专利名称：一种适用于大规模种植的构树种苗组织培养方法
技术领域：
本发明主要是涉及一种适用于大规模种植的构树种苗组织培养方法，属于植物繁殖领域。
背景技术：
构树是我国特有的含纤维树种，属特种经济林，其韧皮纤维和树叶等利用价值极高，市场开发前景广阔。它分布广，适应性极强，繁殖容易，耐干旱瘠薄，又是很好的生态和薪材树种。构树的叶片中蛋白质含量非常高，可达到20 30%，远高于大米、玉米、小麦，仅次于大豆；另外氨基酸、维生素、碳水化合物以及微量元素含量都非常丰富，是生产加工畜类饲料的纯天然原料，用该饲料喂养的猪，瘦肉率高，肉质纯正，味道鲜美，堪称为真正的畜类绿色食品。加速培育构树，扩大构树资源是保证宣纸制造和饲料加工业持续发展的重要基础，也是增加农民收益的重要途径。当前，国内外学者对构树的研究主要集中于造纸原料和药理成分等方面，远未发挥其应有的生态效益和经济效益，构树优良种源的引进与选育、应用研究等方面急需加强科研开发力度。所以，开展构树良种选育和组培快繁研究，利用现代生物技术手段，在建立组培再生和遗传转化的基础上，选育出适合在全国范围内推广种植的优良新品种是目前研究的重要方面。
发明内容
本发明的目的在于提供一种适用于大规模种植构树的组织培养方法，该培养方法包括芽诱导培养和不定根诱导培养。经过数轮继代培养后，芽生长正常，炼苗成活率达到 90%以上，可以显著提高构树叶的产量。本发明的方法，采用如下步骤(1)材料的处理。采来的构树顶端胚芽，要经过无菌处理，才能进行诱导试验。( 芽的诱导。经表面灭菌处理好的材料接种在空白萌发培养基上，然后转入诱导培养基上进行诱导试验，每瓶接种一个腋芽，3周后记录并计算诱导率，确定繁殖系数。(3)根的诱导。芽诱导培养之后进行不定根诱导培养。在萌发培养基中添加6-BA、 NAA和IBA得到不定根诱导培养基。试验选用IBA为诱导生根激素，浓度为0. lmg/L。3周后记录并计算诱导率。(4)移栽。诱导出根的小苗，需移栽到泥炭细沙混合培养基质中，栽培炼苗，然后移栽到室外大田上。四周后统计移栽成活率。在上述方法中，步骤(1)材料要用棉花团醮加入了少量洗洁精的水液轻擦枝条及其液芽处，自来水冲洗1 池，在超净工作台上，70%酒精灭菌30s，无菌水冲洗3 4次， 0. 1 %升汞灭菌3 ^iin，无菌水冲洗3 4次。在上述方法中，步骤(2)培养条件温度25(士2)°C，光照时间14h/d，光照强度 15001x,培养基pH 5. 8，蔗糖30g/L,卡拉胶6. 4g/L，灭菌温度121 °C，灭菌时间18 20min。
在上述方法中，步骤(3)培养条件为温度25(士2)°C，光照时间10h/d，光照强度 20001x，灭菌温度121 °C，灭菌时间18 20min。在上述方法中，步骤(4)根必须长0.5cm时才能移栽，培养条件为温度 25(士幻°〇，湿度65%。本发明以构树的顶端胚芽为外植体，经过培养基的筛选，制成了诱导的专用培养基，成功的建立了构树组织培养育苗的全套体系，为构树大量组织培养快速繁殖提供了一条可靠的技术和方法。本发明的积极效果是采用组织培养方法，繁殖系数达6 7倍，在短期内能提供大量的优质种苗，加快了构树推广应用的速度。与同类方法相比具有很大优势。如根插育苗虽然比较容易操作，但是会严重损害母株，枝插繁殖生根困难，成活率低；种籽育苗方法中由于构树种子较小，种皮坚硬，常规田间发芽率不足4%，造成种子的大量浪费和造林中构树种苗的缺乏。所以本发明具有很强的实用意义，采用组织培养法繁育种苗，实现矮、密、 早、丰栽种管理技术，可实现一年种树，第二年见成效，为大规模构树育种提供了快速有效途径。
具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明实施例1取采来的健康饱满的构树顶端胚芽材料，用棉花团醮加入了少量洗洁精的水液轻擦枝条及其液芽处，自来水冲洗1.5h，在超净工作台上，70%酒精灭菌30s，无菌水冲洗3 次，0. 升汞灭菌:3min，无菌水冲洗3次。经表面灭菌处理好的材料接种在空白DCR萌发培养基上，置于光照培养箱中培养。实验分别取50个顶端胚芽，设3组重复进行实验，在温度25(士2) °C，光照时间12h/d，光照强度15001x条件下培养3周，以长出幼叶为萌发标准统计萌芽率。然后取苗高1. 0 3. Ocm的萌发小苗50株，剪成5 IOmm长度的带叶茎段， 转入诱导培养基上进行诱导试验，每瓶接种一个腋芽，培养条件为温度25(士幻°〇，光照时间 14h/d，光照强度 18001x，培养基 pH 5. 8,6-BA 2. Omg/L, NAA 0. 5mg/L，蔗糖 30g/L，卡拉胶6.4g/L，灭菌温度121°C，灭菌时间20min。3周后记录并计算诱导率。芽诱导培养之后进行不定根诱导培养。在萌发培养基中添加6-BAO. 2mg/L,NAA0. lmg/L, IBAO. lmg/L得到不定根诱导培养基。在温度25( 士 2)°C，光照时间10h/d，光照强度22001x，培养6周。当诱导出得根长0. 5cm时移栽到泥炭细沙混合培养基质中，在温度25 (士幻°C，湿度65 %的条件下培养4周，之后逐渐加大光照强度，植株成活率可达91%。待植株发育成熟后，将其植入室外大田上种植。实施例2取采来的健康饱满的构树顶端胚芽材料，用棉花团醮加入了少量洗洁精的水液轻擦枝条及其液芽处，自来水冲洗1.5h，在超净工作台上，70%酒精灭菌30s，无菌水冲洗3 次，0. 升汞灭菌:3min，无菌水冲洗3次。经表面灭菌处理好的材料接种在空白DCR萌发培养基上，置于光照培养箱中培养。实验分别取50个顶端胚芽，设3组重复进行实验，在温度25(士2) °C，光照时间14h/d，光照强度ISOOIx条件下培养3周，以长出幼叶为萌发标准统计萌芽率。然后取苗高1. 0 3. Ocm的萌发小苗50株，剪成5 IOmm长度的带叶茎段，
4转入诱导培养基上进行诱导试验，每瓶接种一个腋芽，培养条件为温度25(士幻°〇，光照时间 16h/d，光照强度 20001x，培养基 pH 5. 8,6-BA1.0mg/L,NAA 0. :3mg/L，蔗糖 20g/L，卡拉胶 6. 4g/L，灭菌温度121°C，灭菌时间20min。3周后记录并计算诱导率。芽诱导培养之后进行不定根诱导培养。在萌发培养基中添加6-BAO. 3mg/L,NAA 0. 2mg/L, IBA 0. 2mg/L得到不定根诱导培养基。在温度25( 士 2)°C，光照时间12h/d，光照强度MOOlx，培养6周。当诱导出得根长0. 5cm时移栽到泥炭细沙混合培养基质中，在温度25 (士幻°C，湿度65 %的条件下培养4周，之后逐渐加大光照强度，植株成活率可达94 %。待植株发育成熟后，将其植入室外大田上种植。
权利要求
1.一种适用于大规模种植的构树种苗组织培养方法，特征在于包括胚芽预处理，芽的诱导培养，根的诱导培养以及移栽培植等步骤。
2.根据权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于将构树顶芽在萌发培养基中培养，萌发培养基为DCR培养基。
3.根据权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于将萌发培养基中培养得到的幼芽在芽诱导培养基上进行不定芽诱导和继代培养，得到无根苗。
4.根据权利要求3所述的组织培养方法，所述的芽诱导培养基是在萌发培养基中添加 6-BA和NAA得到的培养基。所述6-BA的浓度为0. 1 2. Omg/L, NAA的浓度为0. 1 0. 5mg/ L0
5.根据权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于芽诱导培养之后进行不定根诱导培养。不定根诱导培养基是在萌发培养基中添加6-BA、NAA和IBA得到的培养基。所述6-BA 的浓度为0. 2 2. 5mg/L, NAA的浓度为0. 1 1. Omg/L, IBA的浓度为0. 1 0. 3mg/L。
6.根据权利要求1所述的组织培养方法，其特征在于所述萌发培养的条件为温度25(士2) °C，光照时间12 14h/d，光照强度1500 20001x ；芽诱导培养的条件为温度25(士2) °C，光照时间14 16h/d，光照强度1500 20001x ；根诱导培养条件为温度 25(士2)°〇，光照时间10 12h/d，光照强度2000 25001x。
全文摘要
属于植物繁殖领域。本发明公开了一种适用于大规模种植构树的组织培养方法，是将顶端胚芽在萌发培养基上长出幼芽后，接种在芽诱导培养基上繁殖，长出腋芽和不定芽后得到无根苗，然后将生长健壮的无根苗转接到生根培养基上进行不定根诱导。所述的培养基组分分别为萌发培养基DCR；芽诱导培养基在萌发培养基上加入6-BA和NAA，根诱导培养基在萌发培养基上加入6-苄氨基嘌呤(6-BA)、α-萘乙酸(NAA)和吲哚丁酸(IBA)。经过诱导增殖，大多数不定芽叶片肥厚，茎干膨大，经过数轮继代培养后，芽生长正常。本发明具有变异率低，增殖系数高的优点，炼苗成活率达到90％以上，适用于大规模种植构树的种苗提供，具有良好的经济效益和社会效益。
文档编号A01H4/00GK102461463SQ20101055389
公开日2012年5月23日 申请日期2010年11月17日 优先权日2010年11月17日
发明者张云峰, 胡伶俐, 谢明利, 陈晓炜 申请人:湖北国力生物技术开发有限公司