专利名称：一种桂南灵芝子实体的人工栽培方法
技术领域：
本发明涉及一种灵芝子实体的人工栽培方法，具体来说涉及一种桂南灵芝 (Ganodermaguinanense J. D. Zhao et X. Q. Zhang)子实体的人工栽培方法。
背景技术：
灵芝(Ganoderma Iucidum(Curtis)P. Karst.)由于含有灵芝多糖、灵芝多肽、三萜类、氨基酸、蛋白质、留类、甘露醇、香豆精苷、生物碱、有机酸以及微量元素Ge、P、Fe、Ca、 Mn、加等，具有抑制肿瘤、镇静镇痛、免疫调节、抗放射、保肝解毒、抗过敏、调节血压、降血脂和降血糖、镇咳祛痰平喘、抗缺氧抗衰老等功效，药食兼用且无毒副作用，从而受到广大消费者的青眯，市场需求旺盛。中国灵芝种类丰富，已知种类已超过100种，民间或文献中记述能利用的灵芝不少于20种，其中还有紫芝(Ganoderma sinense J.D.Zhao，L. W. Hsu&X. Q. Zhang)禾口松杉灵芝(Ganoderma tsugae Murri 11)等。桂南灵芝(Ganodermaguinanense J.D.Zhao et X. Q. Zhang)在当地又称黑芝等， 在分类上隶属于真菌界(Fungi)、担子菌门(Basidiomycota)、伞菌纲(Agaricomycetes)、 多孑L菌目(Polyporales)、灵芝禾斗(Ganodermatacea)、灵芝属(Ganoderma),目前仅在广西、 海南等地有分布。桂南灵芝的主要特征是担子果一年生，有柄，木栓质；菌盖近圆形，中央部分下凹，直径约7. 5cm，厚3 8mm，表面暗褐色到黑色，具有同心环纹但不明显，有纵皱，光滑，有似漆样光泽，边缘完整，锐，下面具狭窄的不孕带；菌肉呈均勻的褐色，厚3 5. 5mm，趋向边缘渐变薄；菌管长1 2mm，孔面褐色，管口近圆形，每毫米4 5个；菌柄中生，长约11cm，粗1 1. 2cm，具强烈的似漆样光泽，靠菌柄外层的菌肉稍硬，厚2 3mm， 淡褐色，内层软，褐色；皮壳构造由透明、薄壁的生殖菌丝和近无色、实心的骨架菌丝胶粘在一起而构成，彼此间不易分离开，组成菌丝多向一方倾斜，顶端膨大或者稍尖，通常宽2 4 μ m，长20 30 μ m;菌丝系统三体型生殖菌丝透明，薄壁，直径3 6 μ m，有横膈膜； 骨架菌丝稍带褐色或淡褐色，厚壁到实心，有时扭曲，树状分校或呈针状，骨架于直径3 4 μ m,分枝末端形成鞭毛状无色缠绕菌丝；缠绕菌丝无色，厚壁，直径1. 5 2 μ m ；担孢子宽卵圆形或近球形，双层壁，外壁无色透明，平滑，内壁具不清楚的小刺，无色到稍带褐色，
5-)6 11μπιΧ5 8μπι。当地或民间认为桂南灵芝具有镇静镇痛、保肝解毒、降血脂和降血糖、镇咳祛痰平喘等功效，或当作灵芝的替代品，其野生资源十分有限，且至今又还没有成功的人工栽培方法。
发明内容
本发明的目的在于开发出一种桂南灵芝子实体的人工栽培方法。我们通过将野生或栽培成功后获得的桂南灵芝新鲜子实体进行组织分离或孢子分离，然后在斜面PDA培养基上培养得到斜面母种，斜面母种在斜面综合PDA培养基中继续培养或复壮得到生产用母种，再接种到原种培养基中培养得到原种，其后经过生产种培养基的培养得到生产种，将生产种接种到生产用栽培基中，培养至长出成熟的子实体，从而实现了本发明的目的。本发明的桂南灵芝子实体的人工栽培方法，其特征包括以下的步骤(1)将桂南灵芝(Ganoderma guinanense J.D.Zhao et X. · Q. Zhang)的新鲜子实体进行组织分离，然后按培养基质量3% 5%接种量接种到斜面PDA培养基，于23 30°C、湿度60% 70%时培养6 18d，至菌丝长满斜面，挑取长势旺盛、粗壮均一的菌块于 4°C保藏备用或进一步培养，所述的斜面PDA培养基的原料组成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯75 85份，蔗糖6 10份，琼脂6 10份和松针3 5份并通过下述方法制得原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条再与松针放入锅中，加入原料组成总质量3. 5 4. 5倍的水，煮沸20 30分钟至马铃薯软而不烂时，用6 8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖搅拌均勻，趁热装于试管灭菌后， 冷却到45 50°C倒成斜面备用；(2)将步骤(1)得到的菌块按培养基质量3% 5%的接种量接种至斜面综合PDA 培养基中继续培养或复壮，于23 30°C，湿度60% 70%时培养6 18d，直至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的作为生产用母种，所述的斜面综合PDA培养基的原料组成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯75 85份，蔗糖6 10份，琼脂6 10份，磷酸二氢钾0. 2 1. 5份，硫酸镁0. 2 1. 5份和VB1O. 002 0. 006份，并通过下述方法制得原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条放入锅中，加入原料组成总质量3. 5 4. 5 倍的水，煮沸20 30分钟至马铃薯软而不烂时，用6 8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1搅拌均勻，趁热装于试管灭菌后，冷却到45 50°C倒成斜面备用；(3)步骤( 得到的生产用母种按培养基质量3% 10%的接种量接种至原种培养基中，于23 30°C，湿度60% 75%时，培养12 25d，直至菌丝长满原种培养基， 选取长势旺盛、粗壮均一的作为生产原种，所述的原种培养基由栽培基料和水按质量比 1 1.0 1.3组成，所述的栽培基料按总质量分数100%计，由玉米芯30% 50%，木屑 20% 40%，麸皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%组成；(4)将步骤C3)得到的生产原种按培养基质量3% 10%的接种量接种至生产种培养基中，于23 30°C，湿度60% 75%时，培养12 25d，直至菌丝长满生产种培养基， 得到桂南灵芝生产种，所述的生产种培养基由栽培基料和水按质量比1 1.0 1.3组成， 所述的栽培基料按总质量分数100 %计，由玉米芯30 % 50 %，木屑20 % 40 %，麸皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%组成；(5)将步骤(4)得到的生产种按培养基质量5% 15%的接种量接种至生产用栽培基中，于温度23 30°C，相对湿度60% 80%的培菌房中，黑培养15 25d，至菌丝充满生产用栽培基料，则可移入栽培房，所述的生产用栽培基由栽培基料和水按质量比 1 1.0 1.3组成，所述的栽培基料按总质量分数100%计，由玉米芯30% 50%，木屑 20% 40%，麸皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%组成；(6)将步骤(5)获得的长满菌丝的栽培基料，在15 20°C培养2 4d直至出现Icm高的原基，原基在温度23 30°C，相对湿度80 % 95 %，散射光光照强度100 ΙΟΟΟΙχ，每天通风1 2次，每次0. 5 1小时的条件下培育至长出菌柄，然后保持湿度 85% 98%，每天通风2 3次，每次0. 5 1小时的条件下菌盖逐渐分化，室内光照强度增强到1000 20001x，温度25 ，全天通风，使菌盖和菌柄颜色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到2000 50001x，继续培养8 15天，菌盖颜色进一步加深呈米黄色至黄褐色，则得到桂南灵芝子实体。步骤(1)所述的新鲜子实体可以从野生子实体或其后人工栽培中得到，所述的接种量最好是培养基质量4%，培养条件最好是温度沈 ^°C，湿度65%，培养9 12d。步骤( 所述接种量最好是4 %，培养条件最好是沈 观°C，湿度65 %，培养10 12d。步骤C3)所述的接种量最好是培养基质量5%，培养条件最好是温度沈 ^°C， 湿度65%，培养15 20d，所述原种培养基的制备方法是将各栽培基料组分分别称重后与水并均勻搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，所述的栽培基料的组成最好是玉米芯 45%，木屑30%，麸皮或米糠20 %，蔗糖3%和石膏粉2%。步骤(4)所述的接种量最好是培养基质量8%，培养条件最好是温度^ ^°C， 湿度70%，培养15 20d，所述的生产种培养基的制备方法是各组分分别称重并与水均勻搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，所述的栽培基料的组成最好是玉米芯45 %，木屑 30%，麸皮或米糠20%，蔗糖3%和石膏粉2%。步骤( 所述的接种量最好是12%，所述的生产用栽培基的制备方法是将组分分别称重并与水均勻搅拌在一起，栽培基料和水按质量比最好是1 1.1，装入高密度聚乙烯袋或聚丙烯袋，常规1. 5kg/cm2压力，60分钟灭菌，冷却备用。步骤(6)所述的原基出现后的最好温度沈 观！，相对湿度最好是95%，散射光在300 15001x之间逐步加强，至菌盖颜色逐步加深至米黄褐色，所述的桂南灵芝子实体在采收时可以用锋利刀片或剪刀从菌柄基部处割下或剪下，注意不要掰伤菌皮，以利再出第二茬菇，采下的子实体于阳光下晒干脱水，则得到成熟、干燥的桂皮，可包装或于室温保藏或用于研究等用途。本发明的人工栽培方法可以使桂南灵芝子实体的生物效率达到35% 75%，即每IOOg生产用培养料可得35g 75g新鲜的桂南灵芝子实体，可作原料或作研究材料使用。
具体实施例方式以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。实施例1 称取已去皮去芽眼的马铃薯75g，蔗糖6g，琼脂6g，松针3g，将马铃薯切成小条再与松针放入锅中，加入405g水，煮沸20分钟至马铃薯软而不烂时，用6层纱布过滤，取滤汁于锅中，加水补至原水量，加入琼脂熔化，再加蔗糖搅拌均勻，趁热装于试管灭菌后，冷却到 45°C倒成斜面，得到斜面PDA培养基；称取已去皮去芽眼的马铃薯75g，蔗糖6g，琼脂6g，磷酸二氢钾0. 2g，硫酸镁0. 2g 和VB1O. 02g，将马铃薯切成小条放入锅中，加入306g水，煮沸20分钟至马铃薯软而不烂时， 用6层纱布过滤，取滤汁于锅中，加水补至原水量后，加琼脂熔化，再加蔗糖、磷酸二氢钾、 硫酸镁和VB1搅拌均勻，趁热装于试管灭菌后，冷却到45°C倒成斜面，得到斜面综合PDA培养基。
称取玉米芯150g，木屑200g，麸皮110g，蔗糖25g，石膏粉15g混合得到500g栽培基料，加入500g水，均勻搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到原种培养基。称取玉米芯1500g，木屑2000g，麸皮llOOg，蔗糖250g，石膏粉150g混合得到 5000g栽培基料，加入5000g水，均勻搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到生产种培养基。称取玉米芯15000g，木屑20000g，麸皮llOOOg，蔗糖2500g，石膏粉1500g混合得到50kg栽培基料，加入50kg水，均勻搅拌在一起，装入高密度聚乙烯袋，常规1. ^g/cm2压力，60分钟灭菌，冷却备用，得到生产用栽培基。将野生桂南灵芝新鲜子实体进行组织分离，取约4. 5g接种于150g斜面PDA培养基，于湿度60%时培养6d，至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌块。将15g桂南菌块接种至500g斜面综合PDA培养基中，25°C，湿度60%时培养12d， 直至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌种作为桂南灵芝母种。将50g母种接种至1 IOOg原种培养基中，于23°C，湿度70%时，培养15d，直至菌丝长满原种培养基，得到桂南灵芝原种。将500g桂南灵芝原种接种至12kg生产种培养基中，于27°C，湿度75%时，培养 12d，直至菌丝长满生产种培养基，得到桂南灵芝生产种。将Ilkg桂南灵芝生产种接种于IlOkg生产用栽培基中，于温度25°C，相对湿度 65%的培菌房中，黑培养15d，至菌丝充满培养基，则移入栽培房，在15°C培养3d直至出现 Icm高的原基，原基在温度^°C，相对湿度80%，散射光光照强度ΙΟΟΙχ，每天通风1次，每次1小时的条件下培育至长出菌柄，然后保持湿度85%，每天通风2次，每次1小时的条件下菌盖逐渐分化，室内光照强度增强到ΙΟΟΟΙχ，温度25°C，全天通风，使菌盖和菌柄颜色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到20001χ，继续培养8天， 菌盖颜色进一步加深呈米黄色至黄褐色而成熟，此时用锋利刀片将子实体沿菌柄基部处割下，其生物转化率可达到35%，采下的子实体要及时于阳光下晒干或干燥脱水以及分装。实施例2 称取已去皮去芽眼的马铃薯850g，蔗糖100g，琼脂100g，松针50g，将马铃薯切成小条再与松针放入锅中，加入3850g水，煮沸30分钟至马铃薯软而不烂时，用8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖搅拌均勻，趁热装于试管灭菌后，冷却到50°C倒成斜面，得到斜面PDA培养基。称取已去皮去芽眼的马铃薯850g，蔗糖100g，琼脂100g，磷酸二氢钾15g，硫酸镁 15g和VB1O. 06g，将马铃薯切成小条放入锅中，加入4860g水，煮沸30分钟至马铃薯软而不烂时，用8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1搅拌均勻，趁热装于试管灭菌后，冷却到50°C倒成斜面，得到斜面综合 PDA培养基。称取玉米芯250g，木屑140g，米糠100g，蔗糖5g，石膏粉5g混合得到500g栽培基料，加入550水，均勻搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到原种培养基。称取玉米芯2500g，木屑1400g，米糠lOOOg，蔗糖50g，石膏粉50g混合得到5000g 栽培基料，加入6000g水，均勻搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到生产种培养基。称取玉米芯lOOOOg，木屑5600g，米糠4000g，蔗糖200g，石膏粉200g混合得到20kg栽培基料，加入^kg水，均勻搅拌在一起，装入聚丙烯袋，常规1. 5kg/cm2压力，60分钟灭菌，冷却后备用，得到生产用栽培基。将IOg野生的桂南灵芝新鲜子实体进行组织分离，接种于200g斜面PDA培养基， 于30°C湿度70%时培养10d，至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌块。将16g桂南菌块接种至400g斜面综合PDA培养基中，30°C，湿度70%时培养18d， 直至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌种作为桂南灵芝母种。将IOOg母种接种至IOOOg原种培养基中，于30°C，湿度75%时，培养25d，直至菌丝长满原种培养基，得到桂南灵芝原种。将IOOOg桂南灵芝原种接种至IOOOOg生产种培养基中，于30°C，湿度75%时，培养25d，直至菌丝长满生产种培养基，得到桂南灵芝生产种。将7200g桂南灵芝生产种接种于48000g生产用栽培基中，于温度30°C，相对湿度 80%的培菌房中，黑培养25d，至菌丝充满培养基，则移入栽培房，在20°C培养4d直至出现 Icm高的原基，原基在温度30°C，相对湿度95%，散射光光照强度ΙΟΟΟΙχ，每天通风2次，每次0. 5小时的条件下培育至长出菌柄，然后保持湿度98%，每天通风3次，每次0. 5小时的条件下菌盖逐渐分化，室内光照强度增强到20001x，温度^°C，全天通风，使菌盖和菌柄颜色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到50001χ，继续培养 15d，菌盖颜色进一步加深呈米黄色至黄褐色而成熟，此时用剪刀将子实体沿菌柄基部处剪下，其生物转化率可达到75%，采下的子实体要及时于阳光下晒干或干燥脱水以及分装。实施例3 称取已去皮去芽眼的马铃薯800g，蔗糖80g，琼脂80g，松针40g，将马铃薯切成小条再与松针放入锅中，加入4000g水，煮沸25分钟至马铃薯软而不烂时，用7层纱布过滤， 取滤汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖搅拌均勻，趁热装于试管灭菌后，冷却到48°C倒成斜面，得到斜面PDA培养基。称取已去皮去芽眼的马铃薯800g，蔗糖80g，琼脂80g，磷酸二氢钾10g，硫酸镁IOg 和VB1O. 04g，，将马铃薯切成小条放入锅中，加入3920g水，煮沸25分钟至马铃薯软而不烂时，用7层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1搅拌均勻，趁热装于试管灭菌后，冷却到48°C倒成斜面，得到斜面综合 PDA培养基。称取玉米芯240g，木屑100g，米糠150g，蔗糖5g，石膏粉5g混合得到500g栽培基料，加入650g水，均勻搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到原种培养基。称取玉米芯M00g，木屑lOOOg，米糠1500g，蔗糖50g，石膏粉50g混合得到5000g 栽培基料，加入6500g水，均勻搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到生产种培养基。称取玉米芯9600g，木屑4000g，米糠6000g，蔗糖200g，石膏粉200g混合得到 20000g栽培基料，加入^OOOg水，均勻搅拌在一起，装入高密度聚乙烯袋，常规1. 5kg/cm2 压力，60分钟灭菌，冷却备用，得到生产用栽培基。将9g野生的桂南灵芝新鲜子实体进行组织分离，接种于300g斜面PDA培养基，于 23°C湿度65%时培养14d，至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌块。将40g菌块接种至800g斜面综合PDA培养基中，25°C，湿度65 %时培养15d，直至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌种作为桂南灵芝母种。
将50g母种接种至IOOOg原种培养基中，于25°C，湿度60%时，培养12d，直至菌丝长满原种培养基，得到桂南灵芝原种。将900g桂南灵芝原种接种至9000g生产种培养基中，于23°C，湿度60%时，培养 23d，直至菌丝长满生产种培养基，得到桂南灵芝生产种。将4500g桂南灵芝生产种接种于45000g生产用栽培基中，于温度^°C，相对湿度 60%的培菌房中，黑培养23d，至菌丝充满培养基，则移入栽培房，在18°C培养2d直至出现 Icm高的原基，原基在温度25 V，相对湿度90 %，散射光光照强度5001x，每天通风1次，每次1小时的条件下培育至长出菌柄，然后保持湿度95%，每天通风2次，每次1小时的条件下菌盖逐渐分化，室内光照强度增强到15001x，温度^TC,全天通风，使菌盖和菌柄颜色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到30001χ，继续培养6d， 菌盖颜色进一步加深呈米黄色至黄褐色而成熟，此时用锋利刀片将子实体沿菌柄基部处割下，其生物转化率可达到60%，采下的子实体要及时于阳光下晒干或干燥脱水以及分装。实施例4 按实施例1的方法制备斜面PDA培养基和斜面综合PDA培养基。称取玉米芯225g，木屑150g，米糠100g，蔗糖15g，石膏粉IOg混合得到500g栽培基料，加入650g水，均勻搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到原种培养基。称取玉米芯2250g，木屑1500g，米糠lOOOg，蔗糖150g，石膏粉IOOg混合得到 5000g栽培基料，加入6500g水，均勻搅拌在一起，装瓶常规灭菌，冷却备用，得到生产种培养基。称取玉米芯9000g，木屑6000g，米糠4000g，蔗糖600g，石膏粉400g混合得到 20000g栽培基料，加入^OOOg水，均勻搅拌在一起，装入聚丙烯袋，常规1. 5kg/cm2压力，60 分钟灭菌，冷却备用，得到生产用栽培基。将9g实施例2得到的桂南灵芝新鲜子实体进行组织分离，接种于300g斜面PDA 培养基，于湿度70%时培养18d，至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌块。将80g菌块接种至2000g斜面综合PDA培养基中，23°C，湿度70 %时培养6d，直至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的菌种作为桂南灵芝母种。 将33g母种接种至1 IOOg原种培养基中，于，湿度70%时，培养18d，直至菌丝长满原种培养基，得到桂南灵芝原种。将300g桂南灵芝原种接种至IOOOOg生产种培养基中，于^°C，湿度75%时，培养 25d，直至菌丝长满生产种培养基，得到桂南灵芝生产种。将2250g桂南灵芝生产种接种于45000g生产用栽培基中，于温度23°C，相对湿度 70%的培菌房中，黑培养25d，至菌丝充满培养基，则移入栽培房，在15°C培养2d直至出现 Icm高的原基，原基在温度23°C，相对湿度85 %，散射光光照强度8001x，每天通风1次，每次1小时的条件下培育至长出菌柄，然后保持湿度95%，每天通风2次，每次1小时的条件下菌盖逐渐分化，室内光照强度增强到18001x，温度^°C，全天通风，使菌盖和菌柄颜色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到40001χ，继续培养8d， 菌盖颜色进一步加深呈米黄色至黄褐色而成熟，此时用锋利刀片将子实体沿菌柄基部处割下，其生物转化率可达到55%，采下的子实体要及时于阳光下晒干或干燥脱水以及分装。
权利要求
1. 一种桂南灵芝子实体的人工栽培方法，其特征包括以下的步骤(1)将桂南灵芝(Ganodermaguinanense J. D. Zhao et X. . Q. Zhang)的新鲜子实体进行组织分离，然后按培养基质量3% 5%接种量接种到斜面PDA培养基，于23 30°C、湿度60% 70%时培养6 18d，至菌丝长满斜面，挑取长势旺盛、粗壮均一的菌块于4°C保藏备用或进一步培养，所述的斜面PDA培养基的原料组成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯75 85份，蔗糖6 10份，琼脂6 10份和松针3 5份，并通过下述方法制得 原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条再与松针放入锅中，加入原料组成总质量3. 5 4. 5倍的水，煮沸20 30分钟至马铃薯软而不烂时，用6 8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖搅拌均勻，趁热装于试管灭菌后，冷却到45 50°C倒成斜面备用；(2)将步骤⑴得到的菌块按培养基质量3% 5%的接种量接种至斜面综合PDA培养基中继续培养或复壮，于23 30°C，湿度60% 70%时培养6 18d，直至菌丝长满斜面，选取长势旺盛、粗壮均一的作为生产用母种，所述的斜面综合PDA培养基的原料组成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯75 85份，蔗糖6 10份，琼脂6 10份，磷酸二氢钾0. 2 1. 5份，硫酸镁0. 2 1. 5份和VB1O. 002 0. 006份，并通过下述方法制得原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条放入锅中，加入原料组成总质量3. 5 4. 5倍的水，煮沸20 30分钟至马铃薯软而不烂时，用6 8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB1搅拌均勻，趁热装于试管灭菌后，冷却到45 50°C倒成斜面备用；(3)步骤( 得到的生产用母种按培养基质量3% 10%的接种量接种至原种培养基中，于23 30°C，湿度60% 75%时，培养12 25d，直至菌丝长满原种培养基，选取长势旺盛、粗壮均一的作为生产原种，所述的原种培养基由栽培基料和水按质量比1 1.0 1.3组成，所述的栽培基料按总质量分数100%计，由玉米芯30% 50%，木屑20% 40%，麸皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%组成；(4)将步骤C3)得到的生产原种按培养基质量3% 10%的接种量接种至生产种培养基中，于23 30°C，湿度60% 75%时，培养12 25d，直至菌丝长满生产种培养基，得到桂南灵芝生产种，所述的生产种培养基由栽培基料和水按质量比1 1.0 1.3组成，所述的栽培基料按总质量分数100 %计，由玉米芯30 % 50 %，木屑20 % 40 %，麸皮或米糠 20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%组成；(5)将步骤(4)得到的生产种按培养基质量5% 15%的接种量接种至生产用栽培基中，于温度23 30°C，相对湿度60% 85%的培菌房中，黑培养15 25d，至菌丝充满生产用栽培基料，则可移入栽培房，所述的生产用栽培基由栽培基料和水按质量比1 1.0 1.3组成，所述的栽培基料按总质量分数100%计，由玉米芯30% 50%，木屑20% 40%，麸皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%组成；(6)将步骤(5)获得的长满菌丝的栽培基料，在15 20°C培养2 4d直至出现Icm高的原基，原基在温度23 30°C，相对湿度80% 95%，散射光光照强度100 ΙΟΟΟΙχ，每天通风1 2次，每次0. 5 1小时的条件下培育至长出菌柄，然后保持湿度85% 98%，每天通风2 3次，每次0. 5 1小时的条件下菌盖逐渐分化，室内光照强度增强到1000 20001x，温度25 ^°C，全天通风，使菌盖和菌柄颜色加深，菌盖边缘浅色生长线消失，开始释放孢子，加大室内光照强度到2000 50001x，继续培养8 15天，菌盖颜色进一步加深呈米黄色至黄褐色，则得到桂南灵芝子实体。
2.根据权利要求1所述的一种桂南灵芝子实体的人工栽培方法，其特征是步骤(1)中所述的新鲜子实体从野生子实体或其后人工栽培中得到，所述的接种量是培养基质量4%， 于沈 ^°C，湿度65%，培养9 12d，步骤O)中所述接种量是4%，于沈 ^°C，湿度 65%，培养10 12d ；步骤(3)中所述的接种量是培养基质量5 %，于沈 ^°C，湿度65%， 培养15 20d，所述的栽培基料的组成是玉米芯45 %，木屑30 %，麸皮或米糠20 %，蔗糖 3<%，石膏粉2%，步骤中所述的接种量是培养基质量8%，于沈 观1，湿度70%，培养15 20d，所述的栽培基料的组成是玉米芯45 %，木屑30 %，麸皮或米糠20 %，蔗糖3 %， 石膏粉2%;步骤(5)中所述的接种量是12%，所述的生产用栽培基由栽培基料和水按质量比1 1. 1组成；步骤(6)中所述的原基出现后在温度沈 ^°C，相对湿度95%，散射光在300 15001x之间逐步加强，培养至菌盖颜色逐步加深至米黄褐色。
全文摘要
本发明涉及一种桂南灵芝子实体的人工栽培方法，其特征是通过将新鲜桂南灵芝(Ganoderma guinanense J.D.Zhao et X.Q.Zhang)子实体进行组织分离或孢子分离，然后在PDA斜面培养基和斜面综合PDA培养基上培养得到生产用母种，再接种到原种培养基中培养得到原种，其后经过生产种培养基的培养得到生产种，最后将生产种接种到生产用栽培基中，培养至长出成熟的子实体。本发明的人工栽培方法可以使桂南灵芝子实体的生物效率达到35％～75％，即每100g生产用培养料可得35g～75g新鲜的桂南灵芝子实体，可作原料或作研究材料使用。
文档编号C05G3/00GK102301913SQ201110193128
公开日2012年1月4日 申请日期2011年7月11日 优先权日2011年7月11日
发明者吴兴亮, 宋斌, 李泰辉, 邹方伦 申请人:广东省微生物研究所