分子印迹与超声耦合提取灵芝三萜的方法
【专利摘要】本发明公开了一种分子印迹与超声耦合提取灵芝三萜的方法，涉及天然产物的提取分离技术领域。本发明利用分子印迹技术将目标分子作为模版分子，选择在官能团结构上与之相匹配的功能单体，让两者间发生共价作用或非共价作用，再加入交联剂通过热聚合或光聚合，在引发剂的致孔剂的诱发下产生聚合反应，从而形成即分子印迹聚合物（MIPs），随后，利用物理或化学方法，将目标分子从聚合物内部洗脱出来，一次获得具有与目标分子形状相同且官能团位置一定的记忆空穴的原理，无需使用有机溶剂进行长时间的提取，解决了目前灵芝三萜的提取工艺时间长、耗能高、活性成分提取物得率低、残留机溶剂并影响人体健康的问题。
【专利说明】
分子印迹与超声耦合提取灵芝三萜的方法
技术领域
[0001]本发明涉及天然产物的提取分离技术领域，尤其是一种分子印迹与超声耦合提取灵芝三萜的方法。
【背景技术】
[0002]灵芝又称林中灵、琼珍(学名:Ganoderma Lucidum Karst)是多孔菌科真菌灵芝的子实体。灵芝含有多种化学成分，其主要活性成分有多糖及肽多糖类、生物碱类和核苷酸类、氨基酸和蛋白质类、三萜类、微量元素。其中灵芝三萜类化合物具有保肝作用、抗肿瘤作用、抗HIVl及HIV2蛋白酶活性、抑制组胺释放、抑制血管紧张素转化酶(ACE)、抑制胆固醇合成、阵痛作用、对血小板聚集的影响、对蛋白金合欢酯转移酶的抑制作用、抗氧化作用等。目前，一般采用有机溶剂法提取灵芝三萜，通常需要较长的提取时间并消耗大量的提取溶剂，同时大量有机溶剂的使用会给人体和环境带来不利的影响；另外，由于灵芝子实体由纤维素、半纤维素和木质素等主要成分构成，结构紧密，传统的浸提法时间长、耗能高，活性成分提取物得率低。
[0003]分子印迹技术是目前研究的热点，它具有构效预定性、特异识别性的特点，是一种比较具有产业化价值的技术。这种技术一般是将目标分子作为模版分子，选择在官能团结构上与之相匹配的功能单体，让两者间发生共价作用或非共价作用，再加入交联剂通过热聚合或光聚合，在引发剂的致孔剂的诱发下产生聚合反应，从而形成包裹有目标分子的高聚物，即分子印迹聚合物(MIPs)，随后，利用物理或者化学方法，将目标分子从聚合物内部洗脱出来，一次获得具有与目标分子形状相同且官能团位置一定的记忆空穴。
【发明内容】
[0004]本发明提供一种分子印迹与超声耦合提取灵芝三萜的方法，它可以解决目前灵芝三萜的提取工艺时间长、耗能高、活性成分提取物得率低、残留机溶剂并影响人体健康的问题。
[0005]为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是:这种分子印迹与超声耦合提取灵芝三萜的方法，是以灵芝粉末作为提取原料，以水作为提取媒介，利用分子印迹材料吸附提取液中的灵芝三萜，再用超声提取设备从提取液中提取吸附有灵芝三萜的分子印迹材料，提取完毕后，洗脱所述分子印迹材料上吸附的灵芝三萜即可；
所述分子印迹材料由如下方法制得:
A、先将干燥的灵芝进行粉碎，然后加入复合酶溶液，在35?60°C下进行酶解反应I?4h，之后加热灭活复合酶；
所述灵芝粉末的用量与所述复合酶的用量，按所述灵芝粉末lg，所述复合酶3mL的比例计算；
B、向步骤A所得加入乙醇，使乙醇浓度达40?80%，调节pH为9?10，进行超声处理0.5?Ih后分离提取液，所述超声处理频率为20?40MHz，温度为30?90 °C; C、重复步骤B的过程I?2次；
D、将步骤C所得提取液调节pH为2?5，过树脂进行吸附和洗脱，洗脱液除醇浓缩至原体积的5?20%得浓缩液，加浓缩液3?4倍体积的水搅拌均匀后静置沉淀，将沉淀物干燥得到灵芝三蔽；
E、取I?I.5mmoI灵芝三蔽与6mmoI甲基丙稀酸溶解在5?1ml氯仿中，置于O°C下保持30min，然后加入15?30mmol二甲基丙稀酸乙二醇酯与15?30mmolN-异丙基丙稀酰胺和40?10mg偶氮二异丁腈，混合后，通入氮气，搅拌至完全溶解，通氮气1minjfn，在65°C条件反应直至聚合完全，粉碎，过200目筛，用体积比为9:1的甲醇:乙醇混合液洗脱灵芝三萜，即可得到分子印迹材料。
[0006]上述技术方案中，更具体的技术方案还可以是:所述超声提取过程控制在250W，40MHz ο
[0007]进一步的:提取完毕后，先用60倍所述分子印迹材料重量的50°C水洗脱吸附在所述分子印迹材料上的杂质，再用30倍所述分子印迹材料重量的25°C水洗脱即可得到灵芝三萜溶液。
[0008]由于采用了上述技术方案，本发明与现有技术相比具有如下有益效果:
1、本发明的提取灵芝三萜纯度和提取率都较高，纯度能达95?99%，提取率能达85?98%，工序简单快捷、印迹材料可重复使用，尤其适于工业化生产。
[0009]2、本发明提取办法工艺环保，没有用到任何有机试剂制备，对人体健康无影响，同时印迹材料的最低临界溶解温度(LCST)为38°C左右，超声提取因为会积热，温度很容易达到38°C以上，不用外加热源，节能环保。
【具体实施方式】
[0010]以下结合具体实施例对本发明作进一步详述:
这种分子印迹与超声耦合提取灵芝三萜的方法首先要制备分子印迹，制备方法如下:
A、先将500g干燥的灵芝进行粉碎，然后加入蛋白酶、纤维素酶和果胶酶以4000:7:1比例混合的复合酶1.5L溶液，在35?60°C下进行酶解反应lh，之后加热灭活复合酶；
B、向步骤A所得加入乙醇，使乙醇浓度达80%，调节pH为9?10，进行超声处理0.5h后分离提取液，所述超声处理频率为40MHz，温度为30 °C ；
C、重复步骤B的过程I次；
D、将步骤C所得提取液调节pH为2?5，过树脂进行吸附和洗脱，洗脱液除醇浓缩至原体积的20%得浓缩液，加浓缩液3倍体积的水搅拌均匀后静置沉淀，将沉淀物干燥得到灵芝三萜；
E、取Immol灵芝多糖与6mmol甲基丙稀酸溶解在5ml氯仿中，置于0°C下保持30min，然后加入15mmol 二甲基丙稀酸乙二醇酯与15mmolN-异丙基丙稀酰胺和40mg偶氮二异丁腈，混合后，通入氮气，搅拌至完全溶解，通氮气1min，封口，在65 °C条件反应直至聚合完全，粉碎，过200目筛，用体积比为9:1的甲醇:乙醇混合液洗脱灵芝三萜，即可得到分子印迹材料。
[0011]然后将制得的分子印迹材料与超声耦合进行灵芝三萜的提取，提取过程如下:
以灵芝粉末作为提取原料，以水作为提取媒介，利用制得的分子印迹材料吸附提取液中的灵芝三萜，再用超声提取设备从提取液中提取吸附有灵芝三萜的分子印迹材料，提取过程控制在250W，40MHz。提取完毕后，先用60倍所述分子印迹材料重量的50°C水洗脱吸附在所述分子印迹材料上的杂质，再用30倍所述分子印迹材料重量的25°C水洗脱即可得到灵芝三萜水溶液。
[0012]该分子印迹材料可重复使用。
【主权项】
1.一种分子印迹与超声耦合提取灵芝三萜的方法，其特征在于:以灵芝粉末作为提取原料，以水作为提取媒介，利用分子印迹材料吸附提取液中的灵芝三萜，再用超声提取设备从提取液中提取吸附有灵芝三萜的分子印迹材料，提取完毕后，洗脱所述分子印迹材料上吸附的灵芝三萜即可； 所述分子印迹材料由如下方法制得: A、先将干燥的灵芝进行粉碎，然后加入复合酶溶液，在35?60°C下进行酶解反应I?4h，之后加热灭活复合酶； 所述灵芝粉末的用量与所述复合酶的用量，按所述灵芝粉末lg，所述复合酶3mL的比例计算； B、向步骤A所得加入乙醇，使乙醇浓度达40?80%，调节pH为9?10，进行超声处理0.5?Ih后分离提取液，所述超声处理频率为20?40MHz，温度为30?90 °C; C、重复步骤B的过程I?2次； D、将步骤C所得提取液调节pH为2?5，过树脂进行吸附和洗脱，洗脱液除醇浓缩至原体积的5?20%得浓缩液，加浓缩液3?4倍体积的水搅拌均匀后静置沉淀，将沉淀物干燥得到灵芝三蔽； E、取I?1.5mmoI灵芝三蔽与6mmoI甲基丙稀酸溶解在5?1ml氯仿中，置于O °C下保持30min，然后加入15?30mmol二甲基丙稀酸乙二醇酯与15?30mmolN-异丙基丙稀酰胺和40?10mg偶氮二异丁腈，混合后，通入氮气，搅拌至完全溶解，通氮气1minjfn，在65°C条件反应直至聚合完全，粉碎，过200目筛，用体积比为9:1的甲醇:乙醇混合液洗脱灵芝三萜，即可得到分子印迹材料。2.根据权利要求1所述的分子印迹与超声耦合提取灵芝三萜的方法，其特征在于:所述超声提取过程控制在250W，40MHz。3.根据权利要求1所述的分子印迹与超声耦合提取灵芝三萜的方法，其特征在于:提取完毕后，先用60倍所述分子印迹材料重量的50°C水洗脱吸附在所述分子印迹材料上的杂质，再用30倍所述分子印迹材料重量的25°C水洗脱即可得到灵芝三萜溶液。
【文档编号】A61K36/074GK106074629SQ201610500990
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月30日
【发明人】卢月莲
【申请人】卢月莲