专利名称：一种大鼠亚低温动物模型的制备方法
技术领域：
本发明涉及动物模型领域，具体地说，是一种快速有效大鼠亚低温动物模型的制备方法。
背景技术：
亚低温作为一种神经保护疗法已有一个半多世纪的历史。国际上将低温划分为轻度低温(mild hypothermia) : 33 36°C ;中度低温(moderate hypothermia) : 28 32°C ;深度低温(deep hypothermia) : 20 27°C ;超深低温(profound hypothermia) : 19°C以下；极深度低温(ultra profound hypothermia) :〈5°C。前二者被称为亚低温。应用啮齿类动物研究亚低温疗法的动物实验很多，总结分析该类实验中亚低温实 施、维持、温度检测的方法如下
I)将动物置于4摄氏度低温环境下。单独利用4摄氏度低温环境可以诱导大鼠亚低温，但所需时间长，动物在缓慢降温过程更易产生寒战等副作用，影响降温效果的同时削弱了亚低温的神经保护作用。2)动物冷水浸浴。动物冷水(29摄氏度)浸浴，实施方便，但不利于持续温度检测及保持手术大鼠干燥。3 )冰袋直接接触降温、喷洒酒精、风扇辅助降温。冰袋直接接触降温虽然可以较快降低动物体温，但容易造成动物皮肤冻伤，且温度不易控制。喷洒酒精、风扇辅助降温温度也较难控制。4)输注冷的自体动脉血。输注冷的自体动脉血需要特殊设备、有创操作，并发症多、价格昂贵，不利于动物实验开展。5)麻醉药物协助降温。麻醉药物本身是否对脑梗死大鼠有保护作用上存在争议，因此麻醉药物协助降温对动物实验结果产生干扰，且影响神经行为学评估的进行。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种大鼠亚低温动物模型的制备方法。本发明的再一的目的是，提供一种大鼠亚低温动物模型。本发明的另一的目的是，提供一种大鼠亚低温动物模型的应用。为实现上述目的，本发明采取的技术方案是一种大鼠亚低温动物模型的制备方法，包括以下步骤将大鼠放入通风鼠笼，置于4°C低温环境中，冰袋置于鼠笼外辅助降温，目标温度33±0. 5°C，持续监测大鼠肛温的变化；当肛温低于最低限32. 5°C时将冰袋移走或将大鼠连同鼠笼放回室温，当肛温高于最高限33.5°C时再将鼠笼移到4°C低温环境中，冰袋辅助降温。所述的制备方法中持续监测血糖，大鼠禁食禁水，灌胃液灌胃维持血糖。所述的大鼠术前24小时禁食,不禁水,术前12小时给予灌胃3mlX I次；术后6h、12h、18h、24h、30h 分别灌胃 3ml-4ml X I 次。所述的灌胃液分为A液和B液，所述的A液每1000ml含有葡萄糖222g和IOml 10%浓NaCl，所述的B液为A液用ddH20以I :2的比例稀释。如果大鼠在未来6h内是常温状态下则用2mlA +ImlB ;如果大鼠在未来6h内是在低温状态下则用ImlA +2mlB，并根据血糖情况浓度加减。为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是一种大鼠亚低温动物模型，所述的动物模型采用以上所述的方法制备得到。为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是所述的动物模型在亚低温动物实验中的应用。本发明优点在于
1、迅速达到目标温度(33±0.5 °C);
2、体温波动小；
3、大鼠皮肤冻伤减少；
4、血糖控制在正常范围内。
图I.四组大鼠体温检测结果。
具体实施例方式下面结合附图对本发明提供的具体实施方式
作详细说明。实施例I
一、实验方法
35只试验大鼠分为亚低温组与常温组，前者根据亚低温给与时间点不同分为2h亚低温组、6h亚低温组。所有大鼠在给予低温或者常温干预前均行手术(动物试验需要)。I、亚低温实施
将待实施亚低温的大鼠置于4°C的通风环境中，冰袋辅助降温。自制通风鼠笼可以避免大鼠皮肤与冰袋的直接接触，避免冻伤。在规定时间点2h或6h将亚低温组大鼠放入鼠笼，置于4°C低温环境中，冰袋置于鼠笼外辅助降温，目标温度33±0.5°C，持续观测大鼠肛温的变化。当肛温低于设定的最低限32. 5°C时可将冰袋移走或将大鼠连同鼠笼放回室温(25-26°C),当肛温高于设定的最高限33. 5°C时再将鼠笼移到4°C低温环境中，冰袋辅助降温。所有大鼠均在30min内达到目标温度。2、体温监测
采用恒方牌电子温度计(ST-2)监测大鼠直肠温度，在电子温度计的探头上涂抹石蜡油，然后将探头插入大鼠肛内，深度约5cm。持续监测大鼠体温约36小时。3、大鼠能量补充
低温环境下大鼠摄食活动减少，为保证大鼠能量供应以及尽量减少除试验处理因素以外各组内组间个体差异，大鼠禁食、禁水。根据大鼠日需水量，需能量，需电解质量以及低温环境下大鼠新陈代谢减低的特殊情况，结合正式实验前的实践和课题组前期经验，配置大鼠专用灌胃液。所有能量、水，和电解质的需求经自制灌胃液补充。补液配制方法和补液时间补液量如下所示
补液配置方法
A 液222g 葡萄糖 + IOml 10% 浓 NaCl+800mlddH20 定容至 1000ml，高压消毒。B液A液用ddH20以I :2的 比例稀释。补液的时间和用量
试验大鼠术前术前24小时禁食；不禁水；术前12小时给予灌胃3mlX I次试验大鼠术后:术后6h ；12h ；18h ；24h ；30h分别灌胃3ml-4ml X I次如果大鼠在未来6h内是常温状态下则用2mlA +ImlB ;如果大鼠在未来6h内是在低温状态下则用ImlA +2mlB。并根据血糖情况浓度，灵活加减。4、血糖监测方法
大鼠在术前测量尾静脉血糖一次。术后6h以及灌胃前各测一次，以后每12h测量一次，每次测量血糖均在灌胃之前，共测量4次。在自发性高血压大鼠接近尾尖处常规酒精消毒，针刺尾静脉后出血，应用随手测型(OneTouch Horizon )血糖仪测量血糖，按照操作说明书进行操作。二、实验结果
1、大鼠体温
35只大鼠分为四组2h亚低温组，6h亚低温组，常温I组；常温2组。测量体温结果如
下
1)亚低温组大鼠(2h亚低温组、6h亚低温组)均在规定的时间点(术后2h、术后6h)给予亚低温，在30min内肛温降低至目标值(33±0. 5°C )，并能维持至术后36小时。常温组大鼠体温维持在37°C左右。温度检测如图I示
2)整个试验过程中可见，大鼠体温波动小，亚低温控制良好，维持时间足够长(术后36小时)
2、大鼠血糖
为了保持低温组与常温组大鼠可比性，术后灌胃维持血糖。表I是血糖监测结果。四组大鼠各个时间点血糖差别没有统计学意义。表I各组大鼠血糖测量统计后的结果
权利要求
1.一种大鼠亚低温动物模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤将大鼠放入通风鼠笼，置于4°c低温环境中，冰袋置于鼠笼外辅助降温，目标温度33±0. 5°C，持续监测大鼠肛温的变化；当肛温低于最低限32. 5°C时将冰袋移走或将大鼠连同鼠笼放回室温，当肛温高于最高限33. 5°C时再将鼠笼移到4°C低温环境中，冰袋辅助降温。
2.根据权利要求I所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法中持续监测血糖，大鼠禁食禁水，灌胃液灌胃维持血糖。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的大鼠术前24小时禁食，不禁水，术前12小时给予灌胃3mlXl次;术后6h、12h、18h、24h、30h分别灌胃3ml_4mlXl次。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的灌胃液分为A液和B液，所述的A液每IOOOml含有葡萄糖222g和IOml 10%浓NaCl，所述的B液为A液用ddH20以I :2的比例稀释。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，如果大鼠在未来6h内是常温状态下则用2mlA +ImlB ;如果大鼠在未来6h内是在低温状态下则用ImlA +2mlB，并根据血糖情况浓度加减。
6.一种大鼠亚低温动物模型，其特征在于，所述的动物模型米用权利要求1-5任一所述的方法制备得到。
7.根据权利要求6所述的动物模型在亚低温动物实验中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种大鼠亚低温动物模型的制备方法，包括以下步骤将大鼠放入通风鼠笼，置于4℃低温环境中，冰袋置于鼠笼外辅助降温，目标温度33±0.5℃，持续监测大鼠肛温的变化；当肛温低于最低限32.5℃时将冰袋移走或将大鼠连同鼠笼放回室温，当肛温高于最高限33.5℃时再将鼠笼移到4℃低温环境中，冰袋辅助降温。本发明还提供一种大鼠亚低温动物模型及其应用。本发明优点在于迅速达到目标温度；体温波动小；大鼠皮肤冻伤减少；血糖控制在正常范围内。
文档编号A01K67/02GK102919199SQ20121047289
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月21日 优先权日2012年11月21日
发明者范薇 申请人:复旦大学附属中山医院