沫上，此营养培养液组成为MS基 本培养基70%、椰子汁20%、生长调节剂10%的培养基(每1LMS基本培养基 各组分的重量为NH4N03 165mg、 KN03 1900mg、 CaCl2 2H20 440mg、 MgS04 *7H20 370mg、 KH2P03 1700mg、 KI 0.83mg、 H3B03 6.2mg、 MnS04 '4H20 22.3mg、 ZnS04 '7H20 8.6mg、 Na2Mn04 '2H2O0.25mg、 CuS04 '5^0 0.025mg、 CoCl2 6H20 0.025mg、 FeS04 7H20 27.8mg、 Na2-EDTA 2H20 37.3mg、肌醇 100mg、烟酸0.5mg、盐酸吡哆醇0.5mg、盐酸硫胺素0.5mg、甘氨酸2mg、 蔗糖30g，其余成分为无菌水。每100ml生长促进剂中各组分重量为2，4-二氯 苯氧乙酸10mg、萘乙酸10mg、乙醇1.0ml、 6-节基嘌呤9mg、 NaOH 4mg、其 余成分为无菌水。取MS基本培养基750ml、生长调节剂50ml、椰子汁200ml 混合均匀，灭菌后备用)，进行驯化培养。
使用本发明所述含石斛小菇菌丝体液驯化培养时间为30天；驯化培养后， 铁皮石斛组培苗即可移栽到仿野生的大棚中，移栽成活率为95%。而使用常规 组培营养液驯化培养时间为60天；驯化培养后，铁皮石斛组培苗移栽到仿野 生的大棚中，移栽成活率仅为65%。
权利要求
1、一种含石斛小菇菌丝体液的铁皮石斛组培苗的营养培养液，其特征在于其组分体积百分比为MS基本培养基50～80％、椰子汁10～20％、生长调节剂2～10％、石斛小菇菌丝体液5～25％。
2、 按照权力要求1所述的含石斛小菇菌丝体液的铁皮石斛组培苗的营养 培养液，其特征在于所述MS基本培养基为每升培养基含有以下组分的重量 NH4N03 1600 1700mg、 KN03 1800 2000mg、 CaCl2 2H20 400 480mg 、 MgS04 7H20 300 440mg、 KH2P03 1600~1800mg、 KI 0.78~0.88mg、 H3B03 5.8 6.6mg、MnS04 ,0 21.8 22.8mg、 ZnS04 .7H20 8.0 9.2mg、Na2MnO4 '2恥 0.2 0.3mg、 CuS04 '5H20 0.02~0.03mg、 CoCl2 '6H20 0.02 0.03mg、 FeS04 ,20 26.8 28.8mg、 Na2-EDTA '2H20 36.3 38.3mg、肌醇90 110mg、烟酸0.4 0.6mg、 盐酸吡哆醇0.4~0.6mg、盐酸硫胺素0.4~0.6mg、甘氨酸1.5~2.5mg、蔗糖30g， 其余成分为无菌水。
3、按照权力要求1所述的含石斛小菇菌丝体液的铁皮石斛组培苗的营养培 养液，其特征在于所述的生长调节剂为每100ml中含有以下组分的量为2,4-二氯苯氧乙酸8 12mg、萘乙酸8 12mg、乙醇0.8 1.2ml、 6-节基嘌呤8 10mg、 NaOH3 5mg、其余成分为无菌水。
4、按照权力要求1所述的含石斛小菇菌丝体液的铁皮石斛组培苗的营养培 养液，其特征在于所述的石斛小菇菌丝体液为将从野生铁皮石斛根段分离培 养出的石斛小菇在真菌培养液进行继续培养所形成的石斛小薛菌丝体液。
全文摘要
本发明公开一种含石斛小菇菌丝体液的铁皮石斛组培苗的营养培养液，其特征在于其组分体积百分比为MS基本培养基50～80％、椰子汁10～20％、生长调节剂2～10％、石斛小菇菌丝体液5～25％。在铁皮石斛的组培各个过程中使用本发明所述的含石斛小菇菌丝体液的铁皮石斛组培苗的营养培养液，均可明显促进组培苗生长，缩短组培苗出苗移栽的时间，能显著提高铁皮石斛组培苗的成活率。用未加入石斛小菇菌丝体液的常规营养培养液进行铁皮石斛组培的出苗移栽周期为8～10个月，成活率在50～70％；而用本发明所述的含生长促进剂的铁皮石斛组培苗的营养培养液进行铁皮石斛组培的出苗移栽周期为5～6个月，成活率在90～100％。
文档编号A01H4/00GK101548645SQ20091004340
公开日2009年10月7日 申请日期2009年5月14日 优先权日2009年5月14日
发明者刘赞辉, 张苏锋, 梁经军, 赵兴兵 申请人:湖南龙石山铁皮石斛基地有限公司