马铃薯脱毒微型种薯的生产方法
【专利摘要】马铃薯脱毒微型种薯的生产方法，它属于马铃薯种薯生产领域。本发明要解决现有马铃薯脱毒制微型种薯方法存在脱毒效率低和脱毒苗质量差的技术问题。方法：一、选脱毒材料，先打破薯块的休眠，温润沙覆盖，催芽，高温；二、剥取茎尖，自来水冲洗，再乙醇浸泡，用次氯酸钠溶液浸，用无菌水冲洗；步骤三、剖取带有1~2个叶原基茎尖分生组织，进行离体培养，当苗的数量达到检测用量时，对苗进行PLRV、PVA、PVY、PVM、PVX、PVS、PSTV七种病毒进行检测，结果均为阴性即为脱毒苗；步骤四、扩繁，炼苗，移栽至温室内进行肥水管理，培养至收获，获得微型薯。本发明用于生产马铃薯种薯。
【专利说明】马铃薯脱毒微型种薯的生产方法
【技术领域】
[0001]本发明属于 马铃薯种薯生产领域。
【背景技术】
[0002]马铃薯是世界第四大粮食作物，它适应性强，产业链长，是重要的粮食经济兼用的作物和工业原料作物。
[0003]植物繁殖过程中入侵病毒的积累，导致马铃薯长势每年下降，收获的土豆越来越少，甚至绝产等等。
[0004]目前，采用马铃薯脱毒制微型种薯来防止马铃薯退化，但存在脱毒效率低和脱毒苗质量差的技术问题。
【发明内容】
[0005]本发明要解决现有马铃薯脱毒制微型种薯方法存在脱毒效率低和脱毒苗质量差的技术问题；而提供了马铃薯脱毒微型种薯的生产方法。
[0006]马铃薯脱毒微型种薯的生产方法，其特征在于马铃薯脱毒微型种薯的生产方法是按下述步骤进行的:
步骤一、以品种特征明显(即皮色、肉色、薯型、芽眼等符合特性要求)的生长健壮的优良植株所结的且无病斑、虫蛀和机械创伤的薯块作脱毒材料，先打破薯块的休眠，然后用温润沙覆盖，置于25°C黑暗条件下催芽，待茎尖长Icm时，转入光照培养箱进行高温处理20^25天，高温处理期间每天先在40°C高温处理2小时再在38°C高温处理22小时，高温处理第 7天用 0.1~0.5 mg /L赤霉素(GA3)+0.1`θ.5 mg /L6-苄氨基喋呤(6BA) +0.1~θ.5mg/LD-泛酸钙处理一次(用脱脂棉蘸取配制好的液体，放于牙尖上处理5分钟);
步骤二、然后剥取2~3cm长的茎尖，用自来水冲洗30min，再用70%~75% (质量浓度)乙醇浸泡30秒，随即用5%~7% (质量浓度)次氯酸钠溶液浸20分钟，再用无菌水冲洗3~4次；步骤三、然后在实体解剖镜下，剖取带有广2个叶原基(约0.2^0.3mm)的茎尖分生组织，进行离体培养，当苗的数量达到检测用量时，对苗进行PLRV、PVA、PVY、PVM、PVX、PVS,PSTV七种病毒进行检测，结果均为阴性即为脱毒苗；
步骤四、将脱毒苗接种于MS培养基中，置于培养室内，在培养室的温度保持在25°C，光照为2000-3000勒克斯，每天16小时光照条件下进行切段扩繁，炼苗，移栽至温室内进行肥水管理，培养至收获，获得微型薯。
[0007]本发明通过高温变温处理钝化植物体内病毒，去除病毒能力明显增强，能去除PLRV、PVA、PVY、PVM、PVX、PVS、PSTV七种病毒，同时保证植物的生长发育，增强脱毒效率。用赤霉素+6-苄氨基喋呤^BA) +D-泛酸钙处理可以加速茎尖细胞的分裂和生长，从而提高茎尖的质量，取得好的脱毒效果。
[0008]生产出来的微型薯和由微型薯生产的原种一代试验品在黑龙江、内蒙古等地试种表现良好，田间长势和抗病性突出；可达到上市销售级别的原种二代试验品经过在惠州、青岛等地试种取得良好地效果，植株健壮，生长旺盛，抗病性明显增强，每667平方米产量可达8000斤以上，大薯率在90%以上，田间几乎没有烂薯，较传统的自留种(一般667平方米产量在2000斤以下)有非常明显的优势，取得了良好地经济效益。
[0009] 【具体实施方式】:
【具体实施方式】一:本实施方式中马铃薯脱毒微型种薯的生产方法是按下述步骤进行
的:
步骤一、以品种特征明显(即皮色、肉色、薯型、芽眼等符合特性要求)的生长健壮的优良植株所结的且无病斑、虫蛀和机械创伤的薯块作脱毒材料，先打破薯块的休眠，然后用温润沙覆盖，置于25°C黑暗条件下催芽，待茎尖长Icm时，转入光照培养箱进行高温处理20-25天，高温处理期间每天先在40°C高温处理2小时再在38°C高温处理22小时，高温处理第 7 天用 0.1~0.5 mg /L 赤霉素(GA3)+0.1~θ.5 mg /L6-苄氨基喋呤(6BA) +0.1~θ.5mg/LD-泛酸钙处理一次(用脱脂棉蘸取配制好的液体，放于牙尖上处理5分钟)；
步骤二、然后剥取2~3cm长的茎尖，用自来水冲洗30min，再用70%~75% (质量浓度)乙醇浸泡30秒，随即用5%~7% (质量浓度)次氯酸钠溶液浸20分钟，再用无菌水冲洗3~4次；步骤三、然后在实体解剖镜下，剖取带有广2个叶原基(约0.2^0.3mm)的茎尖分生组织，进行离体培养，当苗的数量达到检测用量时，对苗进行PLRV、PVA、PVY、PVM、PVX、PVS,PSTV七种病毒进行检测，结果均为阴性即为脱毒苗；
步骤四、将脱毒苗接种于MS培养基中，置于培养室内，在培养室的温度保持在25°C，光照为2000-3000勒克斯，每天16小时光照条件下进行切段扩繁，炼苗，移栽至温室内进行肥水管理，培养至收获，获得微型薯；
【具体实施方式】二:本实施方式与【具体实施方式】一不同的是:步骤一中用15硫脲+5mg/L赤霉素浸种5分钟来打破休眠。其它步骤和参数与【具体实施方式】一相同；
【具体实施方式】三:本实施方式与【具体实施方式】一或二不同的是:步骤二用70% (质量浓度)乙醇浸泡。其它步骤和参数与【具体实施方式】一或二相同；
【具体实施方式】四:本实施方式与【具体实施方式】一至三之一不同的是:步骤二所述的次氯酸钠溶液的质量百分比浓度为5%。其它步骤和参数与【具体实施方式】一至三之一相同；
【具体实施方式】五:本实施方式与【具体实施方式】一至四之一不同的是:步骤三的茎尖分生组织培养基，MS+赤霉素0.lmg/L+6-苄胺基嘌呤0.lmg/L+D-泛酸钙0.lmg/L+蔗糖3%，琼脂粉0.5%，PH5.8，培养条件(23±2) °C，16小时光照，光强30001x。其它步骤和参数与【具体实施方式】一至四之一相同；
【具体实施方式】六:本实施方式中马铃薯脱毒微型种薯的生产方法是按下述步骤进行
的:
步骤一、以品种特征明显(即皮色、肉色、薯型、芽眼等符合特性要求)的生长健壮的优良植株所结的且无病斑、虫蛀和机械创伤的薯块作脱毒材料，先打破薯块的休眠，然后用温润沙覆盖，置于25°C黑暗条件下催芽，待茎尖长Icm时，转入光照培养箱进行高温处理25天，高温处理期间每天先在40°C高温处理2小时再在38°C高温处理22小时，高温处理第7天用0.2 mg /L赤霉素(GA3) +0.3 mg /L6-节氨基喋呤(6BA) +0.2mg/LD_泛酸钙处理一次，(用脱脂棉蘸取配制好的液体，放于牙尖上处理5分钟)；
步骤二、然后剥取2~3cm长的茎尖，用自来水冲洗30min，再用75% (质量)乙醇浸泡30秒，随即用5% (质量)次氯酸钠溶液浸20分钟，再用无菌水冲洗3~4次；
步骤三、然后在实体解剖镜下，剖取带有2个叶原基的茎尖分生组织，进行离体培养，当苗的数量达到检测用量时，对苗进行PLRV、PVA、PVY、PVM、PVX、PVS、PSTV七种病毒进行检测，结果均为阴性即为合格脱毒苗；
步骤四、将脱毒苗切段扩繁，接种于MS培养基中，置于培养室内，在培养室的温度保持在25°C左右，光照为2000-3000勒克斯，每天16小时光照条件下进行培养；
步骤五、炼苗(炼苗具体方法及参数将脱毒苗移入温室，自然放置3天后，将培养瓶盖打开，再放置2天即可移栽)，移栽至温室内进行肥水管理(具体方法及参数刚刚移栽脱毒苗要立即浇透水，覆盖薄膜保水，每天上午9点前或者下午4点后适量喷水，待小苗缓苗后，去掉薄膜，进入日常管理，视情况补水补肥，每隔10天左右喷施一次防止疫病的药物)，培养至收获，获得微型薯。
[0010]步骤三的茎尖分生组织培养基:MS+赤霉素0.lmg/L+6-苄胺基嘌呤0.1mg/L+D-泛酸钙0.lmg/L+蔗糖3%，琼脂粉0.5%，PH5.8 ;培养条件(23±2) °C，16小时光照，光强 30001x。
[0011]本实施方式方法每株结薯3个以上，单个重2g以上，最大块茎重100g以上。每次每平方米可收获500-600块。
[0012]种薯栽培方法如下:
1、切种:将选好的种子切成块，每块带芽眼广2个，块重20克以上。注意切种刀用消毒液消毒；
2、拌种:将切好 的种块用64%杀毒矾Wp0.5kg+农用链霉素30g拌种薯1000kg ；
3、整地:在选好的地块上，每亩施有机肥1500~2500公斤，尿素20公斤，普钙20~30公斤，钾肥10~12公斤作为底肥，化肥要施于离种薯2~3厘米处，避免与种薯直接接触。如有地下害虫，可与化肥一起施加防虫害农药地块的选择要求，偏酸性的含腐殖质沙壤土，前茬未种茄科植物；
4、播种:每667平方米，播种薯块5000块左右。覆土8~12cm ；
5、日常管理:待出苗后，注意补肥补水，注意除草，防病虫害。
[0013]生产出来的微型薯和由微型薯生产的原种一代试验品在黑龙江、内蒙古等地试种表现良好，田间长势和抗病性突出；可达到上市销售级别的原种二代试验品经过在惠州、青岛等地试种取得良好地效果，植株健壮，生长旺盛，抗病性明显增强，每667平方米产量可达8000斤以上，大薯率在90%以上，田间几乎没有烂薯，较传统的自留种(一般667平方米产量在2000斤以下)有非常明显的优势，取得了良好地经济效益。
【权利要求】
1.马铃薯脱毒微型种薯的生产方法，其特征在于马铃薯脱毒微型种薯的生产方法是按下述步骤进行的: 步骤一、以品种特征明显的生长健壮的优良植株所结的且无病斑、虫蛀和机械创伤的薯块作脱毒材料，先打破薯块的休眠，然后用温润沙覆盖，置于25°c黑暗条件下催芽，待茎尖长Icm时，转入光照培养箱进行高温处理20-25天，高温处理期间每天先在40°C高温处理2小时再在38°C高温处理22小时，高温处理第7天用0.θ.5 mg /L赤霉素+0.θ.5 mg/L6-苄氨基喋呤+0.θ.5mg/LD-泛酸钙处理一次； 步骤二、然后剥取2~3cm长的茎尖，用自来水冲洗30min，再用70%~75% (质量浓度)乙醇浸泡30秒，随即用5%~7% (质量浓度)次氯酸钠溶液浸20分钟，再用无菌水冲洗3~4次； 步骤三、然后在实体解剖镜下，剖取带有f 2个叶原基的茎尖分生组织，进行离体培养，当苗的数量达到检测用量时，对苗进行PLRV、PVA、PVY、PVM、PVX、PVS、PSTV七种病毒进行检测，结果均为阴性即为脱毒苗； 步骤四、将脱毒苗接种于MS培养基中，置于培养室内，在培养室的温度保持在25°C，光照为2000-3000勒克斯，每天16小时光照条件下进行切段扩繁，炼苗，移栽至温室内进行肥水管理，培养至收获，获得微型薯。
2.根据权利要求1所述的马铃薯脱毒微型种薯的生产方法，其特征在于步骤一中用15硫脲+5mg/L赤霉素浸种5分钟来打破休眠。
3.根据权利要求2所述的马铃薯脱毒微型种薯的生产方法，其特征在于步骤二用70%(质量浓度)乙醇浸泡。
4.根据权利要求1、2或3所述的马铃薯脱毒微型种薯的生产方法，其特征在于步骤二所述的次氯酸钠溶液的质量百分比浓度为5%。
5.根据权利要求4所述的马铃薯脱毒微型种薯的生产方法，其特征在于步骤三的茎尖分生组织培养基:MS+赤霉素0.lmg/L+6-苄胺基嘌呤0.lmg/L+D-泛酸钙0.lmg/L+蔗糖3%，琼脂粉0.5%，PH5.8，培养条件:(23±2) °C，16小时光照，光强30001x。
【文档编号】A01H4/00GK103651113SQ201210338291
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2012年9月14日 优先权日:2012年9月14日
【发明者】张引强 申请人:哈尔滨睿哲科技开发有限公司