大兴安岭野生金老梅总三萜提取物的新型制备方法
【专利摘要】本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生金老梅里提取、纯化总三萜的方法，特别是涉及一种采用高压脉冲电场提取技术、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化总三萜的新方法。本发明优点：1、高压脉冲电场提取技术利用细胞膜电穿孔原理，在瞬间使植物细胞破壁，达到细胞膜电位混乱，细胞有效组分快速流出的目的。具有处理时间短，能耗低，不易引起处理产物变性等优点，并且工艺简便易行。2、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化技术，能很好的富集总三萜，进一步纯化有效成分。树脂易处理、分离速度快、制备量大、费用低等优点，可以工业化使用。本发明利用上述技术所得总三萜含量高、活性高，纯度最高可达96.1％。
【专利说明】大兴安岭野生金老梅总三萜提取物的新型制备方法
【技术领域】:
[0001]本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生植物金老梅里提取总三萜的新方法，特别是涉及一种利用高压脉冲电场技术提取、聚酰胺柱层析纯化、聚酰胺藕联大孔树脂二次纯化总三萜的新方法。
【背景技术】:
[0002]金老梅，别名金露梅，灌木，高0.5-2m。多分枝，树皮纵向剥落。小枝红褐色，幼时被长柔毛。现状复叶，小叶2对，稀3小叶；小叶片长圆形、倒卵长圆形或卵状披针形，长
0.7-2cm,宽0.4-lcm,先端急尖或圆钝；基部楔形，全缘，边缘平坦，两面疏被柔毛或絹毛或脱落近无毛。花两性，单花或数朵生于枝顶，花梗密被长柔毛或絹毛；花直径2.2-3cm ;花、果期6-9月。
[0003]国内一般用有机溶剂提取法提取总三萜，常用甲醇、乙醇做为溶剂。近年来也有采用微波辅助提取、超声波提取，用大孔树脂进行纯化的报道。传统方法提取总三萜需要几小时至十几小时，操作温度高且得率低，能耗大。
【发明内容】
:
[0004]本发明主要采用高压脉冲电场技术提取，聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化，产品不仅得率高，而且纯度高。所得总三萜提取物用HPLC进行检测，含量最高可达96.1%。
[0005]优点:大大加快了提取速度，同时极大提高总三萜有效成分含量，克服了常规提取提取物纯度低、得率低的缺点。
[0006]为实现上述目的，本发明采用的技术方案是:
[0007]—种利用高压脉冲电场提取技术、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化总三萜的新方法，其步骤如下:
[0008](I)前处理:取新鲜金老梅叶或干燥好的叶子，清洗备用；
[0009](2)高压脉冲电场提取:以不同浓度乙醇溶液为溶剂，液料比为1: 10-15，在一定电场强度、适当脉冲数处理几分钟；
[0010](3)精滤处理:采用一定过滤精度的聚四氟乙烯膜，在一定温度和压力下精滤处理；
[0011](4)聚酰胺柱层析:
[0012]采用一定目数的聚酰胺树脂装柱，控制提取液与聚酰胺用量比，室温下以一定流速吸附饱和；解吸时先用水除杂，再用不同体积比浓度的乙醇溶液解吸，控制流速，收集洗脱液，检测总三萜含量；
[0013](5)聚酰胺与大孔树脂树脂联用纯化:
[0014]取处理过的聚酰胺树脂铺在不同型号的大孔树脂柱上，径高比为1:5_7，过上步所得洗脱液，控制上样液质量浓度，上样速率；先用2BV去离子水冲洗树脂，再用不同体积比浓度的乙醇溶液，以l-3BV/h流速洗脱，收集洗脱液，检测总三萜含量；[0015](6)真空冷冻干燥:收集总三萜溶液，在适当温度、干燥压力下冷冻干燥；
[0016](7)检测:采用高效液相色谱法，紫外检测器在一定波长进行检测，金老梅总三萜纯度为95%以上。
【具体实施方式】:
[0017]实施例1:
[0018]一种利用高压脉冲电场提取技术、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化总三萜的新方法，其步骤如下:
[0019](I)前处理:取IOOg新鲜金老梅叶，清洗备用；
[0020](2)高压脉冲电场提取:以50%乙醇溶液为溶剂，液料比1:12，电场强度30kV/cm、脉冲数7，处理4分钟；
[0021](3)精滤处理:采用聚四氟乙烯膜，过滤精度0.2iim，在50°C，0.2MPa压力下精滤处理；
[0022](4)聚酰胺柱层析:
[0023]采用80目的聚酰胺树脂装柱，控制提取液与聚酰胺用量比1:6，室温下以3BV/h流速吸附饱和；解吸时先用水除杂，再用60、65、70%乙醇溶液解吸，控制流速，收集洗脱液；
[0024](5)聚酰胺与大孔树脂树脂联用纯化:
[0025]取处理过的聚酰胺树脂铺在HPD100大孔树脂上，径高比为1:6，过上步所得洗脱液，上样液质量浓度2.0mg/mL,上样速率lBV/h ;先用2BV去离子水冲洗树脂，再用75%的乙醇溶液，以lBV/h流速洗脱，收集洗脱液，检测总三萜含量；
[0026](6)真空冷冻干燥:收集总三萜溶液，预冻温度_30°C，工作压力20Pa，升华温度550C，解析温度600C，得粉末1.74g ；
[0027](7)检测:采用高效液相色谱法，紫外检测器在一定波长进行检测，金老梅总三萜纯度为96.1%。
[0028]实施例2:
[0029]一种利用高压脉冲电场提取技术、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化总三萜的新方法，其步骤如下:
[0030](I)前处理:取50g新鲜金老梅叶，清洗备用；
[0031](2)高压脉冲电场提取:以60%乙醇溶液为溶剂，液料比1:15，在电场强20kV/cm度、脉冲数5，处理3分钟；
[0032](3)精滤处理:采用聚四氟乙烯膜，过滤精度0.3iim，在55°C、0.3MPa压力下精滤处理；
[0033](4)聚酰胺柱层析:
[0034]采用100目的聚酰胺树脂装柱，控制提取液与聚酰胺用量比1:5，室温下以4BV/h流速吸附饱和；解吸时先用水除杂，再用65、70、75%乙醇溶液解吸，控制流速，收集洗脱液；
[0035](5)聚酰胺与大孔树脂树脂联用纯化:
[0036]取处理过的聚酰胺树脂铺在XDA-6大孔树脂上，径高比为1:7，过上步所得洗脱液，上样液质量浓度1.0mg/mL,上样速率2BV/h ;先用2BV去离子水冲洗树脂，再用80%的乙醇溶液，以2BV/h流速洗脱，收集洗脱液，检测总三萜含量；
[0037](6)真空冷冻干燥:收集总三萜溶液，预冻温度-15°C，工作压力30Pa，升华温度50 0C，解析温度65 °C，得粉末0.913g ;
[0038](7)检测:采用高效液相色谱法，紫外检测器在一定波长进行检测，金老梅总三萜纯度为95.7%。
[0039]实施例3:
[0040]一种利用高压脉冲电场提取技术、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化总三萜的新方法，其步骤如下:
[0041](I)前处理:取50g干燥金老梅叶，清洗备用；
[0042](2)高压脉冲电场提取:以70%乙醇溶液为溶剂，液料比1: 10，在电场强40kV/cm度、脉冲数8，处理5分钟；
[0043](3)精滤处理:采用聚四氟乙烯膜，过滤精度0.2iim，在60°C、0.2MPa压力下精滤处理；
[0044](4)聚酰胺柱层析:
[0045]采用200目的聚酰胺树脂装柱，控制提取液与聚酰胺用量比1:7，室温下以5BV/h流速吸附饱和；解吸时先用水除杂，再用75、80、85%乙醇溶液解吸，控制流速，收集洗脱液；
[0046](5)聚酰胺与大孔树脂树脂联用纯化:
[0047]取处理过的聚酰胺树脂铺在HPD-722大孔树脂上，径高比为1:5，过上步所得洗脱液，上样液质量浓度3.0mg/mL,上样速率3BV/h ;先用2BV去离子水冲洗树脂，再用90%的乙醇溶液，以3BV/h流速洗脱，收集洗脱液；
[0048](6)真空冷冻干燥:收集总三萜溶液，预冻温度_20°C，工作压力40Pa，升华温度45 0C，解析温度55 °C，得粉末0.928g ；
[0049](7)检测:采用高效液相色谱法，紫外检测器在一定波长进行检测，金老梅总三萜纯度为95.4%。
【权利要求】
1.一种利用高压脉冲电场技术提取、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化总三萜的新方法，其步骤如下: (1)前处理:取新鲜金老梅叶或干燥好的叶子，清洗备用； (2)高压脉冲电场提取:以不同浓度乙醇溶液为溶剂，液料比为1:10-15，在一定电场强度、适当脉冲数处理几分钟； (3)精滤处理:采用一定过滤精度的聚四氟乙烯膜，在一定温度和压力下精滤处理； (4)聚酰胺柱层析: 采用一定目数的聚酰胺树脂装柱，控制提取液与聚酰胺用量比，室温下以一定流速吸附饱和；解吸时先用水除杂，再用不同体积比浓度的乙醇溶液解吸，控制流速，收集洗脱液，检测总三萜含量； (5)聚酰胺与大孔树脂树脂联用纯化: 取处理过的聚酰胺树脂铺在不同型号的大孔树脂柱上，径高比为1:5-7，过上步所得洗脱液，控制上样液质量浓度，上样速率；先用2BV去离子水冲洗树脂，再用不同体积比浓度的乙醇溶液，以l-3BV/h流速洗脱，收集洗脱液，检测总三萜含量； (6)真空冷冻干燥:收集总三萜溶液，在适当温度、干燥压力下冷冻干燥； (7)检测:采用高效液相色谱法，紫外检测器在一定波长进行检测，金老梅总三萜纯度为95%以上。
2.根据权利要求1所述的一种利用高压脉冲电场技术提取、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化总三萜的新方法，其特征是:在所述的步骤(2)中，乙醇溶液浓度为50-70%，电场强度20-40kV/cm、脉冲数5-8，处理时间3-5分钟。
3.根据权利要求2所述的一种利用高压脉冲电场技术提取、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化总三萜的新方法，其特征是:在所述的步骤(4)中，聚酰胺树脂为80-200目，提取液与聚酰胺用量比1:5-7，解吸的乙醇溶液浓度分别为60%、65%、70%、75%、80%、85%。
4.根据权利要求3所述的一种利用高压脉冲电场技术提取、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化总三萜的新方法，其特征是:在所述的步骤(5)中，大孔树脂型号为HPD100、XDA-6、HPD-722的任意一种；上样液质量浓度为1.0-3.0mg/mL，上样速率l_3BV/h ;解析的乙醇溶液浓度为75%、80%、90%。
5.根据权利要求4所述的一种利用高压脉冲电场技术提取、聚酰胺藕联大孔树脂吸附纯化总三萜的新方法，其特征是:在所述的步骤(6)中，预冻温度-15至-30°C，工作压力20-40Pa,升华温度45-55°C，解析温度55-65°C。
【文档编号】B01D15/00GK103623753SQ201310631038
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2013年11月27日 优先权日:2013年11月27日
【发明者】张亚红, 朱静娟 申请人:大兴安岭嘉迪欧营养原料有限公司