专利名称：一种快速提高长春花生物碱产量的采收前处理方法
技术领域：
本发明涉及一种长春花采收前处理方法，尤其是涉及一种快速提高长春花生物碱产量的采收前处理方法。
背景技术：
长春花(Catharanthus roseus L.)属夹竹桃科一年生草本植物,可产生100多种具有很高药用价值的抗癌職类卩引哚生物碱(Terpenoid Indole Alkaloids, TIAs)。如长春喊(Vinblastine)、长春新喊(Vincristine)、阿吗喊(Ajmalicine)、利血平(Reserpine)、文多灵(Vindoline)、长春质碱(Catharanthine)等。长春碱临床上主要用于治疗何杰金氏病及绒毛膜癌，对乳腺癌的治疗效果也非常好。因此，长春花被认为是一种具有很高开发应用价值的药用植物。然而，由于这 些药物在长春花中的含量极其微少(仅为百万分之几至十万分之几)，所以从天然植物中提取TIAs远远不能满足市场需求，导致长春花药用成分的供需矛盾相当严重(每年只能生产12 kg长春碱和I kg长春新碱)，使其价格极为昂贵(高达6000美元/克)，而用化学合成和半合成因成本太高而不具有商业价值。长春花生物碱主要从天然植物中提取得到，长春花全株均含有生物碱。目前已有报道采用施肥技术提高长春花生物碱产量的报道，但对长春花成熟植株采收前处理措施研究较少。因此，如何提高栽培长春花生物碱含量，特别是在采收前短时间内快速提高长春花生物碱产量，整合出一条长春花生物碱产量的栽培和处理措施，对长春花碱的规模化工厂化生产具有重要意义。目前，国内外还没有关于快速提高长春花生物碱产量的采收前处理方法的相关研究报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种提高长春花生物碱产量的采收前处理方法，该方法对提高长春花栽培植株的生物碱产量效果显著，操作简单方便，费用低，生产周期短，适于批量处理和工厂化生产。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:一种快速提高长春花生物碱产量的采收前处理方法，对长春花栽培植株整株进行诱导剂喷施处理，一定时间后进行采收即可。所述的诱导剂为100 umol/L的茉莉酸甲酯，对长春花栽培植株用100 umol/L茉莉酸甲酯进行喷施处理，30天后采收长春花整株得到高生物碱含量的长春花。所述的诱导剂为10mg/L花生四烯酸，对长春花栽培植株用10mg/L花生四烯酸进行喷施处理，10天后采收长春花整株得到高生物碱含量的长春花。所述的诱导剂为10mg/L磺基水杨酸,对长春花栽培植株用10mg/L磺基水杨酸进行喷施处理，10天后采收长春花整株得到高生物碱含量的长春花。与现有技术相比，本发明的优点在于:发明首次公开了一种提高长春花生物碱产量的采收前处理方法，该方法对提高长春花栽培植株的生物碱产量效果显著，操作简单方便，费用低，生产周期短，适于批量处理和工厂化生产，以降低生物碱生产成本，提高企业经济效益，满足人类防病治病的需要，具有很好的经济效益和社会效益。
图1为实施例1采前喷施100 umol/L茉莉酸甲酯的长春花中文多灵、长春质碱和长春碱的含量检测结果 图2为实施例2采前喷施10mg/L花生四烯酸的长春花中文多灵、长春质碱和长春碱的含量检测结果 图3为实施例3采前喷施10mg/L磺基水杨酸的长春花中文多灵、长春质碱和长春碱的含量检测结果图。
具体实施例方式以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。一、实验方法
收集经不同诱导处理的栽培长春花植株的地上部分，称取鲜重，60°C，48 h烘干至恒重，称其干重。将烘干的长春花材料放入研钵中，加入少量石英砂，研磨，加入95 %乙醇适量(1:5, W/V)，50°C超声波提取30 min，冷却至室温，对提取液12，000 rpm离心10 min，吸取上清，12，000 rpm再离心10 min，吸取上清，用于HPLC法测定长春花中文多灵、长春质碱和长春碱的含量。分别精密称取文多灵、长春质 碱和长春碱标准品(Sigma公司，99.9% )10.0 mg,用I mL甲醇完全溶解,分别得到10 mg/mL文多灵、10 mg/mL长春质碱和10 mg/mL长春碱对照品溶液，作为标准品贮备液，_20°C保存备用。色谱柱:C_18反相娃胶柱(SymmetryShield C18, 5mm, 250 4.6 mm,Waters)。流动相为水:二乙胺(986: 14)，用磷酸调节pH = 7.2(溶液A)，甲醇:乙腈=4:1(溶液B)，380 mL A和620 mL B混合作为流动相，经真空泵抽滤脱气。检测波长220 nm，柱温30°C，流速1.0 mL/min,进样量10 uL，灵敏度(AUFS=L O)，理论塔板数按文多灵、长春质碱和长春碱峰计算不低于2000。分别精密吸取对照品溶液和供试样品溶液各10 μ L，注入高效液相色谱仪，记录各组分峰面积，代入线性回归方程，计算即得样品文多灵、长春质碱和长春碱含量。二、具体实施例
本发明对长春花栽培植株整株进行不同诱导剂喷施处理，一定时间后进行采收得到生物碱含量提高的长春花。实施例1
对长春花栽培植株用100 umol/L茉莉酸甲酯进行喷施处理，30天后采收长春花整株作为提取长春花生物碱的原料。提取长春花植株生物碱，采用HPLC法测定长春花生物碱含量。检测结果实验组中长春碱、长春质碱和文多灵产量均比对照显著提高。长春碱产量是对照组的1.24倍，长春质碱产量是对照的1.66倍，文多灵产量是对照的2.61倍。茉莉酸甲酯对长春花植株生物碱产量的影响，具体如表图1所示。实施例2
对长春花栽培植株用10mg/L花生四烯酸进行喷施处理，10天后采收长春花整株作为提取长春花生物碱的原料。提取长春花植株生物碱，采用HPLC法测定长春花生物碱含量。检测结果实验组中长春碱、长春质碱和文多灵产量均比对照显著提高。长春碱产量是对照组的2.58倍，长春质碱产量是对照的1.68倍，文多灵产量是对照的1.88倍。花生四烯酸对长春花植株生物碱产量的影响，具体如表图2所示。实施例3
对长春花栽培植株用10mg/L磺基水杨酸进行喷施处理，10天后采收长春花整株作为提取长春花生物碱的原料。提取长春花植株生物碱，采用HPLC法测定长春花生物碱含量。检测结果实验组中长春碱、长春质碱和文多灵产量均比对照显著提高。长春碱产量是对照组的3.96倍，长春质碱产量是对照的1.54倍，文多灵产量是对照的1.95倍。磺基水杨酸对长春花植株生物碱产量的影响，具体如表图3所示。三、对比试验
选取生长健壮的长春花植株，设置四种处理，第一种为在采收前不施用诱导子诱导的普通长春花植株对照。第二种为在采收前用100 umol/L茉莉酸甲酯喷施植株。第三种为在采收前喷施10mg/L花生四烯酸。第四种为在采收前喷施10mg/L磺基水杨酸。对处理和未处理的长春花分别于处理0d、10d、20d、30d时取样称量鲜重，提取生物碱并采用HPLC法测定整株生物碱含量，结果如表I所示， 表I经处理的长春花中各生物碱含量
权利要求
1.一种快速提高长春花生物碱产量的采收前处理方法，其特征在于:对长春花栽培植株整株进行诱导剂喷施处理，一定时间后进行采收即可。
2.根据权利要求1所述的一种快速提高长春花生物碱产量的采收前处理方法，其特征在于:所述的诱导剂为100 umol/L的茉莉酸甲酯，对长春花栽培植株用100 umol/L茉莉酸甲酯进行喷施处理，30天后采收长春花整株得到高生物碱含量的长春花。
3.根据权利要求1所述的一种快速提高长春花生物碱产量的采收前处理方法，其特征在于:所述的诱导剂为10mg/L花生四烯酸，对长春花栽培植株用10mg/L花生四烯酸进行喷施处理，10天后采收长春花整株得到高生物碱含量的长春花。
4.根据权利要求1所述的一种快速提高长春花生物碱产量的采收前处理方法，其特征在于:所述的诱导剂为10mg/L磺基水杨酸,对长春花栽培植株用10mg/L磺基水杨酸进行喷施处理，10天后 采收长春花整株得到高生物碱含量的长春花。
全文摘要
本发明公开了一种提高长春花生物碱产量的采收前处理方法，特点是对长春花栽培植株整株进行诱导剂喷施处理，一定时间后进行采收即可，其中对长春花栽培植株用100umol/L茉莉酸甲酯进行喷施处理，30天后采收长春花整株即得到高生物碱含量的长春花；或者对长春花栽培植株用10mg/L花生四烯酸进行喷施处理，10天后采收长春花整株得到高生物碱含量的长春花；或者对长春花栽培植株用10mg/L磺基水杨酸进行喷施处理，10天后采收长春花整株得到高生物碱含量的长春花，优点是对提高长春花栽培植株的生物碱产量效果显著，操作简单方便，费用低，生产周期短，适于批量处理和工厂化生产。
文档编号A01N41/04GK103081736SQ201310009668
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月10日 优先权日2013年1月10日
发明者龚一富, 袁泉, 卢鹏, 王何瑜, 章丽, 刘晓丹, 李君 申请人:宁波大学