专利名称：一种从长春花鲜草中提取脱水长春碱、环氧长春碱的方法
技术领域：
本发明涉及一种从长春花提取中药药效成分的技术，特别是涉及一种从长春花鲜中提取生物碱的方法，从长春花中提取的药用有效成分包括脱水长春碱，环氧长春碱，长春碱等，属天然药物技术领域。
背景技术：
长春花为夹竹桃科长春花属中一种重要的药用植物，迄今已经分离出70余种生物碱，其中含有长春新碱(Vincristine)长春碱(Vinblastine)长春酰胺(Vindestine)文多灵(Vindoline)等多种具有要药用价值的成分。长春碱用于治疗各种实体瘤，长春新碱主要应用于对儿童急性白血病的治疗。上世纪70年代Eli Lilly公司通过修饰长春碱的文多灵部分，研究开发了用于治疗黑色素瘤、原淋巴细胞白血和晚期的飞小细胞肺癌的长春地辛药物(Vindestine)。法国的皮尔法伯特公司在1989年通过改造长春碱的维尔朋胺部分，在法国上市了治疗非小细胞肺癌和晚期乳腺癌的长春瑞滨(Vinrelbine)。效果更好的长春氟宁(Vinf limine)正在临床研究中。生物碱类在中草药中含量较低，有的只有千分，万分之一，甚至百万分之一，要获得有效成分，提取技术是关键。传统提取存在许多问题，纯化时间较长，有毒溶剂用量大，得率较低，能耗较大等缺点。现阶段，对生物碱的提取根据其理化特性，可用酸，水，碱醇等，浸泡、煎煮、回流、超声技术对生物碱累分离提取，工艺较完善，得率可达90%以上。但常会带入大量杂质成分，如淀粉，果胶，树胶，色素，粘液质等，给生物碱提纯造成较大麻烦。目前还常采用大空树脂提取《中草药中生物的提取分离》，蔡艳化，四川化工，2005. (1) 39)。目前广泛运用的还有有机溶剂提取法，长春花生物碱常用有机溶剂提取，将生物碱酸碱化后，用到大量氯仿，苯、四氯化碳等溶剂萃取，常带入大量的杂质，并常在萃取中形成严重的乳化，大大的影响了提取充分性，且毒性较大，安全性低，不适合大量生产。
发明内容
本发明的目的解决现有技术的缺陷，公开一种从长春花鲜草中提取脱水长春碱、 环氧长春碱碱的方法，制得率高，污染小，安全高，成本低。本发明是这样实现的一种从长春花鲜草中提取脱水长春碱、环氧长春碱的方法， 其特征在于包括以下步骤
1、将新鲜长春花，切割打浆，用硫酸液浸泡2次，时间为每次4 8小时，调pH值至1 6，用筛子过滤，以4倍床体积/小时通过大孔型强酸型阳离子交换树脂柱，柱径比为7:1 8:1，清水去杂质，洗脱至无色后用4%氯化钠3%的乙醇液浸泡4小时。2、用盐液浸泡，再用含醇2% 35%的1% 4%浓度氢氧化钠溶液洗脱，TLC检测洗脱液，收集，浓缩，蒸干后通过硅胶柱层析分离得到生物碱，所获得生物碱的重量百分比为长春碱2. 8^4. 1%、文多灵8. 5^9. 5%、长春新碱0. 2^0. 3%、环氧长春碱1. 3^2. 0%、长春质碱8. Γ 9.1%和脱水长春碱1.3 2.0%，其余为阿玛碱、异长春碱等一些不具药用价值的生物碱。所述树脂柱为D61型或HD-8型树脂。所述步骤(2)中的盐液为4% 6%钠盐液或铵盐液；洗脱液为含醇20% 30%的1% 4%浓度氢氧化钠溶液。所述的TLC检测方法采用薄层色谱紫外检测，30:1氯仿甲醇为展开剂。传统工艺通常需要将鲜草将鲜草阴干，然后粉碎时间较长并影响了一些药用生物碱的含量。本发明通过将新鲜长春花草切割后，用0.59Tl%的硫酸浸泡。经超滤浸泡液，溶液直接上强酸型离子交换树脂。用清水去杂，用碱醇洗脱，TLC检测至无生物碱为止。浓缩收集，萃取蒸干既得长春总碱。本发明优点在于，使用新鲜的长春花鲜草，直接浸泡提取后， 通过过滤，经离子交换树脂的分离得到长春花种的药用有效成分，脱水长春碱，长春新碱， 环氧长春碱等。本发明方法优选方案为
1、选用新鲜的长春花草，直接切割，选取0.5%的硫酸水液浸泡；
2、离子交换树脂优选大孔型的阳离子交换树脂，可根据使用情况选择氢型，钠型，铵型，弱酸阳离子最好选择钠型；
3、上柱溶液ρΗ范围2至5皆可；
4、柱径高优选范围在6:1…10:1；
5、树脂可上样量约1公斤树脂可吸附50公斤鲜草浸泡液；
6、D61型树脂；
7、用3%氢氧化铵30%的乙醇洗脱。本发明的有益效果是本发明生产工艺简单，易大规模工业生产，污染小，成本低。
具体实施例方式本发明一种从长春花鲜草中提取脱水长春碱、环氧长春碱的方法，包括以下步骤
1、将新鲜长春花，切割打浆，用硫酸液浸泡2次，时间为每次4 8小时，调PH值至1 6，用筛子过滤，以4倍床体积/小时通过大孔型强酸型阳离子交换树脂柱，柱径比为7:1 8:1，清水去杂质，洗脱至无色后用4%氯化钠3%的乙醇液浸泡4小时。2、用盐液浸泡，再用含醇2% 35%的1% 4%浓度氢氧化钠溶液洗脱，TLC检测洗脱液，收集，浓缩，蒸干后通过硅胶柱层析分离得到生物碱，获得的生物碱的重量百分比为长春碱2. 8^4. 1%、文多灵8. 5^9. 5%、长春新碱0. 2^0. 3%、环氧长春碱1. 3^2. 0%、长春质碱 8. Γ 9.1%和脱水长春碱1.3 2.0%，其余为阿玛碱、异长春碱等一些不具药用价值的生物碱。树脂柱为D61型或HD-8型树脂；盐液为4% 6%钠盐液或铵盐液；洗脱液为含醇20% 30%的1% 4%浓度氢氧化钠溶液。实施例1
取新鲜长春花草100公斤，打浆粉碎后，用0. 5%硫酸液浸泡提取两次，每次浸泡4小时。合并用浸泡液，将浸泡液调PH值到2，以4倍床体积/小时通过阳离子交换树脂HD-8， 弱酸大孔型，柱径比8:1，清水洗脱至无色。再用4%氯化铵3%的乙醇液浸泡4小时。用2% 氢氧化钠5%的乙醇洗脱，用TLC检测至生物碱出现，开始收集。合并浓缩处处理，萃取碱化液蒸干经硅胶层析分离，得生物碱40克，其中含长春碱1. 14克、长春新碱0. 08克、脱水长春碱0. 65克、环氧长春碱0. 63克、长春质碱3. 24克、文多灵3. 20克。实施例2:
取新鲜长春花草100公斤，打浆粉碎后，用0. 5%硫酸液浸泡提取两次。每次浸泡4小时。合并用浸泡液，将浸泡液调PH值到3。以4倍床体积/小时通过阳离子交换树脂D61， 钠型，柱径比8:1，清水洗脱至无色。再用4%氯化钠2%的乙醇液浸泡4小时。用3%氢氧化钠10%的乙醇洗脱，用TLC检测至生物碱出现，开始收集。合并浓缩处处理，萃取碱化液蒸干经硅胶层析分离，得生物碱40克，其中长春碱1. 15克、长春新碱0. 08克、脱水长春碱 0. 68克、环氧长春碱0. 68克、长春质碱3. 47克、文多灵3. 71克。实施例3:
取新鲜长春花草100公斤，打浆粉碎后，用0. 5%硫酸液浸泡提取两次。每次浸泡6小时。合并用浸泡液，将浸泡液调PH值到4。以4倍床体积/小时通过阳离子交换树脂D61 ，氢型，柱径比7:1，清水洗脱至无色。再用6%氯化胺2%的乙醇浸泡4小时。用3%氢氧化铵22%乙醇洗脱，用TLC检测至生物碱出现，开始收集。合并浓缩处处理，萃取碱化液蒸干经硅胶层析分离，得生物碱40克，其中含长春碱1. 53克、长春新碱0. 09克、脱水长春碱0. 78 克、环氧长春碱0. 75克、长春质碱3. 48克、文多灵3. 72克。实施例4:
取新鲜长春花草100公斤，打浆粉碎后，用0. 9%硫酸液浸泡提取两次。每次浸泡8小时。合并用浸泡液，将浸泡液调PH值到6，以4倍床体积/小时通过阳离子交换树脂D61， 柱径比7:1，清水洗脱至无色。再用6%氯化钠浸泡2%的乙醇浸泡4小时。用3%氢氧化钠 25%的乙醇洗脱，用TLC检测至生物碱出现，开始收集。合并浓缩处处理，萃取碱化液蒸干经硅胶层析分离，得生物碱40克，其中含长春碱1. 55克、长春新碱0. 12克、脱水长春碱0. 76 克、环氧长春碱0. 78克、长春质碱3. 48克、文多灵3. 87克。实施例5:
取新鲜长春花草100公斤，打浆粉碎后，用0. 7%硫酸液浸泡提取两次。每次浸泡8小时。合并用浸泡液，将浸泡液调PH值到5，以4倍床体积/小时通过阳离子交换树脂D61，柱径比8:1，清水洗脱至无色。再用4%氯化胺2%的乙醇浸泡4小时。用3%氢氧化钠30%的乙醇洗脱，用TLC检测至生物碱出现，开始收集。合并浓缩处处理，萃取碱化液蒸干经硅胶层析分离，得生物碱40克，其中含长春碱1. 58克、长春新碱0. 12克、脱水长春碱0. 52克、 环氧长春碱0. 08克、长春质碱3. 64克、文多灵3. 76克。
权利要求
1.一种从长春花鲜草中提取脱水长春碱、环氧长春碱的方法，其特征在于包括以下步骤(1)将新鲜长春花，切割打浆，用硫酸液浸泡2次，时间为每次4 8小时，调PH值至 1 6，用筛子过滤，以4倍床体积/小时通过大孔型强酸型阳离子交换树脂柱，柱径比为 7:1 8:1，清水去杂质；(2)用盐液浸泡，再用含醇2% 35%的1% 4%浓度氢氧化钠溶液洗脱，TLC检测洗脱液，收集，浓缩，蒸干后通过硅胶柱层析分离得到生物碱，所获得生物碱的重量百分比为长春碱2. 8 4. 1%、文多灵8. 5 9. 5%、长春新碱0. 2 0. 3%、环氧长春碱1. 3 2. 0%、长春质碱8. Γ 9. 1%和脱水长春碱1. 3 2. 0%，其余为其他生物碱。
2.根据权利要求1所述的一种从长春花鲜草中提取脱水长春碱、环氧长春碱的方法， 其特征在于所述步骤(1)中的酸液为0. 5% 1%的硫酸溶液，所述树脂柱为D61型或HD-8 型树脂。
3.根据权利要求1所述的一种从长春花鲜草中提取脱水长春碱、环氧长春碱的方法， 其特征在于所述步骤(2)中的盐液为4% 6%钠盐液或铵盐液。
4.根据权利要求1所述的一种从长春花鲜草中提取脱水长春碱、环氧长春碱的方法， 其特征在于所述步骤(2)中的洗脱液为含醇20% 30%的1% 4%浓度氢氧化钠溶液。
全文摘要
本发明为一种从长春花鲜草中提取脱水长春碱、环氧长春碱的方法，其特征在于包括以下步骤1、将新鲜长春花，切割打浆，用硫酸液浸泡2次，每次4～8小时，调pH值至1～6，过滤，以4倍床体积/小时通过大孔型强酸型阳离子交换树脂柱，柱径比为7:1～8:1，清水去杂质，洗脱至无色；2、用盐液浸泡，再用含醇2%～35%的1%～4%浓度氢氧化钠溶液洗脱，TLC检测洗脱液，收集，浓缩，蒸干后通过硅胶柱层析分离得到生物碱，其重量百分比为长春碱2.8~4.1%、文多灵8.5~9.5%、长春新碱0.2~0.3%、环氧长春碱1.3~2.0%、长春质碱8.1~9.1%和脱水长春碱1.3~2.0%，其余为其他生物碱。
文档编号C07D519/04GK102432630SQ20111036777
公开日2012年5月2日 申请日期2011年11月18日 优先权日2011年11月18日
发明者倪新忠, 韩彬 申请人:上海安体康生植物化学有限公司