专利名称：一种霍山石斛的组织培养方法
技术领域：
本发明主要涉及一种组织培养方法，尤其涉及一种石斛的组织培养方法。使组培苗提前走出组培室，进入阳光大棚，人工“驯化”。比正常组培苗早6-8个月进入栽培基地。
背景技术：
霍山石斛为兰科多年生附生草本植物。形曲不直，似蚱蜢髀，是石斛中的极品。为我县独有，拥有原产地地理保护标志和濒临灭绝的国家级珍惜名贵中药材，是国家野生中药材二级保护品种，有“植物大熊猫”之称。《本草纲目》记载:石斛生于悬崖峭壁之间、性微寒，有养胃生津、滋阴除热、补肾益精、明目之功效。以之代茶可开胃健脾。霍山石斛具有益精填髓、补五脏内绝不足，平胃气、长肌肉、益智除烦、清虚热、轻身延年之功效。清赵学敏、赵学凯《本草纲目拾遗》《百草经》语曰:石斛近时有一种形短祗寸许细如灯芯，色青黄、嚼之味甘，微有滑涎。系出六安颖州府霍山县是名霍山石斛最佳……经中国科技大学和中山医科大学研究证明:霍山石斛具有增强T细胞B细胞WK细胞和巨噬细胞的作用。对抑制肿瘤和降血糖有非常好的疗效。可促进血液循环，增强心脏功能，促进胃肠蠕动增强消化功能。显著提高人体的sop (超氧岐化酶)水平。降低LPO (过氧化脂质)，起到显著的抗衰老作用。药用石斛有50种之多，品质最佳的是霍山石斛，为石斛中的珍品，野生石斛与黄金等价。 石斛喜阴凉湿润环境，常附生于阴凉湿润的树上和岩石上。喜风，又有“风大贯”之称。尤其是半阴半阳的地方，附生有苔藓植被石灰岩石上和树上最好。其生长条件苛刻，石斛种子细小，不具胚乳(供幼苗生长的物质)，在自然状态下，发芽率很低，成苗更难。20世纪40年代kundson介绍了简便萌发兰花种子的培养基。为石斛种子培育试管苗奠定了基础。但石斛组织培养试管苗工作大多起步于20世纪70年代末至80年代初。20世纪90年代，国内许多教育科研植物园等单位均开展此项研究工作，发展很快。至90年代末组织培养试管苗移栽大田成活率已达95%以上。本发明人在石斛组织培养中，利用不同生长期用不同的生长物质和特殊试管苗驯化手段使试管苗提前约6个月进入种植基地。既节约了资源又优化了试管苗品质。安徽省霍山县地处我省西部偏南，大别山北麓。介于北纬33° 03’-31° 33’，东经115° 52’-116° 32’之间。平均海拔500米，属亚热带季风气候区。四季分明，雨量充沛，年平均气温14.2°C -16.1 °C，最冷月平均气温2 °C，最热月平均气温27.8 °C。年降水量1100-1600mm,绝对湿度年平均15.6mb,常年相对湿度80%，全年> 80%天数200天左右。无霜期为220-270天，无霜期长。自然环境优美，是霍山石斛品质形成的重要条件。野外栽培的石斛培产量低，受自然因素控制，收成受气候影响大，病虫害严重且难以防治；大棚种植的石斛品质又得不到保证，因此先对石斛进行组织培养，然后再在自然环境下种植生长，可以提高石斛的产量和品质
发明内容
本发明目的就是为了提供一种霍山石斛的组织培养方法。本发明是通过以下技术方案实现的:
一种霍山石斛的组织培养方法，包括以下步骤:
(1)取石斛种子，于4-6°C的低温条件下保存10-15天；
(2)将保存的种子取出，用酒精消毒后，加入到培养基A中进行培养40-50天，期间种子会萌发生芽；
所述的培养基A，每升培养基A中所含原料的重量(mg)为:
蔗糖 15000-20000、蛋白胨 3000-4000、南瓜粉 5000-6000、琼脂 7000-9000、硝酸钾1500-2000、硝酸铵 1500-1800、硝酸钠 1000-1200、磷酸二氢钾 150-200、硫酸镁 300-400、氯化钙400-500、碘化钾0.8-1、烟酸0.5-1、硼酸5_10、硫酸锰20-30、硫酸锌8_10、硫酸亚铁20-30、EDTA 二钠 20-30 ；
(3)将生芽的种子幼苗加入到培养基B中添加微肥进行培养70-80天，期间保持环境温度为20-30°C，直至种子幼苗长大到高度为1.2-2厘米；
所述的培养基B，每升培养基B中所含原料的重量(mg)为:
蔗糖15000-20000、蛋白胨3000-4000、大豆蛋白粉5000-6000、琼脂7000-9000、硝酸钾1000-2000、氯化钙400-500、硫酸镁10-20、肌醇90-100、硫酸铜0.01-0.02、甘氨酸2-4、活性炭400-600、盐酸吡哆醇0.5-1、硫酸亚铁20-30、EDTA 二钠20-30、钥酸钠0.01-0.02 ；
(4)将上述长大的幼苗加入到培养基C中添加微肥进行培养95-110天，得到成品苗； 所述的培养基C，每升培养 基C中所含原料的重量(mg)为:
蔗糖 15000-20000、蛋白胨 3000-4000、脱脂奶粉 15000-20000、酵母粉 7000-9000、硝酸钾1000-2000、氯化钙400-500、肌醇90-100、硫酸铜0.01-0.02、甘氨酸2_4、活性炭400-600、盐酸吡哆醇0.5-1、硫酸亚铁20-30、EDTA 二钠20-30、盐酸硫胺素0.1-0.5、钥酸钠 0.01-0.02 ；
(5)将得到的成品苗在阳光大棚中人工培养90-100天，即可进行常规种植。本发明的优点是:
本发明提供的石斛组织培养方法，解决了霍山石斛野外栽培产量低，受自然因素控制，靠天收，病虫害防治难、大棚种植的品质低等缺陷，因为石斛对于生产环境条件要求苛刻，通过组织培养，节约了土地资源，保持了石斛的优良特性，提高了种植成活率。
具体实施例方式实施例1
一种霍山石斛的组织培养方法，包括以下步骤:
(1)取石斛种子，于6°c的低温条件下保存15天；
(2)将保存的种子取出，用酒精消毒后，加入到培养基A中进行培养50天，期间种子会萌发生芽；
所述的培养基A，每升培养基A中所含原料的重量(mg)为:
蔗糖20000、蛋白胨4000、南瓜粉6000、琼脂9000、硝酸钾2000、硝酸铵1800、硝酸钠1200、磷酸二氢钾200、硫酸镁400、氯化钙500、碘化钾0.8、烟酸0.5_1、硼酸10、硫酸锰30、硫酸锌8-10、硫酸亚铁20-30、EDTA 二钠30 ；(3)将生芽的种子幼苗加入到培养基B中进行培养80天，期间保持环境温度为30°C，直至种子幼苗长大到高度为1.2厘米；
所述的培养基B，每升培养基B添加微肥中所含原料的重量(mg)为:
蔗糖20000、蛋白胨4000、大豆蛋白粉6000、琼脂9000、硝酸钾2000、氯化钙500、硫酸镁20、肌醇100、硫酸铜0.02、甘氨酸4、活性炭600、盐酸吡哆醇0.5、硫酸亚铁30、EDTA 二钠30、钥酸钠0.02 ；
(4) 将上述长大的幼苗加入到培养基C中添加微肥进行培养110天，得到成品苗； 所述的培养基C，每升培养基C中所含原料的重量(mg)为:
蔗糖20000、蛋白胨4000、脱脂奶粉20000、酵母粉9000、硝酸钾2000、氯化钙500、肌醇100、硫酸铜0.02、甘氨酸4、活性炭600、盐酸吡哆醇0.5、硫酸亚铁30、EDTA 二钠30、盐酸硫胺素0.5、钥酸钠0.02 ；
(5)将得到的成品苗在阳光大棚中人工培养100天，即可进行常规种植。
权利要求
1.一种霍山石斛的组织培养方法，其特征在于包括以下步骤: (1)取石斛种子，于4-6°C的低温条件下保存10-15天； (2)将保存的种子取出，用酒精消毒后，加入到培养基A中进行培养40-50天，期间种子会萌发生芽； 所述的培养基A，每升培养基A中所含原料的重量(mg)为: 蔗糖 15000-20000、蛋白胨 3000-4000、南瓜粉 5000-6000、琼脂 7000-9000、硝酸钾1500-2000、硝酸铵 1500-1800、硝酸钠 1000-1200、磷酸二氢钾 150-200、硫酸镁 300-400、氯化钙400-500、碘化钾0.8-1、烟酸0.5-1、硼酸5_10、硫酸锰20-30、硫酸锌8_10、硫酸亚铁20-30、EDTA 二钠 20-30 ； (3)将生芽的种子幼苗加入到培养基B中添加微肥培养70-80天，期间保持环境温度为20-30°C，直至种子幼苗长大到高度为1.2-2厘米； 所述的培养基B，每升培养基B中所含原料的重量(mg)为: 蔗糖15000-20000、蛋白胨3000-4000、大豆蛋白粉5000-6000、琼脂7000-9000、硝酸钾1000-2000、氯化钙400-500、硫酸镁10-20、肌醇90-100、硫酸铜0.01-0.02、甘氨酸2-4、活性炭400-600、盐酸吡哆醇0.5-1、硫酸亚铁20-30、EDTA 二钠20-30、钥酸钠0.01-0.02 ； (4)将上述长大的幼苗加入到培养基C中添加微肥进行培养95-110天，得到成品苗； 所述的培养基C，每升培养基C中所含原料的重量(mg)为: 蔗糖 15000-20000、蛋白胨 3000-4000、脱脂奶粉 15000-20000、酵母粉 7000-9000、硝酸钾1000-2000、氯化钙4 00-500、肌醇90-100、硫酸铜0.01-0.02、甘氨酸2_4、活性炭400-600、盐酸吡哆醇0.5-1、硫酸亚铁20-30、EDTA 二钠20-30、盐酸硫胺素0.1-0.5、钥酸钠 0.01-0.02 ； (5)将得到的成品苗在阳光大棚中人工培养90-100天，即可进行常规种植。
全文摘要
本发明提供的霍山石斛组织培养方法，解决了霍山石斛野外栽培产量低，受自然因素控制，靠天收，病虫害防治难、大棚种植的品质低等缺陷，因为石斛对于生产环境条件要求苛刻，通过组织培养，提高了种子出苗率，保持了石斛的优良特性，提高了种植成活率。
文档编号A01H4/00GK103109742SQ20131003800
公开日2013年5月22日 申请日期2013年1月31日 优先权日2013年1月31日
发明者何斌 申请人:安徽霍山县药王谷林农科技有限公司