木霉t11-w对根结线虫卵的寄生及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了T11-W菌株在农业上的应用，具体的是防治土传的线虫病害，特别是蔬菜的根结线虫病害。本制剂能够有效防治番茄根结线虫病，无论是拌土处理还是灌根处理，在每盆有效孢子量为2×107时，防效均在77%以上。而灌根处理，在每盆有效孢子量为2×108时，防效高达90.37%。
【专利说明】木霉Tl 1-W对根结线虫卵的寄生及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，涉及木霉Tll-W对根结线虫卵的寄生及其应用。
【背景技术】
[0002]植物寄生线虫是一类重要的植物病原物，其危害超过细菌和病毒，仅次于真菌病害。据估计全球每年由于植物寄生线虫所造成的损失达1250亿美元，这一损失的70%是由根结线虫spp.)所造成。根结线虫寄主范围广，繁殖力强,侵染作物后可造成作物大幅减产，甚至绝产，已成为制约我国农业可持续发展的突出问题之一。因此，根结线虫的防治日益受到人们的重视。但由于以往多使用高毒化学农药防治植物线虫，给环境、人类健康带来了很多负面影响，致使人们将防治重点转向了生物防治。在植物线虫生防研究中，由于寄生性线虫真菌是一类重要的植物线虫抑制因子，所以成为了许多线虫生防专家的研究对象。已报道的寄生植物线虫真菌主要种类有淡紫拟青iPaecilomyces JiJacizw1S)、厚垣抱普可尼亚菌(Pochonia、洛斯里被毛HHirsuto I larhossi limsi s')和明尼苏达被毛抱(/Z minneso tens is )(李玉中，李本祥，等.寄生线虫真菌黑葡萄穗霉的分离与鉴定[J].广东农业科学，2011，16:59-60)。而木霉(Trichoderma spp.)作为线虫寄生性真菌的报道鲜见。木霉是土壤中常见的生防菌,哈茨木霉菌(Trichoderma harzia/?)是木霉菌中现应用最为广泛的一种,可防治立枯病、粹倒病、根腐病等真菌性病害。虽然已有报道说哈茨木霉Snef85的次级代谢产物对根结线虫幼虫有毒杀做用(段玉玺，靳莹莹，王胜君，等.生防菌株Snef85的鉴定及其发酵液对不同种类线虫的毒力[J].植物保护学报，2008，35 (2):132-136)，但哈茨木霉对蔬菜根结线虫卵的寄生作用未见报道。因木霉具有腐生习性，很难区别其对根结线虫卵是寄生还是腐生作用，本发明采用生物测定和染色相结合的方法确定Tll-W对根结线虫卵具有寄生性。
[0003]根结线虫卵寄生菌Tll-W是`从黄瓜根结线虫卵上分离获得，菌种保藏号CGMCCN0.7938,经鉴定是哈茨木霉(rricAoofe/ma harzianum')0 Tll-W是一种具有应用潜力的线虫生防真菌，不但能够寄生根结线虫卵，消解卵壳，还能够定殖植物根系并能促进植物根系的生长。
【发明内容】
[0004]本发明提供一种对根结线虫卵有高效寄生率的菌株及其应用。
[0005]本发明中的根结线虫卵寄生菌Tll-W的分离及鉴定
(I)菌株采用双抗PDA平板筛选方法，从黄瓜根结线虫病根分离所得。
[0006](2)菌株鉴定:采用ITS序列比对的方法将该菌株鉴定为哈茨木霉(斤icAotferaaharzianum),命名为T11-W,该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏，其保藏号为CGMCC N0.7938，保藏时间为2013年7月19日，保藏地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号。
[0007]2 Tll-W对番茄根结线虫卵寄生研究本发明采用生物测定和染色相结合的方法研究Tll-W对根结线虫卵的寄生性。结果见表1、图1和图2。
表1木霉菌对南方根结线虫卵寄生及孵化抑制情况调查结果
校正寄生率、校正抑制孵化率％
丁11-W?哈夜木霉.73.4691A6
IIK-2 哈茨木g.25J13SJ4I
空白对照一i—j
[0008]由表1可知，木霉菌Tll-W处理根结线虫卵10天后的校正寄生率为73.46%，孵化抑制率为91.16%。表明，Tll-W是根结线虫卵的高效寄生菌。
[0009]由附图1和附图2可知，木霉菌Tll-W对根结线虫卵有寄生性。因为附图1中的卵是健康的卵(健康的卵不着色)，Tll-W菌丝刚开始接触到健康的卵；附图2中的卵是被Tll-W菌丝寄生并致死的卵。
[0010]3.木霉菌Tll-W分生孢子的培养方法
将木霉菌株Tll-W接种于PDA平板，置于28°C下培养2-3天。转接PDA液体培养基，置于摇床上28°C振荡培养3-4天，然后将液体种子接入麸皮和稻壳组成的固体基培养5-7天。自然风干，得Tll-W固体培养物。过100目筛收集分生孢子粉。
[0011]4.Tll-W制剂研究与应用
本发明Tll-W菌株在农业`上的应用是防治土传的线虫病害，特别是蔬菜的根结线虫病害。这决定了该菌剂的施药方式为浇施、撒施或穴施。综合考虑多方面因素选择以Tll-W分生孢子粉为有效成分配制一种可湿性粉剂，组成如下:
哈茨木霉Tll-W分生孢子粉10~20重量份
娃藻土50~69重量份
木质素磺酸钠3~5重量份
吐温803~5重量份
叶酸0.5~I重量份。
[0012]上述组分中硅藻土为载体，吐温80为润湿剂，木质素磺酸钠为分散剂，叶酸为紫外保护剂。
[0013]上述可湿性粉剂的应用效果如下:
(I)Tll-W菌剂对番茄种子萌发的影响，结果见表2。
表2 Tll-W菌剂对番茄种子荫发的影响
孢子重根长cm芽长cm
Tll-W 菌剤:2 亿.g.2.54土MSl.2.13土H.水对照01.67 土 CL IOb 100 土
症藻土对照 + 0 + L54± 0.20b 1J2±.CU2i|
[0014]由表2可知，Tll-W对番茄种子的萌发有促进作用，对根的促生作用明显比对照高，且差异显著。
[0015](2)温室生物活性测定
分别采用拌土处理和灌根处理法进行温室盆栽试验，结果见表3。__表3本制剂对番茄根结线虫的防治效果—
不同处理施加有效孢处理后60
【权利要求】
1.一种对根结线虫卵有高效寄生率的菌株，经鉴定为哈H霉(Jrichochnmharzianum),命名为T11-W,该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)保藏，保藏号为CGMCC N0.7938，保藏时间为2013年7月19日，保藏地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号。
2.如权利要求1所述的哈茨木霉Tll-W菌的应用，其特征在于用于防治土传的线虫病害，特别是蔬菜的根结线虫病害。
3.如权利要求2所述的哈茨木霉Tll-W菌的应用，其特征在于所说的用于防治土传的线虫病害的哈茨木霉Tll-W菌的剂型为其分生孢子的可湿性粉剂，具体组成如下: 哈茨木霉Tll-W分生孢子粉10~20重量份 娃藻土50~69重量份 木质素磺酸钠3~5重量份吐温803~5重量份 叶酸0.5~I重量份。
4.如权利要求3所述的哈茨木霉Tll-W菌的应用，其特征在于所说的哈茨木霉Tll-W分生孢子粉的制备方法为:将木霉菌株Tll-W接种于PDA平板，置28°C下培养2-3天；转接PDA液体培养基，置于摇床上28°C下振荡培养3-4天；然后将液体种子接入麸皮和稻壳组成的固体培养基，培养5-7天；自然风干，得Tll-W固体培养物；过100目筛收集分生孢子粉。
【文档编号】A01N63/04GK103484380SQ201310374929
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年8月26日 优先权日:2013年8月26日
【发明者】王贻莲, 杨合同, 李纪顺, 李哲, 陈凯, 魏艳丽, 吴晓青 申请人:山东省科学院中日友好生物技术研究中心