专利名称：红花银桦组培快繁及栽培方法
技术领域：
本发明涉及植物组织培养及栽培技术领域，更具体的说是涉及红花银桦组培快繁
及栽培方法。
背景技术：
红花银桦(Grevillea banksii)又称昆士兰银桦、班西银桦，是山龙眼科银桦属常 绿乔木，开红花，花期长，花量大，抗污染能力强，原产于澳大利亚昆士兰洲，在澳大利亚被 广泛应用为行道树、庭园树。1967年引进台湾，深受群众喜爱。目前，香港、广州、昆明等地 均有少量引种，均可正常生长及开花，园林景观特性好。红花银桦树冠修长，叶簇轮廓清晰 可见，春末夏初满树红花，对栽培土质选择不严，十分适宜华南地区作行道树或庭园观赏树 种植。这些特点使得它将来有着广阔的市场空间，广州市城市绿地系统规划已将红花银桦 列入广州市中期推荐发展行道树种，因此苗木生产者对该树种种苗需求量大。但由于其在 澳大利亚产种子价格高昂，近万元一公斤，且发芽率只有76%，成本较高。引进国内后由于 扦插繁殖比较困难，较难生根成活，成活率仅为20%，因此主要采取圈枝繁殖方式，但圈枝 繁殖不仅繁殖数量少、时间长，而且培育出来的苗木主干不明显，分枝过多，影响树形。
发明内容
本发明就是为了解决上述技术不足而提供的红花银桦组培快繁及栽培方法，利用 组织培养技术快速繁殖和栽培红花银桦，不仅繁育周期短，可以周年生产，获得大量的优质 商品苗木，而且能保证红花银桦品种的优越性。 本发明是采用如下技术方案来实现上述目的一种红花银桦组培快繁及栽培方 法，其特征在于，包括以下步骤 (1)材料的选择和消毒；选取带芽点且健壮、无病的红花银桦枝条，剪成长1. 0 1. 5cm带芽点的小段，用自来水流水冲洗15 20min，沥干水后用75%的乙醇溶液浸泡 20s，再转移到超净工作台上用0. 1%升汞溶液浸泡12 15min，用无菌水冲洗5 6次后 备用； (2)愈伤组织的培养；将步骤(1)所得的无菌芽点接种到诱导培养基中培养，诱导 产生愈伤组织，培养温度为25± 1°C ，光照度30 40 ii mol *m—2 s—、光照时间为每天12小 时； (3)愈伤组织的增殖；把步骤(2)获得的愈伤组织切成小块接种到增殖培养基上 培养，使愈伤组织大量增殖，培养温度为25± 1°C ，光照度30 40 ii mol *m—2 s—、光照时间 为每天12小时； (4)不定芽的诱导及扩繁；将步骤(2)或(3)所得的愈伤组织接种到分化培养基 里培养，诱导愈伤组织长出不定芽芽丛，再把芽丛分离接种到多个分化培养基培养，获得大 量不定芽，培养温度为25士rC，光照度30 40iimo1 m—2 s—、光照时间为每天12小时；
(5)不定芽的生根培养；当步骤(4)所得的不定芽长到2. 5 3cm高时，把不定芽
3分开转接入生根培养基上培养20d，培养温度为25士rC，光照度30 40iimo1 m—2 s—、 光照时间为每天12小时； (6)移栽和炼苗；当步骤(5)所得生根的不定芽高达3 5cm时，将其连带培养基 一起移至炼苗场地炼苗，该炼苗场地遮光率为85 95%，温度为15 25tV炼苗3 5d 后，将组培苗从瓶中取出，放在2(TC的温水中洗去附着在根上的培养基，然后移栽到喷洒了 0. 3% 0. 5%高锰酸钾溶液消毒的苗床上，保持15 25°〇的温度、80%以上湿度的栽培条 件，35d后移栽到自然条件下的土壤中； 上述诱导培养基为MS+3. Omg L—VBA+0. lmg L—、AA+0. lmg L—'TDZ，3X蔗糖，
0. 65%卡拉胶，PH5. 8 6. 2 ; 增殖培养基为MS+(2. 0 3. O)mg L—^-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉胶， PH5. 8 6. 2 ; 分化培养基为MS+(0. 5 1. 5)mg L—'6-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉胶， PH5. 8 6. 2 ; 生根培养基为MS+(0. 2 0. 6)mg *L—、AA， 3%蔗糖，0. 65X卡拉胶，PH5. 8 6. 2。
作为上述方案的进一步说明，所述增殖培养基为MS+2. 5mg L—^-BA+NAA 0. 1， 3%蔗糖，0. 65%卡拉胶，PH5. 8 6. 2 ; 分化培养基为MS+1. Omg L—丄6-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉胶，PH5. 8 6. 2 ; 生根培养基为MS+0. 4mg L,AA， 3%蔗糖，0. 65%卡拉胶，PH5. 8 6. 2。所述增殖培养基为MS+2. 8mg L—'6-BA+NAA 0. 1 ， 3 %蔗糖，0. 65 %卡拉胶，
PH5. 8 6. 2 ; 分化培养基为MS+0. 8mg L—'6-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉胶，PH5. 8 6. 2 ; 生根培养基为MS+0. 5mg *L—、AA， 3%蔗糖，0. 65%卡拉胶，0. 5X活性炭，PH5. 8 6. 2。 所述步骤(6)中苗床的基质为2 : 8体积比的砂和已堆沤腐熟的椰子壳混合物。 所述炼苗场地为室温或室外阴棚。 本发明采用以上技术方案所能达到的有益效果是 1.本发明利用现代生物技术手段，采取组织培养的快繁技术，在短时间内生产大 量优质红花银桦苗木供应社会需求，供城市园林和工矿区绿化应用，对绿化、美化城乡环 境、净化污染区空气、带动花农调整传统种植结构增加农民收入具有重大的社会意义和较 大的经济效益。
具体实施例方式
为进一步阐述本发明，以下结合优选的实施例对本发明作详细说明
实施例一 本实施例是一种花银桦组培快繁及栽培方法，具体包括以下步骤 (1)材料的选择和消毒；选取带芽点且健壮、无病的红花银桦枝条，剪成长约
1. 5cm左右带芽点的小段，用自来水流水冲洗20min，沥干水后用75%的乙醇溶液浸泡20s，再转移到超净工作台上用0. 1%升汞溶液浸泡12 15min，用无菌水冲洗5 6次后备用；
(2)愈伤组织的培养；将步骤(1)所得的无菌芽点接种到诱导培养基中培养，诱导 产生愈伤组织，该诱导培养基为MS+3. 0mg *L—k-BA+O. lmg *L—、AA+0. lmg *L—'TDZ， 3%蔗糖， 0. 65%卡拉胶，ra调至5. 8 6. 2，培养温度为25士rC，光照度30 40iimo1 m—2 s—、 光照时间为每天12小时；培养20d左右芽点侧部即可长出致密的愈伤组织；
(3)愈伤组织的增殖；把步骤(2)获得的愈伤组织切成小块接种到增殖培养基上 培养，使愈伤组织大量增殖，培养温度为25士rC，光照度30 40mol *m—2 s—、光照时间为 每天12小时，该增殖培养基为MS+2. 5mg L—VBA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉胶，PH调 至5. 8 6. 2，接种后愈伤组织大量增殖，偶有较粗的不定芽长出，但难以成长为良好的不 定芽； (4)不定芽的诱导及扩繁；将步骤(3)所得的愈伤组织接种到分化培养基里培 养，诱导愈伤组织长出不定芽芽丛，该分化培养基为MS+1. Omg L—^-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖， 0. 65%卡拉胶，1^调至5. 8 6. 2，接种后7d左右开始长出不定芽，平均增殖倍数可达4. 0 倍，15d左右不定芽开始伸长，高约2. 5cm，叶片展开，长势良好，在基部还有少量愈伤组织； 待培养基内的芽丛快长满时，再把芽丛分离接种到多个分化培养基培养，以获得大量不定 芽，但继代间隔不能超过50d，培养温度为25± 1°C ，光照度30 40 ii mol m—2 s—、光照时 间为每天12小时； (5)不定芽的生根培养；当步骤(4)所得的不定芽长到大约3cm高时，把不定芽分 开转接入生根培养基上培养，该生根培养基为MS+0. 4mg L—、AA，3X蔗糖，0. 65%卡拉胶， ra调至5. 8 6. 2，20d，培养温度为25士rC，光照度30 40iimo1 m—2 s—、光照时间为 每天12小时；在接种后10 15d后根系开始长出，20d生根率达80%以上，每株不定芽平 均长出3条左右的根，根系较粗，须根较多，平均根长4. 5cm，但有轻微褐变现象，根系为浅 褐色； (6)移栽和炼苗；当步骤(5)所得生根的不定芽高达3 5cm时，将其连带培养基 一起移至室外阴棚炼苗，该阴棚的遮光率需为85 95%，温度要保持在15 25tV炼苗 3 5d后，将组培苗从瓶中取出，放在20°C的温水中洗去附着在根上的培养基，洗时注意不 能伤根，然后移栽到苗床上，移栽前用0. 3% 0. 5%高锰酸钾溶液喷洒基质，该苗床的基 质为2 : 8体积比的砂和已堆沤腐熟的椰子壳混合物，移栽后保持15 251:的温度、80% 以上湿度的栽培条件，35d后移栽到自然条件下的土壤中成活率可达100%。
实施例二 本实施例和实施例一相比，除增殖培养基、分化培养基和生根培养基的配方不同 外，其余步骤和实施例一的完全一致。 本实施例中的增殖培养基为MS+2. 8mg L—^-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉 胶，PH调至5. 8 6. 2，其中6-BA的浓度高于实施例一的2. 5mg L-、与实施例一相比，愈 伤组织增殖更快，并能抑制不定芽的长出，更方便于愈伤组织的管理和接种；
分化培养基为MS+0. 8mg *L—VBA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65X卡拉胶，PH5. 8 6. 2， 其中6-BA的浓度低于实施例一的1. Omg L—、与实施例一相比，诱导不定芽生长的效果更 好，且不定芽基本没有再分化出愈伤组织，更方便于不定芽芽丛的分离和生根培养；
生根培养基为MS+0. 5mg L—、AA， 3%蔗糖，0. 65%卡拉胶，0. 5%活性炭，8 6. 2，其中NAA的浓度低于实施例一的0. 4mg L—、而且在培养基中添加了粉末状的活性炭， 用以抑制褐变，与实施例一相比，在同样培养30d后，本实施例中不定芽的根系更粗壮发 达，且颜色浅于实施例一。 本发明上述方法所示仅为本发明较佳实施例之一部分，并不能以此局限本发明， 在不脱离本发明精髓的条件下，本领域技术人员所做的任何变动，都属本发明的保护范围。
权利要求
一种红花银桦组培快繁及栽培方法，其特征在于，包括以下步骤(1)材料的选择和消毒；选取带芽点且健壮、无病的红花银桦枝条，剪成长1.0～1.5cm带芽点的小段，用自来水流水冲洗15～20min，沥干水后用75％的乙醇溶液浸泡20s，再转移到超净工作台上用0.1％升汞溶液浸泡12～15min，用无菌水冲洗5～6次后备用；(2)愈伤组织的培养；将步骤(1)所得的无菌芽点接种到诱导培养基中培养，诱导产生愈伤组织，培养温度为25±1℃，光照度30～40μmol·m-2·s-1，光照时间为每天12小时；(3)愈伤组织的增殖；把步骤(2)获得的愈伤组织切成小块接种到增殖培养基上培养，使愈伤组织大量增殖，培养温度为25±1℃，光照度30～40μmol·m-2·s-1，光照时间为每天12小时；(4)不定芽的诱导及扩繁；将步骤(2)或(3)所得的愈伤组织接种到分化培养基里培养，诱导愈伤组织长出不定芽芽丛，再把芽丛分离接种到多个分化培养基培养，获得大量不定芽，培养温度为25±1℃，光照度30～40μmol·m-2·s-1，光照时间为每天12小时；(5)不定芽的生根培养；当步骤(4)所得的不定芽长到2.5～3cm高时，把不定芽分开转接入生根培养基上培养20d，培养温度为25±1℃，光照度30～40μmol·m-2·s-1，光照时间为每天12小时；(6)移栽和炼苗；当步骤(5)所得生根的不定芽高达3～5cm时，将其连带培养基一起移至炼苗场地炼苗，该炼苗场地遮光率为85～95％，温度为15～25℃，炼苗3～5d后，将组培苗从瓶中取出，放在20℃的温水中洗去附着在根上的培养基，然后移栽到喷洒了0.3％～0.5％高锰酸钾溶液消毒的苗床上，保持15～25℃的温度、80％以上湿度的栽培条件，35d后移栽到自然条件下的土壤中；上述诱导培养基为MS+3.0mg·L-16-BA+0.1mg·L-1NAA+0.1mg·L-1TDZ，3％蔗糖，0.65％卡拉胶，PH5.8～6.2；增殖培养基为MS+(2.0～3.0)mg·L-16-BA+NAA 0.1，3％蔗糖，0.65％卡拉胶，PH5.8～6.2；分化培养基为MS+(0.5～1.5)mg·L-16-BA+NAA 0.1，3％蔗糖，0.65％卡拉胶，PH5.8～6.2；生根培养基为MS+(0.2～0.6)mg·L-1NAA，3％蔗糖，0.65％卡拉胶，PH5.8～6.2。
2. 根据权利要求1所述的红花银桦组培快繁及栽培方法，其特征在于所述增殖培养 基为MS+2. 5mg L—VBA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉胶，PH5. 8 6. 2 ;分化培养基为MS+1. 0mg L—'6-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉胶，8 6. 2 ; 生根培养基为MS+0. 4mg L,AA，3X蔗糖，0. 65%卡拉胶，PH5. 8 6. 2。
3. 根据权利要求1所述的红花银桦组培快繁及栽培方法，其特征在于所述增殖培养 基为MS+2. 8mg L—VBA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉胶，PH5. 8 6. 2 ;分化培养基为MS+0. 8mg L—'6-BA+NAA 0. 1，3%蔗糖，0. 65%卡拉胶，8 6. 2 ; 生根培养基为MS+0. 5mg *L—、AA，3X蔗糖，0. 65%卡拉胶，0. 5X活性炭，PH5. 8 6. 2。
4. 根据权利要求1、2或3所述的红花银桦组培快繁及栽培方法，其特征在于所述步 骤(6)中苗床的基质为2 : 8体积比的砂和已堆沤腐熟的椰子壳混合物。
5. 根据权利要求4所述的红花银桦组培快繁及栽培方法，其特征在于所述炼苗场地 为室温或室外阴棚。
全文摘要
本发明公开了一种快速繁育红花银桦的方法，主要包括材料的选择和消毒、愈伤组织的培养、愈伤组织的增殖、不定芽的诱导及扩繁、不定芽的生根培养、移栽和炼苗等步骤。本发明利用组织培养快速繁殖技术，不仅繁育周期短，可以周年生产，获得大量的优质商品苗木，而且能保证红花银桦品种的优越性。
文档编号A01G31/00GK101743908SQ20091021405
公开日2010年6月23日 申请日期2009年12月22日 优先权日2009年12月22日
发明者何丽烂, 刘碧容, 吴小英, 张学平, 李磊, 杨悦林, 柯欢, 殷爱华, 温海祥, 温玉辉, 王志云, 王慧珍, 田雪琴, 罗昭润, 胡羡聪, 萧洪东, 薛克娜, 谭家得, 赵鸿杰, 陆耀东, 陈香 申请人:佛山市林业科学研究所;佛山科学技术学院