专利名称：一种复合微生态饲料添加剂及其制备方法和预混料的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种复合微生态饲料添加剂及其预混料，属于饲料科学与饲料添加剂技术领域。
背景技术：
随着养殖业的快速发展，人们对饲料添加剂的研究已涉及到各个方面，其中抗生素等药物类饲料添加剂的安全性问题及饲料被霉菌及霉菌毒素污染问题已成为目前饲料业和畜牧业生产中研究的两大热点。据联合国粮食组织估算全世界每年大约有5% 7%的粮食、饲料等农产品受霉菌的侵害，从而造成了巨大的经济损失。被霉菌污染的饲料，其营养物质被分解，适口性下降，并产生多种霉菌毒素，动物吃了发霉变质的饲料，会发生急性或慢性中毒症状，造成畜禽的生长速度缓慢，采食量下降，消化率降低，繁殖能力与免疫力下降，严重危害动物健康， 甚至造成中毒死亡，给养殖业带来巨大的危害。目前市场上防霉剂的种类繁多，常见的防霉剂有有机酸类、有机酸盐及有机酸酯类以及一些复合防霉剂。但是这些都是化学防霉剂，本身对饲料品质没有改善，同时在使用过程中对动物有刺激性，在适口性、安全性及抑菌方面存在不足。饲料微生态制剂是作为一种新型的抗生素替代品，因具有无副作用、无残留污染、 不产生抗药性等污染，具有抗病、治病、防病、促生长等诸多优点，受到了养殖业的欢迎。目前，市场上的饲用微生态制剂产品较多，作用效果主要集中在提高动物免疫力、增加动物生产能力等方面，既具有饲料防霉效果，又具有改善饲料品质，提高动物免疫力功效，增加动物生产能力的产品却鲜有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有提高畜禽免疫力，兼具饲料防霉功能的新的微生态饲料添加剂。本发明的另一目的是提供该微生态饲料添加剂的制备方法和包含该微生态饲料添加剂的预混料。本发明的目的是通过如下技术方案来实现的本发明提供一种复合微生态饲料添加剂，该添加剂是一种粉剂，它主要由下述重量百分比的成分混合而成短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)菌粉30-50%，嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus)菌粉 20-30%,酉良酒酵母(saccharomyces cerevisiae)细胞壁多糖0. 5-1%，菊粉10% -30%，石粉1-10%。进一步，该添加剂主要由下述重量百分比的成分混合而成短小芽孢杆菌 (Bacillus pumilus)菌粉 42%，嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)菌粉 28%，酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)细胞壁多糖1%，菊粉19%，石粉10%。其中，本发明所述短小芽孢杆菌菌粉、嗜酸乳杆菌菌粉、酿酒酵母细胞壁多糖可以选用现有技术中公开的菌株制备，但为达到本发明的最好效果，本发明优选使用保藏编号为CGMCC NO. 4756的短小芽孢杆菌，保藏编号为CGMCC No. 5093的嗜酸乳杆菌及保藏编号为的CGMCC No. 2388的酿酒酵母制备菌粉或细胞壁多糖。其中，所述的短小芽孢杆菌菌粉在40-90°C条件下烘干而成，活菌数在5X IO8CFU/ g以上；所述嗜酸乳杆菌菌粉采用真空冷冻干燥的方法，在冷冻温度_55°C _30°C，真空度 20 60Pa条件下制备而成，活菌数在2 X 107CFU/g以上；所述酿酒酵母细胞壁多糖中，粗蛋白质含量< 35%，β-葡聚糖含量> 30%，甘露寡糖含量> 20% ；菊粉为食品级原料；石粉为载体。其中，本发明的复合微生态饲料添加剂的具体制备方法如下Α、嗜酸乳杆菌菌粉的制备嗜酸乳杆菌接种于MRS培养基中，37°C静止培养12h， 调整菌浓度至2X109CFU/ml，按体积比菌液保护剂为1 10的配比加入保护剂(保护剂配方为脱脂乳3 %，海藻糖2 %，硫酸锰0. 5 %，蔗糖0. 2 %，其它为水)，-80°C预冻4h后， 采用真空冷冻干燥的方法，在冷冻温度-55 -30°C，真空度20-60Pa下制成活菌数大于 2X107CFU/g嗜酸乳杆菌菌粉。B、短小芽孢杆菌菌粉的制备短小芽孢杆菌接种于LB培养基中，37°C静止培养 I2h，调整菌浓度至SxioiiCFUAiI,按重量比菌液载体为1 1的配比加入载体玉米芯粉， 60°C烘干24h制成活菌数大于5X 108CFU/g短小芽孢杆菌菌粉。C、酿酒酵母细胞壁多糖的制备1)酿酒酵母菌粉的制备，制备方法参照申请人的申请号为=200810106520. 5的中国发明专利，取酿酒酵母菌粉lOOOg，加入5L氢氧化钠溶液(lmol/L)，在100°C下加热水解4h，等冷却至室温后，lOOOXg，离心lOmin，进行固液分离；2)弃去上清液后，加IL水于剩余不溶物中，搅拌均勻，再离心(1000Xg，10min)，如此重复两次；3)向不溶物中加入1.5L醋酸溶液(10%，V/V)搅拌均勻，然后在85°C水浴中保温 2h ；4)如方法1)所述方法进行固液分离，并洗涤两次；5)剩余不溶物用丙酮洗涤三次后， 干燥，得到酵母细胞壁多糖产品粗蛋白质含量< 35%，β-葡聚糖含量> 30%，甘露寡糖含量> 20%的酿酒酵母细胞壁多糖。D、按配比称取各成分原料，将原料放入混合机中，其中，混合机优选混合均勻度变异系数小于5%的双轴桨叶式高效混合机，混合均勻，即得。本发明还提供一种包含该复合微生态饲料添加剂的预混料，微生态饲料添加剂在预混料中添加重量百分比为1-10%0。本发明的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)为申请人首次在国内分离到的一株来源于动物消化道的新的短小芽孢杆菌，为申请人从牛的瘤胃中分离得到的一株芽孢杆菌优势菌株，经过生理生化及16s RNA分析鉴定，表明该菌属于短小芽孢杆菌，其分类命名为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)，已于2011年4月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，简称CGMCC，保藏编号为CGMCC No. 4756。本发明中的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)具有良好的耐胃酸、耐胆盐、耐高温、耐受常用抗生素等抗逆性能和产酸、产酶、抑制病原菌等益生功能，为申请人从健康动物肠道或粪便中分离、选育得到，经中国农业微生物菌种保藏管理中心鉴定，并于2008年3月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC No. 2388(保藏证明参见申请人的申请号为200810106520. 5的中国发明专利)。本发明的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus) 为申请人从动物肠道中分离得到，能分泌抗生物素类物质(嗜酸乳菌素、嗜酸杆菌素、乳酸菌素)，对肠道致病菌产生的拮抗作用，抑制肠道不良微生物的增殖，调整肠道菌群平衡，申请人已于2011年7月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏， 保藏地址及简称同上，保藏号为CGMCCNo. 5093。本发明的有益效果在于本发明中所用的短小芽孢杆菌CGMCC NO. 4756为申请人首次在国内分离到的一株来源于动物消化道的新的短小芽孢杆菌，并将其作为饲料添加剂应用于动物预混料中，同时首次应用于饲料防霉剂方面；且此菌株具有耐高温的特点，因而具有不需要包被，可直接制粒的优点；本发明的短小芽孢杆菌作为一种饲料添加剂添加到预混料中，能够改善饲料品质，提高饲料中粗蛋白的含量，降低饲料中粗纤维的含量，同时较常规防霉剂除了安全、无污染、直接制粒之外，不含化学药剂，不仅防霉效果好，抑菌力强，而且可以改善饲料品质；本发明中的酵母细胞壁多糖是由酿酒酵母菌粉CGMCC No. 2388 经碱制备法制备而成，此产品富含葡聚糖和功能性的寡糖等生物免疫因子，可显著增强吞噬细胞的活性及吞噬能力，强化动物免疫系统的功能，改善动物体内微生物环境，识别粘附和消除饲料中霉菌毒素，提高饲料转化率。本发明所用嗜酸乳杆菌CGMCC No. 5093具有较强的产酸能力，嗜酸乳杆菌的加入，不仅可创造微酸性环境，增强防霉剂的稳定性，还可赋予饲料优良的感官性质，在增强动物肠道抵抗力，预防和治疗腹泻，提升饲料安全性方面有着良好的益生功效。本发明的微生态制剂由短小芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、酵母细胞壁多糖和菊粉复配而成，适口性强，不仅具有强化动物免疫系统，选择性促进动物肠道有益菌增殖，抑制有益菌的定植和繁育，改善动物体内微生物环境，刺激机体免疫应答，增强畜禽免疫力、提高畜禽生产性能，减少抗生素使用，对饲料霉菌毒素有很好的识别粘附和消除能力，提高饲料转化率的功能；同时又可作为一种饲料防霉剂；还具有添加量少，制备工艺简单，无副作用， 无残留等优点，具有较高的市场价值。
具体实施例方式实施例1 复合微生态饲料添加剂的制备Α、嗜酸乳杆菌菌粉的制备嗜酸乳杆菌CGMCC NO. 5093接种于MRS培养基中，37°C 静止培养12h，调整菌浓度至2X109CFU/ml，按菌液保护剂1 10的配比(体积比)加入保护剂(保护剂配方为脱脂乳3%，海藻糖2%，硫酸锰0. 5%，蔗糖0. 2%，其它为水)，-80°C 预冻4h后，采用真空冷冻干燥的方法，在冷冻温度-50°C，真空度30Pa下制成活菌数为 2X108CFU/g嗜酸乳杆菌菌粉。B、短小芽孢杆菌菌粉的制备短小芽孢杆菌CGMCC NO. 4756接种于LB培养基中， 37°C静止培养12h，调整菌浓度至SxioiiCFUAiI,按菌液载体1 1的配比(重量比)加入载体玉米芯粉，60°C烘干24h，制成活菌数为5 X 109CFU/g短小芽孢杆菌菌粉。C、酿酒酵母细胞壁多糖的制备1)取酿酒酵母菌粉1000g，加入5L氢氧化钠溶液 (lmol/L)，在100°C下加热水解4h，等冷却至室温后，离心(1000X g，IOmin)，进行固液分离；2)弃去上清液后，加IL水于剩余不溶物中，搅拌均勻，再离心(1000Xg，10min)，如此重复两次；3)向不溶物中加入1.5L醋酸溶液(10%，V/V)搅拌均勻，然后在85°C水浴中保温2h ；4)如方法1)所述方法进行固液分离，并洗涤两次；5)剩余不溶物用丙酮洗涤三次后， 干燥，得到酵母细胞壁多糖产品粗蛋白质含量为35%，β-葡聚糖含量为30%，甘露寡糖含量为20%的酿酒酵母细胞壁多糖。D、按配比称取各成分原料，配比如下短小芽孢杆菌菌粉35%、嗜酸乳杆菌菌粉 30%、酿酒酵母细胞壁多糖0. 5%、菊粉29. 5%，石粉5% ；将原料放入混合均勻度变异系数小于5%的双轴桨叶式高效混合机中，混合均勻，即得。实施例2 复合微生态饲料添加剂的制备Α、嗜酸乳杆菌菌粉的制备嗜酸乳杆菌CGMCC NO. 5093接种于MRS培养基中， 37°C静止培养12h，调整菌浓度至2X109CFU/ml，按菌液保护剂1 10的配比(体积比) 加入保护剂(保护剂配方为脱脂乳3%，海藻糖2%，硫酸锰0.5%，蔗糖0.2%，其它为水)，-80°C预冻4h后，采用真空冷冻干燥的方法，在冷冻温度_50°C，真空度30Pa下制成活菌数5X 108CFU/g嗜酸乳杆菌菌粉。B、短小芽孢杆菌菌粉的制备短小芽孢杆菌CGMCC NO. 4756接种于LB培养基中， 37°C静止培养12h，调整菌浓度至SxioiiCFUAiI,按菌液载体1 1的配比(重量比)加入载体玉米芯粉，60°C烘干24h，制成活菌数大于8 X 109CFU/g短小芽孢杆菌菌粉。C、酿酒酵母细胞壁多糖的制备1)取酿酒酵母菌粉1000g，加入5L氢氧化钠溶液 (lmol/L)，在100°C下加热水解4h，等冷却至室温后，离心(1000X g，IOmin)，进行固液分离；2)弃去上清液后，加IL水于剩余不溶物中，搅拌均勻，再离心(1000Xg，10min)，如此重复两次；3)向不溶物中加入1.5L醋酸溶液(10%，V/V)搅拌均勻，然后在85°C水浴中保温 2h ；4)如方法1)所述方法进行固液分离，并洗涤两次；5)剩余不溶物用丙酮洗涤三次后， 干燥，得到酵母细胞壁多糖产品粗蛋白质含量为30 %，β -葡聚糖含量为45 %，甘露寡糖含量为30%的酿酒酵母细胞壁多糖。D、按配比称取各成分原料，配比如下短小芽孢杆菌菌粉42%，嗜酸乳杆菌菌粉 28%，酿酒酵母细胞壁多糖1%，菊粉19%，石粉10% ；将原料放入混合均勻度变异系数小于5%的双轴桨叶式高效混合机中，混合均勻，即得。实施例3 复合微生态饲料添加剂的制备Α、嗜酸乳杆菌菌粉的制备嗜酸乳杆菌CGMCC Ν0. 5093接种于MRS培养基中，37°C 静止培养12h，调整菌浓度至2X109CFU/ml，按菌液保护剂1 10的配比(体积比)加入保护剂(保护剂配方为脱脂乳3%，海藻糖2%，硫酸锰0. 5%，蔗糖0. 2%，其它为水)，-80°C 预冻4h后，采用真空冷冻干燥的方法，在冷冻温度-50°C，真空度30Pa下制成活菌数为 6X108CFU/g嗜酸乳杆菌菌粉。B、短小芽孢杆菌菌粉的制备短小芽孢杆菌CGMCC N0. 4756接种于LB培养基中， 37°C静止培养12h，调整菌浓度至SxioiiCFUAiI,按菌液载体1 1的配比(重量比)加入载体玉米芯粉，60°C烘干24h，制成活菌数大于4X 109CFU/g短小芽孢杆菌菌粉。C、酿酒酵母细胞壁多糖的制备1)取酿酒酵母菌粉1000g，加入5L氢氧化钠溶液 (lmol/L)，在100°C下加热水解4h，等冷却至室温后，离心(1000X g，IOmin)，进行固液分离；2)弃去上清液后，加IL水于剩余不溶物中，搅拌均勻，再离心(1000Xg，10min)，如此重复两次；3)向不溶物中加入1.5L醋酸溶液(10%，V/V)搅拌均勻，然后在85°C水浴中保温 2h ；4)如方法1)所述方法进行固液分离，并洗涤两次；5)剩余不溶物用丙酮洗涤三次后，干燥，得到酵母细胞壁多糖产品粗蛋白质含量为25 %，β -葡聚糖含量为35 %，甘露寡糖含量为31%的酿酒酵母细胞壁多糖。D、按配比称取各成分原料，配比如下短小芽孢杆菌菌粉50%，嗜酸乳杆菌菌粉 22%，酿酒酵母细胞壁多糖1%，菊粉17%，石粉10% ；将原料放入混合均勻度变异系数小于5%的双轴桨叶式高效混合机中，混合均勻，即得。实施例4、复合微生态饲料添加剂在断奶仔猪养殖方面的应用选用144头平均体重为8. 65士0.42kg的大白X长白二元杂交断奶仔猪，断奶日龄为28士2d，依照其体重、性别、窝别一致的原则随机分为4个处理，分别饲喂基础饲料(空白对照组)，基础饲料中添加实施例2制备的饲料添力Π剂，添加比例为0. 5%0 (实验1组)， 5%0 (实验2组)，10%。(实验3组)的日粮，每处理6个重复，每个重复6头猪，公母各半， 试验期为35d。实验结果如表1。结果表明，添加复合微生态制剂的实验组末期平均净增重、日增重和头均耗料量均高于空白对照组，由此可见，此饲用微生态制剂的添加具有有效提高断奶仔猪的生长性能，降低料肉比，减少仔猪的腹泻率的作用。综合分析得出，复合微生态制剂的优选添加量为5%。，此时，实验组与空白对照组相比，仔猪末期平均净增重提高33.7%，日均增重提高 33. 5%，料重比显著低于对照组，仔猪腹泻率为0。表1不同剂量微生态制剂对断奶仔猪生长性能的影响
权利要求
1.一种复合微生态饲料添加剂，其特征在于它是一种粉剂，该添加剂主要由下述重量百分比的成分混合而成短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)菌粉30-50%，嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus)菌粉 20-30%,酉良酒酵母(saccharomyces cerevisiae)细胞壁多糖0. 5-1%，菊粉10% -30%，石粉1-10%。
2.如权1所述的复合微生态饲料添加剂，其特征在于该添加剂主要由下述重量百分比的成分混合而成短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)菌粉42%，嗜酸乳杆菌 (Lactobacillus acidophilus)菌粉 28%，酉良酒酵母(saccharomyces cerevisiae)细胞壁多糖1%，菊粉19%，石粉10%。
3.如权1所述的复合微生态饲料添加剂，其特征在于所述短小芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC N0. 4756，所述嗜酸乳杆菌的保藏编号为CGMCCNo. 5093 ；所述酿酒酵母的保藏编号为 CGMCC No. 2388。
4.如权1所述的复合微生态饲料添加剂，其特征在于所述的短小芽孢杆菌菌粉在 40-90°C条件下烘干而成，活菌数在5X108CFU/g以上；所述嗜酸乳杆菌菌粉采用真空冷冻干燥的方法，在冷冻温度_55°C -30°C，真空度20 60Pa条件下制备而成，活菌数在 2X107CFU/g以上；所述酿酒酵母细胞壁多糖中，粗蛋白质含量彡35%, β-葡聚糖含量 ^ 30%，甘露寡糖含量> 20%。
5.如权1-4任一项所述的复合微生态饲料添加剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤Α、嗜酸乳杆菌菌粉的制备嗜酸乳杆菌接种于MRS培养基中，37°C静止培养12h，调整菌浓度至2 X 109CFU/ml，按体积比菌液保护剂为1 10的配比加入保护剂，保护剂配方如下脱脂乳3%，海藻糖2%，硫酸锰0. 5%，蔗糖0. 2%，其它为水；采用真空冷冻干燥的方法，在冷冻温度-55 _30°C，真空度20-60Pa下制成活菌数大于2X 107CFU/g嗜酸乳杆菌菌粉；B、短小芽孢杆菌菌粉的制备短小芽孢杆菌接种于LB培养基中，37°C静止培养12h，调整菌浓度至SXIOiiCFUAiI,按重量比菌液载体为1 10的配比加入载体玉米芯粉，60°C 烘干24h制成活菌数大于5X 108CFU/g短小芽孢杆菌菌粉；C、酿酒酵母细胞壁多糖的制备1)制备酿酒酵母菌粉，取酿酒酵母菌粉1000g，加入5L 浓度为lmol/L的氢氧化钠溶液，在100°C下加热水解4h，等冷却至室温后，lOOOXg，离心 lOmin，进行固液分离；2)弃去上清液后，加IL水于剩余不溶物中，搅拌均勻，在IOOOXg下离心lOmin，重复两次；3)向不溶物中加入1. 5L体积比为10%醋酸溶液，搅拌均勻，然后在 85°C水浴中保温2h;4)如方法1)所述方法进行固液分离，并洗涤两次；5)剩余不溶物用丙酮洗涤三次后，干燥，得到酵母细胞壁多糖产品粗蛋白质含量< 35%，β-葡聚糖含量 ^ 30%，甘露寡糖含量> 20%的酿酒酵母细胞壁多糖；D、按配比称取各成分原料，将原料放入混合机中，混合均勻，即得。
6.一种包含权1-4任一项所述的复合微生态饲料添加剂的预混料，其特征在于复合微生态饲料添加剂在预混料中添加的重量百分比为1-10%。。
全文摘要
本发明公开了一种复合微生态饲料添加剂及其预混料，属于饲料科学与饲料添加剂技术领域。本发明的饲料添加剂含有多种益生菌，不仅具有增强畜禽免疫力、提高畜禽生产性能的功能，同时又可作为一种饲料防霉剂，对饲料霉菌毒素有很好的识别粘附和消除能力，可有效抑制饲料中霉菌的生长，吸附并降解霉菌毒素，是一种新型安全可靠、无污染的纯发酵多功能的微生态制剂产品，有着良好的应用前景。
文档编号A23K1/16GK102326677SQ20111032412
公开日2012年1月25日 申请日期2011年10月21日 优先权日2011年10月21日
发明者刘婷, 刘滢, 彭子欣, 王安如, 胡婷, 谢飞 申请人:内蒙古四季春饲料有限公司, 北京大北农科技集团股份有限公司, 漳州大北农农牧科技有限公司