治疗癌症的方法

治疗癌症的方法
【专利摘要】本发明涉及在有此需要的受试者中，例如在有此需要的人中，治疗癌症的方法，该方法包括在来自所述人的样品中测定以下至少一项：(a)在来自所述人的样品的EZH2中丙氨酸677(A677)残基处存在或不存在突变；或(b)在EZH2中酪氨酸641(Y641)残基处存在或不存在突变；或(c)相比于对照存在或不存在增加的H3K27me3水平，并且如果在所述样品中存在至少一项所述A677突变、Y641突变或增加的H3K27me3水平，则向所述人施用有效量的EZH2抑制剂或其药学上可接受的盐。
【专利说明】治疗癌症的方法
发明领域
[0001 ] 本发明涉及在有此需要的受试者中治疗癌症的方法。
[0002]发明背景
[0003]用于癌症治疗的靶向疗法的扩大发展和使用反映出关键致癌途径、以及这些途径的靶向扰乱如何对应于临床反应的增加理解。预测靶向疗法功效的困难很可能是对于途径去调节(例如活化突变、扩增)因果机制的有限全局知识的结果。肿瘤治疗的临床前转化研究集中于确定什么肿瘤类型和基因型最有可能受益于治疗。治疗选择的患者群体可帮助最大化治疗潜能。临床前肿瘤模型的细胞反应概况分析已成为开发新癌症疗法的基础。使用体外肿瘤模型群体预测临床疗效的努力已为成功的(例如EGFR抑制剂被选择性用于具有EGFR突变的那些肿瘤)。因此，不同肿瘤来源细胞系的扩展组可概括‘全体来者(allcomers) ’功效试验；从而确认哪些组织学和特定肿瘤基因型最有可能受益于治疗。多种特定分子标志物现已被用于鉴定最有可能在临床环境中受益的患者。
[0004]EZH2 (zeste 同源物 2 的增强子；人 EZH2 基因:Cardoso, C,等人；European Jof Human Genetics, Vol.8, N0.3Pagesl74_180, 2000)是多梳抑制剂复合体 2 (PolycombRepressor Complex2) (PRC2)的催化亚基，其通过三甲基化组蛋白H3的赖氨酸27(H3K27me3)以用于沉默靶基因。组蛋白H3是涉及真核细胞中染色质结构的五种主要组蛋白中的一种。特征为一个主要的球状域和一个长的N端尾的组蛋白涉及核小体(一种’绳珠’结构)的结构。组蛋白是高度翻译后修饰的而组蛋白H3是五种组蛋白中最为广泛修饰的。单独的术语〃组蛋白H3"是故意模糊的，其不区分序列变体或修饰态。组蛋白H3是新兴表观遗传学领域的一种重要蛋白，据认为其序列变体和可变修饰态在基因的动态和长期调节中发挥作用。
[0005]用于治疗癌症的EZH2抑制剂已报道在PCT申请PCT/US2011/035336、PCT/US2011/035340和PCT/US2011/035344中，其在此通过提述并入。希望确认更可能响应这些化合物的基因型。
[0006]发明概述
[0007]本发明提供了在有此需要的人中治疗癌症的方法，其包括在来自所述人的样品中测定以下至少一项:
[0008]a.在来自所述人的样品的EZH2中丙氨酸677 (A677)残基处存在或不存在突变；或
[0009]b.在EZH2中酪氨酸641 (Y641)残基处存在或不存在突变；或
[0010]c.相比于对照存在或不存在增加的H3K27me3水平，并且
[0011]如果在所述样品中存在至少一项所述A677突变、Y641突变或增加的H3K27me3水平，则向所述人施用有效量的EZH2抑制剂或其药学上可接受的盐。
[0012]附图简述
[0013] 图1.一个淋巴瘤细胞系亚组呈现出升高很多的H3K27me3水平.(A)测定来自7种不同癌症类型的111个癌细胞系的总体H3K27me3水平(归一化至总H3)。具有Y641突变的淋巴瘤细胞系通过星号指示。(B)来自一组淋巴瘤细胞系的蛋白溶解物中总体H3K27me3和H3K27mel的Western印迹法分析。
[0014]图2.Pfeiffer淋巴瘤细胞系在EZH2中具有杂合A677G突变.(A)来自PfeifferDLBCL细胞系和原发性DLBCL患者样品中EZH2的Sanger测序的序列迹线。C2045C/G的杂合非同义错义突变(星号)翻译为A677A/G(残基编号基于NM_001203247)。(B)EZH2域体系结构(Uniprot Q15910)。Pfeiffer细胞和原发性肿瘤中确认的突变被高亮。(C)比对人EZH2和人EZHl，苍蝇直系同源物EZ，以及含有组蛋白赖氨酸甲基转移酶的六个其它相关SET域显示Y641和A677是高度保守的。深灰色底纹连同白字代表相同残基且框内氨基酸代表保守残基。为了着色列，比对的9个中必须具有7个保守/相同残基。
[0015]图3.A677G EZH2突变体呈现出对于所有H3K27甲基化态的活性.使用H3K27meO (黑柱)、H3K27mel (灰柱)或H3K27me2 (白柱)作为底物的野生型、A677G和Y641NEZH2 的 kcat (mirT1)。
[0016]图4.A677G EZH2的外源性表达刺激H3K27的三甲基化.采用编码EZH2野生型或突变体形式的表达构建体瞬时转染MCF-7乳腺癌细胞。(A.)H3K27me3、总H3和EZH2的Western印迹法分析。肌动蛋白用作加载对照。(B.)H3K27me3水平归一化至组蛋白H3作为采用空白载体转染细胞的百分数。
[0017]图5.A677G EZH2突变通过影响Y641改变了赖氨酸结合口袋.使用结合H3K9me2肽底物的GLP/EHMT1 的晶体结构生成了野生型EZH2的同源模型。在(A)野生型、(B)Y641N和(C)A677G EZH2中活性位点区的模型化结构。
[0018]图6.高水平H3K27me3和EZH2突变态预测对于EZH2抑制的敏感性.淋巴瘤细胞系生长在存在EZH2抑制剂化合物A的情况下达6天。发生50%生长抑制的化合物A浓度表示为生长IC50并以线表示。H3K27me3水平表示为采用细胞系Pfeiffer获得的H3K27me3水平的百分数(柱状图)。在EZH2中Y641或A677处具有突变的细胞系表示为黑柱而在这些位点为野生型的细胞系表示为灰柱。
[0019]图7GSK126的生化和细胞机理活性.(A)GSK126的结构。(B)GSK126对WT和突变体EZH2的效力。具有K27me0、K27mel或K27me2的组蛋白H3肽(21-44)被用作底物(η=2 ;均值土s.d.被示出)。(C)GSK126对于采用GSK126处理48小时的淋巴瘤细胞系中H3K27me3的影响。使用H3K27me3ELISA测定IC50值(η≤2 ;均值土s.d.被示出)。(D)处理72小时后评估KARPAS-422中H3K27me3/2/l。总组蛋白H3被显示为加载对照。
[0020]图8.EZH2的同源模型以及预测的化合物B (GSK126)结合模式.(A)EZH2的同源模型以及预测的化合物B(GSK126)结合模式。SAM结合部位中结合的GSK126被SAH覆盖。H3K27me2肽底物、SET域和后SET域、以及预测的GSK126结合模式IO A内EZH2和EZHl之间的残基差异被显示。(B)描绘了 GSK126结合模式的放大视图。特定氢键和芳烃-H相互作用被表示为虚线。源自后SET域残基的结合位点表面被示出。(C)高亮EZH2残基与GSK126之间特异性相互作用的2D配体相互作用图。(D)高亮SET域内A677和Y641活化突变位置的EZH2功能域(UniProt Q15910)示意图。
[0021 ] 图9采用GSK126处理的细胞系中H3K27甲基化分析.(A)在EZH2WT (Toledo和SU-DHL-8)和突变体(Pfeiffer和KARPAS-422)淋巴瘤细胞系间比较总体H3K27me3、H3K27me2 和 H3K27mel 水平。(B)通过在 KARPAS-422、Pfeiffer 和 SU-DHL-8B 细胞淋巴瘤细胞系中总体H3K27me3水平减少测定的GSK126经时效力。采用3倍稀释系列的GSK12处理细胞。通过ELISA测定减少H3K27me3水平50% (H3K27me3IC50)所需的GSK126浓度(η≥2 ;均值土 s.d.被示出)。(C)处理72小时后评估H3K27me3、H3K27me2和H3K27mel。总组蛋白H3被显示为加载对照。
[0022]图1OWestern 印迹法分析.采用 0.1 % DMSO (媒介物对照)、25nM、150nM、500nM 或2μΜ GSK126处理ΕΖΗ2突变体(a, b)或WT(c，d)淋巴瘤细胞系72小时后，EZH2、SUZ12和EED的Western印迹。包括肌动蛋白作为加载对照。
[0023]图11GSK126抑制数种EZH2突变体淋巴瘤细胞系的增殖.(A)表示为抑制50%生长所需GSK126浓度(生长IC5tl)的6天后GSK126对于46种淋巴瘤细胞系生长的影响。DLBCL,弥漫型大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma)。BL,伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)。BCBL, AIDS 体腔淋巴瘤(AIDS body cavity-based lymphoma)。FL,滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma)。HL,霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)。NHL,非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin，s lymphoma)。(B)GSK126 对于 Pfeiffer 和 KARPAS-422 生长的经时效力表示为生长IC5Q。(C，F)GSK126在Pfeiffer或KARPAS-422中对于细胞增殖的经时剂量依赖性效应。生长被表示为O时(Ttl)CTG的百分数。(D，G) DNA含量直方图显示了 72小时后GSK126对于细胞周期的影响。(E，H)胱天蛋白酶3/7活性对于媒介物对照的平均倍数改变土s.d.被示出(η = 4)。[0024]图12.复合物剂量-响应曲线证实了 GSK126对于18种DLBCL细胞系生长的影响.在采用Cell Titer-Glo(Promega)评估细胞生长前采用不同浓度的GSK126处理细胞系6天。Y轴代表相对于媒介物对照(0.15% DMS0)的生长百分数。[0025]图13H3K27me3抑制、细胞生长和EZH2水平之间的相关分析(A)来自表6的GSK126细胞生长IC50值对来自图7c的GSK126H3K27me3IC50值作图。皮尔逊相关系数被示出。(B)来自淋巴瘤细胞系全细胞提取物的EZH2和肌动蛋白的代表性western印迹。使用L1-CorOdyssey软件定量EZH2和肌动蛋白的Western印迹信号强度。(C) EZH2信号强度被归一化至总肌动蛋白水平并对来自表6的6日增殖试验中的GSK126细胞生长IC50值作图。
[0026]图14通过shRNA的EZH2敲低的表型影响.(A)表达对EZH2的shRNA或非靶向性对照shRNA的KARPAS-422 (左)和Pfeiffer (右)经过6天时间的细胞增殖。各时间点的CTG信号表示为O日(TO)时的细胞百分数。(B)表达对EZH2的shRNA或非靶向性对照shRNA的KARPAS-422 (左)和Pfeiffer (右)中胱天蛋白酶3/7的经时活性。各时间点的胱天蛋白酶3/7活性表示为O日(TO)时的活性百分数。(C)EZH2的shRNA敲低后的EZH2、H3K27me3、H3K27me2、H3K27mel和总组蛋白H3的Western印迹分析。包括肌动蛋白作为加载对照。
[0027]图15GSK126在敏感性细胞系中诱导转录激活.(A)采用500nMGSK126 (η = 2)处理72小时后呈现出显著改变的基因表达(FDR〈0.1且倍数改变>2或〈_2)的探针组数目。
(B)GSK126处理后上调、下调的基因或所有人转录本的基础H3K27me3ChIP-seq富集概况。
(C)采用GSK126处理72小时后的TXNIP和TNFRSF2IqRT-PCR分析(η= 3 ;均值±s.d.示出)。(D)使用2倍表达改变截留，10个DLBCL细胞系中上调和下调探针组的重叠。(E)显示在 5 种最为敏感的突变体 DLBCL 细胞系(Pfeiffer、KARPAS-422、WSU-DLCL2、SU-DHL-10和SU-DHL-6)的至少4种中呈现出显著增加的表达的35个探针组的平均基因表达强度的热图。
[0028]图16DLBCL细胞系的表达分析.(A)采用GSK126处理72小时后差异表达探针组的归一化基因表达数据的基因表达热图。更深着色表示更高表达。(B)采用500nM GSK126相比于采用0.1% DMSO (媒介物对照)一式两份地处理10个DLBCL细胞系72小时后呈现出显著改变的基因表达(>1.5倍)的探针组数目。(C)上调探针组数目和转录响应性和非响应性突变体 E ZH2DLBCL 细胞系(Pfeiffer、WSU-DLCL2、KARPAS-422、SU-DHL-10, DB 和SU-DHL-4)中基础H3K27me3水平的相关性。H3K27me3水平被归一化至总组蛋白H3并表示为在Pfeiffer细胞系中观测到的那些水平的百分数。转录响应性和非响应性细胞系是带圆圈的。(D)所示细胞系内采用GSK126处理呈现出1.5或2倍表达增加的共同探针组的数目。
[0029]图17响应GSK126而上调的基因富集H3K27me3.采用500nM GSK126处理72小时后在Pfeiffer、WSU-DLCL2和KARPAS422细胞中确认显著上调、下调或未改变的探针组被映射至各基因并从H3K27me3ChIP-seqdata测定各基因和±10kb的H3K27me3富集。相对H3K27me3富集表示为白色至灰色梯度，白色代表无富集且灰色代表最高富集。各行代表唯
一的基因。
[0030]图18 基因本体学(geneontology)富集分析.A 在 Pfeiffer、WSU-DLCL2、KARPAS-422、SU-DHL-10或SU-DHL-6中采用500nM GSK126显著上调的探针组的GO富集分析。B 在 Pfeiffer、WSU-DLCL2、KARPAS-422、SU-DHL-10 或 SU-DHL-6 中采用 500nM GSK126显著上或下调的探针组的GO富集分析。对于P值〈0.01 (虚线)，过滤过度代表的生物学过程和分子功能项(te rm)，每项至少5个基因以及在≥3个细胞系间共同的那些。
[0031]图19采用GSK126的体内H3K27me3抑制和肿瘤生长响应.(A) 10天QD给药GSK126后的肿瘤异种移植物中H3K27me3的响应。b KARPAS-422肿瘤异种移植物中EZH2靶基因的 qRT-PCR 分析。均值土 s.d.(η = 3)被示出(A, B)。(C) GSK126 对于皮下 KARPAS-422 异种移植物生长的活性。均值肿瘤体积土s.e.m.被示出(η = 10)。(D) (C)中处理小鼠的Kaplan-Meier存活曲线。使用非参数对数秩检验在媒介物和处理组间计算的显著性P值被显示。在处理组间未观测到显著性差异(P值=0.07-0.32)。
[0032]图20GSK126的药代动力学分析.(A)腹膜内施用承受Pfeiffer异种移植物的雌性浅褐色SCID小鼠50mg/kg GSK126后的血液和肿瘤分布。在各时间点评估三只小鼠。(B)a中呈现数据的曲线下面积(AUC0-1440)、肿瘤/血液AUC比率、所达到最大浓度(Cmax)和最大浓度时间(Tmax)。N/A，不可用。
[0033]图21GSK126抑制体内肿瘤生长.(A)GSK126对于皮下Pfeiffer异种移植物生长的效力。(B)具有或不具有I周药物假期的GSK126间歇给药对于皮下KARPAS-422异种移植物生长的效力。数值为均值肿瘤体积土标准误差(η = 10)。使用非参数对数秩检验对比媒介物和各处理组以计算P值。
[0034]图22GSK126对于体重和外周血液的影响.(A-C)采用媒介物或GSK126处理期间承受Pfeiffer(A)或KARPAS-422 (B，C)皮下异种移植物的小鼠的平均体重测量。数值呈现为给药开始时的平均重量百分数。(D)经18天的每周两次给药后的⑶-1小鼠完整血细胞计数分析。RBC，红细胞(XlO6细胞/μ I) ;HGB，血红蛋白(g/dl) ;HCT，血细胞比容(百分数)；MCV，均值细胞容积(fl) ;MCH，均值细胞血红蛋白量(pg) ;MCHC，均值细胞血红蛋白浓度(g/dl) ;PLT，血小板(XlO5血小板/μ I) ;WBC，白细胞(XlO3细胞/μ I) ;NEUT，中性粒细胞(xlO3细胞/μ I) ;LYMPH，淋巴性白血球(XlO3细胞/μ I) ;ΜΟΝΟ，单核细胞(xlO3细胞/μ I) ;E0S，嗜酸性粒细胞(XlO3细胞/μ I) ;BAS0，嗜碱性粒细胞(xlO3细胞/μ I) ；LEUK,白血球(XlO3细胞/μ I)。
[0035]图23基因表达概况分析数据的主成分以及相关性分析.(A)来自采用媒介物或500nM GSK126处理72小时的10个DLBCL细胞系生物重复数据的PCA图。(B)具有强健转录变化的DLBCL细胞系生物重复的相关性。K，KARPAS-422 ；P, Pfeiffer ；ff, WSU-DLCL2 ；S10，SU-DHL-10 ；S6, SU-DHL-6。
[0036]发明详述
[0037]近期全基因组测序研究已显示数种在非霍奇金淋巴瘤中频繁改变的基因，包括EZH2、MLL2、MEF2B、CREBBP和TP53等(1_3)。许多这些基因直接或间接通过协同因子的募集介导在组蛋白氨基端尾观测到的翻译后修饰排列。此外，类似研究也涉及这些及其它表观遗传因子在膀胱移行细胞癌(例如UTX，ARID1A，MLL, MLL3)、头和颈鳞状细胞癌(例如EZH2，MLL2)和髓系恶性肿瘤(例如IDH1/2，TET2，DNMT3A，EZH2)中(4-6) ?影响转录因子和组蛋白修饰基因的基因变化的盛行凸显了在肿瘤发生中维持适当转录调节的重要性。
[0038]EZH2基因编码含SET域的赖氨酸甲基转移酶，其连同EED、SUZ12、RbAp48和AEBP2形成多梳抑制复合体2(PRC2) (7，8)<^2!12负责组蛋白!13赖氨酸27 0131(27)残基的甲基化，该残基当以二或三甲基化态存在 时通常与转录抑制相关(7-9)。EZH2在原B细胞中高度表达并随着细胞发展为前B细胞、不成熟B细胞和再循环B细胞而逐渐减少表达(10)。EZH2表达在用于发展原B细胞为前B细胞和不成熟B细胞的骨髓中是必需的，因为EZH2基因失活导致细胞蓄积在原B细胞阶段(10)。然而，若EZH2在原B细胞阶段后失活则其他成熟步骤未受阻碍，暗示EZH2功能是在B细胞分化早期(10)。事实上，多个研究组已显示EZH2在造血干细胞和祖细胞维护中发挥重要作用(11，12)。特别地，造血干细胞(HSC)中EZH2过表达在系列移植模型中导致持续的自我更新能力，暗示EZH2有助于重建潜能并帮助细胞抵抗复制压力(11)。
[0039]EZH2在大多数实体瘤类型中频繁扩增和/或过表达(13);然而在淋巴瘤中似乎不是该情况，可能是由于EZH2在正常增殖B细胞中的高基础表达。反而已报道EZH2在22%的生发中心B细胞(GCB)弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma) (DLBCL)和7%的滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma) (FL)中具有酪氨酸641 (Y641)残基的复发性突变(3)。虽然起始报道为功能失去突变(3)，但随后的生化工作证实了此Y641突变体EZH2新的功能获得性活性(14，15)。虽然野生型EZH2呈现出对于未甲基化和单甲基化H3K27底物的强烈偏好，但是在淋巴瘤中观测的Y641EZH2突变体(Y641F/N/S/H)呈现出对于二甲基化底物的深远增加的活性且对于未甲基化和单甲基化H3K27缺乏活性(14，15)。通过野生型和突变体EZH2蛋白的协调活动，在Y641突变体淋巴瘤中具有H3K27三甲基化(H3K27me3)的总体增加伴随单和二甲基化H3K27的减少(14)。
[0040]这些EZH2Y641突变，连同多种肿瘤中的EZH2过表达，暗示H3K27me3水平的去调节在人肿瘤发生中是重要的。事实上，H3K27me3水平与肾细胞癌中无进展存活(16)以及疾病严重度和食管鳞状细胞癌中不良肿瘤分化(17)相关。除了 EZH2Y641突变，另外的H3K27me3去调节机制包括H3K27脱甲基酶UTX的灭活突变(4，18，19)以及EZH2过表达，这是由于多种机制包括减小的miR-101水平(20，21)、异常E2F活性(22)和染色体扩增所致
(23)。
[0041]通过在超过100种细胞系中研究总体H3K27me3水平，我们已确认一种新的对一些淋巴瘤细胞中增加的H3K27me3负责的A677残基处EZH2突变。对此突变体蛋白的表征表明类似于Y641EZH2突变，交换677位的丙氨酸为甘氨酸(A677G)导致对于二甲基化H3K27底物的增加活性。然而重要的是，此替换保留了野生型EZH2中存在的导致有效利用包括未、单和二甲基化在内的所有H3K27甲基化态的关键相互作用此突变提供了用于细胞去调节H3K27甲基化而不需与野生型EZH2合作的一种独特方法，如在对于Y641EZH2突变体的情况中。
[0042]本发明提供了在有此需要的人中治疗癌症的方法，其包括在来自所述人的样品中测定以下至少一项:
[0043]a.在来自所述人的样品的EZH2中丙氨酸677 (A677)残基处存在或不存在突变；或
[0044]b.在EZH2中酪氨酸641 (Y641)残基处存在或不存在突变；或
[0045]c.相比于对照存在或不存在增加的H3K27me3水平，
[0046]并且如果在所述样品中存在至少一项所述A677突变、Y641突变或增加的H3K27me3水平，则向所述人施用有效量的EZH2抑制剂，例如本文描述的本发明化合物，或其药学上可接受的盐。
[0047]在本文方法的特定实施方案中，测定a、b和c中至少两项，例如任意次序的a和
b、a和c或b和C。在又一实施方案中，各自测定a、b和C，且如果测定到存在A677突变、Y641突变或相比于对照增加的H3K27me3水平中任意项，则施用EZH2抑制剂，例如本文描述的本发明化合物。
[0048]在另外的实施方案中，测定存在或不存在Y641突变且所述Y641突变为Y641F、Y641S、Y641H、Y641N或Y641C。在其它另外的实施方案中，测定存在或不存在A677突变且所述A677突变为A677G。
[0049]在另外的实施方案中，测定癌细胞或肿瘤细胞总体甲基化水平的增加。在其它实施方案中，测定H3K27甲基化的水平。在其它实施方案中，测定H3K27meO、H3K27mel、H3K27me2和H3K27me3的水平且H3K27me3水平的增加表明采用EZH2抑制剂治疗。在此段本发明另外实施方案中，与对照比较甲基化水平且相对于对照的甲基化相对增加表明采用EZH2抑制剂治疗。
[0050]检测EZH2中Y641或A677处突变的方法是本领域技术人员所熟知的且描述在本文发明详述和实施例中。测定相对于对照增加的甲基化(例如H3K27me3)水平的方法，是现有技术中熟知的并显示在实施例中，且包括使用组蛋白3三甲基化赖氨酸27的特异性抗体。对照可为任意本领域技术人员将选择的，例如来自人的匹配细胞、来自人的匹配组织、与肿瘤相同来源但已知具有野生型EZH2的细胞，或者与相同来源的非癌细胞或具有野生型EZH2的细胞 中所见相关的设计对照。
[0051]在本发明其它实施方案中，该样品包括至少一种癌症细胞。在特定此类实施方案中，该样品是生物学样品。
[0052]在本发明任一实施方案中，该癌症是淋巴瘤。在本发明方法的另外实施方案中，该淋巴瘤选自由以下构成的组:生发中心B细胞(GCB)，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、脾脏边缘区淋巴瘤(Splenic marginal zone lymphoma) (SMZL)、华氏巨球蛋白血症淋巴衆细胞性淋巴瘤(Waldenstrom's macroglobulinemia lymphoplasmacytic lymphoma) (WM)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和粘膜相关淋巴组织(MALT)的结外边缘区B细胞淋巴瘤。
[0053]在本发明方法的实施方案中，该A677突变和/或该Y641突变是体细胞突变。
[0054]在癌症治疗方法的其它实施方案中，相比于未治疗的人，治疗包括增加的响应率和/或改善的无进展存活。
[0055]本发明提供了在人中治疗癌症的方法，其包括以下步骤:(a)从来自所述人的至少一种肿瘤细胞检测H3K27me3水平以及(b)如果所述至少一种肿瘤细胞具有高水平的H3K27me3，则向所述人施用药物组合物中的有效量的EZH2抑制剂或其药学上可接受的盐。
[0056]本发明还涉及在人中治疗癌症的方法，其包括以下步骤:(a)对来自受试者肿瘤的生物学样品进行基因分型技术以确定所述肿瘤是否具有EZH2酪氨酸641 (Y641)残基处的体细胞突变；以及(b)关联所述突变的检测与当施用EZH2抑制剂时增加的响应率和/或延长的无进展存活的增加的可能性。
[0057]本发明还涉及在人中治疗癌症的方法，其包括以下步骤:(a)对来自受试者肿瘤的生物学样品进行基因分型技术以确定所述肿瘤是否具有EZH2酪氨酸641 (Y641)残基处的体细胞突变；以及(b)如果所述肿瘤在酪氨酸641残基处具有EZH2突变，则向所述人施用有效量的EZH2抑制剂或其药学上可接受的盐。
[0058]本发明还涉及在人中治疗癌症的方法，其包括以下步骤:(a)对来自受试者肿瘤的生物学样品进行基因分型技术以确定所述肿瘤是否具有EZH2酪氨酸641 (Y641)残基处的体细胞突变；以及(b)如果所述肿瘤在酪氨酸641残基处具有EZH2突变，其中此EZH2突变为Y641N、Y641F、Y641S、Y641H或Y641C，则向所述人施用有效量的EZH2抑制剂或其药学上可接受的盐。
[0059]本发明还涉及在人中治疗癌症的方法，其包括以下步骤:(a)对来自受试者肿瘤的生物学样品进行基因分型技术以确定所述肿瘤是否具有EZH2A677残基处的体细胞突变；以及(b)关联所述突变的检测与当施用EZH2抑制剂时增加的响应率和/或延长的无进展存活的增加的可能性。
[0060]本发明还涉及在人中治疗癌症的方法，其包括以下步骤:(a)对来自受试者肿瘤的生物学样品进行基因分型技术以确定所述肿瘤是否具有EZH2A677残基处的体细胞突变；以及(b)如果所述肿瘤在A677残基处具有EZH2突变，则向所述人施用有效量的EZH2抑制剂或其药学上可接受的盐。
[0061]本发明还涉及在人中治疗癌症的方法，其包括以下步骤:(a)对来自受试者肿瘤的生物学样品进行基因分型技术以确定所述肿瘤是否具有EZH2A677残基处的体细胞突变；以及(b)如果所述肿瘤在A677残基处具有EZH2突变，其中此EZH2突变为A677G，则向所述人施用有效量的EZH2抑制剂或其药学上可接受的盐。
[0062]定义
[0063]如本领域所熟悉的，术语“野生型”指的是以无遗传修饰的天然种群中存在的多肽或多核苷酸序列。也如本领域所熟悉的，“变体”包括相比于野生型多肽或多核苷酸中的相应氨基酸或核酸，分别对氨基酸或核酸具有至少一处修饰的多肽或多核苷酸序列。术语变体包括单核苷酸多态性(SNP)，其中相比于最普遍的(野生型)核酸链，单碱基对差异存在于核酸链序列中。
[0064]如本文使用的“基因修饰”或“基因修饰的”或其语法变化指的是，但不限于，一项或多项碱基的任何抑制、替换、扩增、缺失和/或插入至一项或多项DNA序列中。而且，如本文使用的“遗传修饰的”可指编码多肽的基因或多肽分别具有至少一项核酸或氨基酸的缺失、替换或抑制。遗传变体和/或SNP可通过已知方法确认。例如，野生型或SNP可通过DNA扩增和测序技术、DNA和RNA检测技术(分别包括但不限于Nothern和Southern印迹法)，和/或各种生物芯片和阵列技术确认。WT和突变体多肽可通过多种技术(包括但不限于免疫诊断技术如ELISA和western印迹法)检测。如本文所使用的，检测等位基因或多态性的方法包括但不限于血清学和遗传学方法。所检测的等位基因或多态性可功能性地涉及影响个体的表型，或者所检测地等位基因或多态性可能是与功能性多态性/等位基因连锁不平衡的等位基因或多态性。如本领域技术人员所显而易见的，多态性/等位基因在受试者的基因组DNA中显示,但也从由该区转录或翻译的RNA、cDNA或蛋白质序列中检测到。
[0065]在遗传学中众所周知，从不同来源获得的同一基因的核苷酸和相关的氨基酸序列可以在编号方法和精确的序列上均有不同。这样的不同可能是由于编号方法、基因内固有的序列变异性，和/或测序错误。因此，本领域的技术人员应当理解，本文通过序号提及的特定多态性位点包括对应于该基因内的序列和位置的那些多态性位点，即使使用了不同的编号/命名法来描述它们。
[0066]如本文使用的，根据一项或多项基因的多态性等位基因或在至少一项多肽或编码至少一项多肽的基因中的突变将受试者(或DNA或其它样品)“基因分型”意味着检测受试者(或样品)中存在或不存在所述基因或基因表达产物(例如，hnRNA、mRNA或蛋白质)的突变的、等位的或多态性形式。从这类基因表达的相关的RNA或蛋白质也可用于检测突变体或多态性变异。如本领域所公知的，对于特定的等位基因，个体可能是杂合的或纯合的。可存在超过两种等位基因的形式，因此可以有超过3种可能的基因型。如本文使用的，一种等位基因可被检测到，当其它可能的等位基因变体被排除时；例如，当发现一项特定的核酸位置既不是腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)，也不是胞嘧啶(C)时，可以推断在该位置存在鸟嘌呤(G)(即，在受试者中，G被“检测到”或“诊断到”)。序列变异可被直接(通过，例如测序)或间接(例如，通过限制性片段长度多态性分析，或已知序列探针的杂交检测，或参照链构象多态性)，或通过其它已知的方法检测。
[0067]如本文使用的，种群的“遗传亚类”由具有特定基因型或至少一项体细胞突变的肿瘤的种群的成员组成。在二等位基因多态性的情况中，种群可能被分成三个亚类:等位基因I的纯合子(1，I)、杂合子(1，2)，和等位基因2的纯合子(2，2)。可使用多种标准定义受试者的“种群”。
[0068]如本文使用的，基于基因分型，“易感于”或“有升高的风险”的特定表型响应的有癌症治疗需求的人比在靶多态性位点处具有不同基因型的个体将更可能显示该表型。如果所述表型响应基于多等位基因多态性或基于超过一种基因分型，则在多种可能的基因型间相对风险可能不 同。
[0069]有癌症治疗需求的人可替代地具有伴随体细胞突变的肿瘤或癌细胞，并且可以进行基因分型或其它突变检测。
[0070] 如本文使用的，对治疗的“响应”及其语法变化，包括但不限于患者在接受药物后患者的临床状况改善。响应也可意味着患者的状况在治疗起始的基础上未恶化。响应可通过测量疾病或病症的某些临床表现来定义。对于癌症，响应可意味着，但不限于，患者中肿瘤和/或肿瘤细胞的尺寸或数目减小。响应也可通过其它终点如患者中前肿瘤(pre-tumorous)细胞的数目减少或减轻来定义。
[0071]如本文使用的“遗传测试”(也称为遗传筛选)指的是测试从受试者获得的生物学样品以测定所述受试者的基因型；并且可用于测定所述受试者的基因型是否包括引起或增加对特定表型敏感性的(或与引起或增加对该表型敏感性的一种或多种等位基因连锁不平衡的)等位基因。
[0072]用于测试一项或多项突变的样品(例如生物学样品)可选自蛋白质、核苷酸、细胞囊泡或细胞组分、血清、细胞、血液、血液组分、尿液和唾液。测试突变可通过本领域已知的和/或本文所述的若干种技术进行。
[0073]任何核酸包括基因或PCR产物或其片段或部分的序列可通过本领域已知的任何方法(例如化学测序或酶法测序)测序。DNA的“化学测序”指的是如Maxam和Gilbert (1977) (Proc.Natl.Acad.Sc1.USA74:560)中所述的方法，其中 DNA 通过各自的碱基特异性反应随机裂解。DNA的“酶法测序”指的是如Sanger (Sanger等，(1977) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA74:5463)中所述的方法。
[0074]常规分子生物学、微生物学和重组DNA技术包括测序技术是本领域的技术人员所公知的。这类技术在文献中有完全地说明。参见，例如Sambrook, Fritsch&Maniatis, Molecular Cloning:A Laboratory Manual, Second Edition(1989)Cold SpringHarbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(herein〃Sambrook 等,1989〃)；DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and 11 (D.N.Glover ed.1985)；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait 编 1984) ；Nucleic Acid Hybridization (B.D.Hames&S.J.Higgins eds.(1985)) !Transcription And Translation(B.D.Hames&S.J.Higgins,编(1984)) ；Animal Cell Culture(R.1.Freshney, ed.(1986)) ；ImmobilizedCells And Enzymes(IRL Press, (1986)) ；B.Perbal, A Practical Guide To MolecularCloning (1984) ;F.M.Ausubel 等(编)，Current Protocols in Molecular Biology, Johnffiley&Sons, Inc.(1994)。
[0075]肽核酸(PM)亲和性分析是传统杂交分析的衍生方法(Nielsen等,Science254:1497-1500(1991) ；Egholm 等,J.Am.Chem.Soc.114:1895-1897(1992)；James等，Protein Science3:1347-1350 (1994))。PNA是遵循沃森-克里克碱基配对原理的结构DNA模拟物，并用于标准DNA杂交分析。PNA在杂交分析中显示较高的特异性，因为PNA/DNA错配比DNA/DNA错配更不稳定而且互补性PNA/DNA链比互补性DNA/DNA链形成更强的键。
[0076]已研发出DNA微阵列以检测遗传变型和多态性(Taton等，Science289:1757-60，2000 ;Lockhart 等，Nature405:827-836 (2000)；Gerhold 等，，Trends in Biochemical Sciences24:168-73 (1999) ；ffallace, R.ff., Molecular Medicine Today3:384-89 (1997) ；Blanchard and Hood, NatureBiotechnologyl49:1649 (1996)。DNA微阵列由高速机器人在玻璃或尼龙基质上制造的，并且含有已知身份的DNA片段(“探针”)。所述微阵列用于基于传统的碱基配对原理匹配已知和未知DNA片段(“靶”)。
[0077]术语“多肽”和“蛋白质”可互换使用，且本文中用作以下物质的总称:天然蛋白质、片段、肽，或多肽序列的类似物。因此，天然蛋白质、片段和类似物为多肽属的不同种类。
[0078]术语“X#Y”在突变背景中在多肽序列中是本领域公认的，其中“#，，表示突变在所述多肽的氨基酸编号中的位置，“X”表示在野生型氨基酸序列中在该位置发现的氨基酸，而“Y”表示该位置的突变氨基酸。例如关于K-ras多肽的符号“G12S”表示在野生型K_ras序列的氨基酸编号12位处存在甘氨酸，而且在突变K-ras序列中该甘氨酸被丝氨酸替换。
[0079]在多肽或编码多肽的基因及其语法变型中，“突变”意指多肽或编码多肽的基因具有一个或多个等位基因变型、剪接变型、衍生变型、替换变型、缺失变型，和/或插入变型、融合多肽、直系同源基因(orthologs),和/或种间同系物。举例而言，EZH2的至少一个突变将包括对于在所述细胞中产生的至少一种EZH2蛋白，其中多肽或编码所述多肽的基因的部分全部序列在细胞中不存在或不表达的EZH2。例如，EZH2蛋白可由细胞以截短形式(truncated form)产生,而且所述截短形式的序列在截短物的序列中可能是野生型的。缺失可意味着不存在全部或部分基因或由基因编码的蛋白。EZH2突变还意味着在多核苷酸单一碱基处的突变或一单独的氨基酸取代。此外，在细胞中表达的或由细胞编码的一些蛋白质可能是突变的，例如在一单独氨基酸处，而相同细胞中产生的相同蛋白质的其它拷贝可能是野生型的。
[0080]可通过本领域熟知的多种方法在多核苷酸或翻译蛋白中检测突变。这方法包括但不限于测序、RT-PCR和原位杂交，例如基于荧光的原位杂交(FISH)、抗体检测、蛋白降解测序等。表观遗传变化，例如甲基化态也可导致突变和/或来自编码其的对应多核苷酸的部分或全部蛋白的缺乏表达。
[0081]如本文使用的“遗传异常”是指相对于受试者细胞的正常天然核酸含量的缺失、替换、添加、易位、扩增等。如本文使用的“编码EZH2蛋白基因”是指编码任何EZH2蛋白的基因或多核苷酸的任意部分。此术语含义内包括编码EZH2的外显子。编码EZH2蛋白的基因包括但不限于编码部分或全部EZH2的基因。
[0082]本文中提及的术语“多核苷酸”意指具有至少10个碱基长度的核苷酸(核糖核苷酸或脱氧核苷酸或两种核苷酸中任一类型核苷酸的修饰形式)的多聚形式。该术语包括单链和双链形式的DNA。
[0083]本文中提及的“寡核苷酸”包括天然存在和修饰的核苷酸，其通过天然存在的和非天然存在的寡核苷酸键连接在一起。寡核苷酸是一种多核苷酸亚类，其通常包括200个碱基或更少的长度。优选地，寡核苷酸为10至60碱基长度并且最优选12、13、14、15、16、17、
18、19或20至40碱基长度。寡核苷酸通常为单链的，例如对于探针，尽管寡核苷酸可以是双链的，例如用于构建基因突变体。寡核苷酸可以是正义或反义寡核苷酸。
[0084]寡核苷酸探针，或探针，是一种核酸分子，其尺寸范围通常为约8个核苷酸至数百个核苷酸长度。这类分子通常用于通过在严格杂交条件下与这类靶核酸序列杂交确认样品中的该靶核酸序列。杂交条件如上所详述。
[0085] PCR引物也为核酸序列，尽管PCR引物通常为非常短长度的寡核苷酸，其用于聚合酶链反应。本领域的技术人员可使用从靶序列得到的序列信息研发和生产PCR引物和杂交探针。(参见，例如Sambrook等,上述,或Glick等,上述)。
[0086]如本文使用的“过度表达”和“过表达”及其语法变型意指相对于正常细胞，给定细胞产生某些蛋白质的数量增加。例如，已知一些肿瘤细胞相较于来自正常乳腺组织的细胞在细胞表面过表达Her2或Erb2。基因转移实验已显示HER2的过表达将转化NIH3T3细胞并还可导致对于有毒巨噬细胞细胞因子肿瘤坏死因子抗性的增加。Hudziak等,"AmplifiedExpression of the HER2/ERBB20ncogene Induces Resistance to Tumor NecrosisFactor Alpha in NIH3T3Cells"，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85，5102-5106 (1988)。在特定细胞中多肽的表达水平可被但不限于细胞基因组中各种调控元件和/或非编码序列的突变、缺失和/或替换影响。
[0087]如本文使用的，“治疗”意指有益的改变与病症相关的一种或多种症状的任何方式。因此，该术语包括治愈或改善所述病症的症状或副作用或降低所述病症的进展速率。
[0088]如本文使用的，术语“癌症(cancer) ”、“赘生物(neoplasm) ”和“肿瘤(tumor) ”可互换使用并且以单数或复数形式使用，指的是细胞经历恶变使得它们对于宿主生物体是病理性的。原发癌细胞(即，细胞自恶变位点附近获得)可通过确立的技术(尤其是组织检查)和非癌性细胞容易地区分。如本文使用的，癌细胞的定义不仅包括原发癌细胞，也包括自癌祖细胞衍生的任何细胞。该细胞包括转移癌细胞，和衍生自癌细胞的体外培养物和细胞系。当提及一类正常显示为实体瘤的癌症时，“临床上可检测的”肿瘤是基于肿瘤实体可检测的，例如，通过如CAT扫描、MR成像、X射线、超声或触诊的方法和/或由于自患者获得的样品中一种或多种癌症特异性抗原的表达而可检测的一类肿瘤。肿瘤可以是造血系统肿瘤，例如血液细胞肿瘤等。基于这类肿瘤的临床病状的具体实例包括白血病如慢性髓细胞白血病或急性髓细胞白血病；骨髓瘤如多发性骨髓瘤；淋巴瘤等。
[0089]癌症可为其中存在异常数量的母细胞或被诊断为血癌或发育不良的任意癌症，血癌或发育不良例如白血病、髓系恶性肿瘤或骨髓发育不良，包括但不限于，未分化急性骨髓性白血病、原始粒细胞性白血病、原始粒细胞性白血病、前髓细胞性白血病、粒单核细胞性白血病、单核细胞性白血病、红白血病(erythroleukemia)和巨核母细胞白血病。在一方面，癌症是髓系恶性癌症。在另一方面，癌症是白血病。该白血病可为急性淋巴细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓性(或髓细胞)白血病(CML)和慢性骨髓单核细胞性白血病(CMML)。在一个实施方案中，所述人具有特发性髓样化生Oagnogenic myeloid metaplasia)和/或高风险骨髓增生异常(poor-risk myelodysplasia) (MDS)。在一些方面该癌症是复发的或难治的。
[0090]血癌还包括淋巴恶性，其可影响淋巴结、脾脏、骨髓、外周血液、和/或结外位点。淋巴癌 包括B细胞恶性肿瘤，其包括但不限于B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)。B-NHL可为惰性的(或低级)、中级(或侵袭性)或高级(十分侵袭性)的。惰性B细胞淋巴瘤包括滤泡性淋巴瘤(FL);小淋巴细胞淋巴瘤(SLL);边缘区淋巴瘤(MZL)包括结节MZL，结外MZL,脾MZL和具有绒毛淋巴细胞的脾MZL ;淋巴浆细胞淋巴瘤(LPL)；以及粘膜相关淋巴组织(MALT或结外边缘区)淋巴瘤。中级B-NHL包括涉及或不涉及白血病的套细胞淋巴瘤(MCL)、弥漫大细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡大细胞(或者3级或3B级)淋巴瘤和原发性纵隔淋巴瘤(PML)。高级B-NHL包括伯基特淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma) (BL)、伯基特样淋巴瘤、小无裂细胞淋巴瘤(SNCCL)和成淋巴细胞淋巴瘤。其它B-NHL包括成免疫细胞淋巴瘤(或免疫细胞瘤)，原发性渗出性淋巴瘤(primary effusion lymphoma)、HIV关联(或AIDS相关)淋巴瘤和移植后淋巴增殖性疾病(PTLD)或淋巴瘤。B细胞恶性肿瘤还包括但不限于慢性淋巴细胞白血病(CLL)、前淋巴细胞白血病(PLL)、华氏巨球蛋白血症(WM)、毛细胞白血病(HCL)、大颗粒淋巴细胞(LGL)白血病、急性淋巴(或淋巴细胞或成淋巴细胞)白血病和Castleman病。NHL还可包括T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)，其包括但不限于未另说明(NOS)的T细胞非霍奇金淋巴瘤、外周T细胞淋巴瘤(PTCL)、间变性大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma) (ALCL)、血管免疫母细胞性淋巴病症(AILD)、鼻自然杀伤(NK)细胞/T细胞淋巴瘤、Y/δ淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿病(mycosisfungoides)和塞扎里综合征(Sezary syndrome)。
[0091]血癌还包括霍奇金淋巴瘤(或疾病)，包括经典霍奇金淋巴瘤、结节硬化型霍奇金淋巴瘤、混和细胞性霍奇金淋巴瘤、淋巴细胞优势型(LP)霍奇金淋巴瘤、结节性LP霍奇金淋巴瘤、以及淋巴细胞耗尽的(cbpleted)霍奇金淋巴瘤。血癌还包括浆细胞疾病或癌症如多发性骨髓瘤(MM)，包括郁积性(smoldering)MM、意义未明(或未知或不清楚)的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、浆细胞瘤(骨，髓外)、淋巴浆细胞淋巴瘤(LPL)、华氏巨球蛋白血症、浆细胞白血病和原发性淀粉样变(AL)。血癌还可包括其他造血细胞的其它癌症，所述细胞包括多形核白血球(或嗜中性球)、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、树突细胞、血小板、红细胞和自然杀伤细胞。包括造血细胞的组织在此称作〃造血细胞组织〃包括骨髓；外周血液；胸腺；和外周淋巴组织，例如脾脏、淋巴结、粘膜相关淋巴组织(例如与内脏相关性淋巴组织)、扁桃体、派伊尔结(Peyer’s patch)和阑尾和与其它粘膜例如支气管衬里相关的淋巴组织。
[0092]在一些实施方案中，样品选自由以下构成的组:癌细胞、肿瘤细胞、细胞、血液、血液组分、尿液和唾液。
[0093]本发明化合物
[0094]在有此需要的人中治疗癌症的方法的特定实施方案中，EZH2抑制剂为式1:
[0095]
【权利要求】
1.在有此需要的人中治疗癌症的方法，其包括在来自所述人的样品中测定以下至少一项: a.在来自所述人的样品的EZH2中丙氨酸677(A677)残基处存在或不存在突变；或 b.在EZH2中酪氨酸641(Y641)残基处存在或不存在突变；或 c.相比于对照存在或不存在增加的H3K27me3水平， 并且如果在所述样品中存在至少一项所述A677突变、Y641突变或增加的H3K27me3水平，则向所述人施用有效量的EZH2抑制剂或其药学上可接受的盐。
2.权利要求1的方法，其中该EZH2抑制剂是式(I)化合物、或其药学上可接受的盐:
3.权利要求1或2的方法，其中该EZH2抑制剂是其中W为CR2的式⑴化合物。
4.权利要求1至3任一项的方法，其中该EZH2抑制剂是化合物B:
5.权利要求1至4任一项的方法，其中测定a、b和c中至少两项。
6.权利要求1至5任一项的方法,其中测定a、b和C。
7.权利要求1至6任一项的方法，其中测定存在或不存在Y641突变且所述Y641突变为 Y641F、Y641S、Y641H、Y641N 或 Y641C。
8.权利要求1至7任一项的方法，其中测定存在或不存在A677突变且所述A677突变为 A677G。
9.权利要求1至8任一项的方法，其中所述样品包含至少一种癌症细胞。
10.权利要求1至9任一项的方法，其中所述癌症是淋巴瘤。
11.权利要求1至10任一项的方法，其中所述淋巴瘤选自由以下构成的组:生发中心B细胞(GCB)，弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、脾脏边缘区淋巴瘤(SMZL)、华氏巨球蛋白血症淋巴浆细胞性淋巴瘤(WM)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和粘膜相关淋巴组织(MALT)的结外边缘区B细胞淋巴瘤。
12.权利要求1至11任一项的方法，其中所述A677突变和/或所述Y641突变为体细胞突变。
13.权利要求1至12任一项的方法，其中当采用EZH2抑制剂治疗时具有a)在EZH2中存在A766突变；b)在EZH2中存在Y641突变和/或相比于对照增加的H3K27me3水平中至少一项的人相比于不具有a，b或c的人具有增加的响应率和/或改善的无进展存活。
14.权利要求1至13任一项的方法，进一步包括施用一种或多种另外的抗肿瘤药物。
15.用于癌症治疗的试剂盒，其包含用于测定权利要求1中a、b或c中一项或多项的试剂盒以及用于测定权利要求1中a、b或c中一项或多项的工具。
16.权利要求15的试剂盒，其中所述工具选自下组:引物、探针和抗体。
17.编码作为生物标志物的A677突变的EZH2核酸或多肽序列用于治疗。
18.权利要求17的EZH2序列，其中所述A677突变为A677G。
19.在有此需要的人中治疗癌症的方法，包括在来自所述人的样品中测定权利要求1中a、b或c中一项或多项，并将所述样品中一项或多项所述突变的存在和/或相比于对照增加的H3K27me3水平与在有癌症治疗需要的所述人中相比于不具有所述突变以及不具有相比于对照增加的H3K27me3水平的人中响应率和/或改善的无进展存活的增加的可能性关联。
【文档编号】A01N43/16GK103987842SQ201280059070
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2012年9月30日 优先权日:2011年9月30日
【发明者】C.L.克里西, G.甘吉, M.T.麦卡比, K.N.史密斯曼 申请人:葛兰素史密斯克莱有限责任公司