专利名称：快速获取大量根结线虫雌虫的简易方法
技术领域：
本发明涉及一种获得大量雌性根结线虫的简易方法。适用于植物病理学、植物线虫学的研究、植物病理学和植物线虫学实验教学课程以及在根结线虫分类学等方面有极其重要的利用价值。
背景技术：
会阴花纹是根结线虫种类鉴定的重要的形态这依据，制备会阴花纹的玻片及实验教学中需要大量的雌虫，而雌性根结线虫均埋生在寄主根组织内部，获得雌虫必须在解剖镜下解剖根结，取出内部的雌虫，在操作过程中，看不清楚内部的雌虫，因此，在解剖时经常弄破雌虫，以致花费大量的时间获得少量的雌虫，事倍功半。
发明内容
本发明的目的是提供一种短时间内可以获得大量完整雌性根结线虫的简易方法， 以克服现有获取雌性根结线虫技术费时费力和虫体易破的不足。为达到上述目的，本发明采取技术方案是第一步利用细菌在25°C -30°C温度下，分解腐败植物根部的表皮和皮层组织；第二步将分解后的腐败植物根的表皮和皮层脱落，释放内部的雌虫，然后通过 20目和80目的套筛，收集80目筛子上的残留物，在15X解剖镜下观察到大量的白色梨形雌虫。第三步在体视解剖镜下或在光线充足处用细毛笔直接挑取根结线虫白色雌虫。本发明更详细的步骤为第一步取新鲜的、表现根结症状的植物病根，用自来水冲去表面的泥土，剪成段状置于相应大小的烧杯中，加入自来水，浸没根组织，然后将烧杯置于恒温箱中直至植物病根部的表皮和皮层组织分解。上述恒温箱的温度一般控制在25 °C "30 °C。第二步将处理后的病根移入组织捣碎机组织搅拌，使腐败的表皮和皮层脱落，释放内部的雌虫，再通过20目和80目的标准筛，收集80目的残留物到小皿中，解剖镜下可看到大量白色的梨形的根结线虫雌虫。上述组织搅拌时间一般为30秒钟，第三步在体视解剖镜下或在光线充足处用细毛笔直接挑取根结线虫白色雌虫。本发明的优点是1、避免在解剖镜下逐一解剖根结，且取出雌虫时易被弄破。2、在短时间内，获得雌虫量大，完整性好。3、方法简单，不需要特殊的仪器设备为了验证本发明的优点，在同等条件下利用本发明方法和常规方法进行对比试验，结果表明，利用本方法30分钟可获得50-60个或更多完整的雌虫，而用常规方法在体视镜直接解剖，如果获得同样数量的雌虫需要2-3个小时，且需要一直在镜下操作，费时费力。上述试验结果说明本发明方法在短时间内可获得大量的雌性根结线虫，操作简单，不需要特殊仪器设备，弥补了常规技术费时费力和虫体易破的不足。
图1是利用本发明方法30分钟获得的部分南方根结线虫雌虫的显微镜放大图，其中 bar = 1000 μ m ；图2是利用本发明方法30分钟获得的部分南方根结线虫雌虫的显微镜放大图，其中 bar = 500 μ m。
具体实施例方式下面结合具体实施例详细说明本发明的技术方案。1.准备具有明显根结症状的病根，500ml烧杯，组织捣碎机，20目和80目的标准筛，体视解剖镜，恒温培养箱。2.将病根剪成2cm长放入500ml烧杯中，加自来水浸末根组织，置于30°C恒温箱过夜，待烧杯内水混浊，将根取出移入组织捣碎机，工作30秒钟。然后通过20目和80目的套筛，收集80目筛子上的残留物，在解剖镜下观察到大量的白色雌虫，如图1中A(bar = 1000 μ m)图片和 B (bar = 500 μ m)图片。3.在体视解剖镜下或在光线充足处用细毛笔直接挑取根结线虫白色雌虫。
权利要求
1.一种快速获取大量根结线虫雌虫的简易方法，其特征在于，步骤如下 第一步利用细菌在25°c -30°C温度下，分解腐败植物根部的表皮和皮层组织； 第二步将分解后的腐败植物根的表皮和皮层脱落，释放内部的雌虫，然后通过20目和80目的套筛，收集80目筛子上的残留物，在15 X解剖镜下观察到大量的白色梨形雌虫； 第三步在体视解剖镜下或在光线充足处用细毛笔直接挑取根结线虫白色雌虫。
2.如权利要求1所述的快速获取大量根结线虫雌虫的简易方法，其特征在于，步骤如下第一步取新鲜的、表现根结症状的植物病根，用自来水冲去表面的泥土，剪成段状置于相应大小的烧杯中，加入自来水，浸没根组织，然后将烧杯置于30°C恒温箱中直至植物病根部的表皮和皮层组织分解；第二步将处理后的病根移入组织捣碎机组织搅拌30秒钟，使腐败的表皮和皮层脱落，释放内部的雌虫，再通过20目和80目的标准筛，收集80目的残留物到小皿中，在15X 解剖镜下古纳差观察到大量白色的梨形的根结线虫雌虫；第三步在体视解剖镜下或在光线充足处用细毛笔直接挑取根结线虫白色雌虫。
全文摘要
本发明公开了一种快速获取大量根结线虫雌虫的简易方法，它主要是利用细菌在25℃-30℃温度下，分解腐败植物根部的表皮和皮层组织；将分解后的腐败植物根的表皮和皮层脱落，释放内部的雌虫，然后通过20目和80目的套筛，收集80目筛子上的残留物；最后在体视解剖镜下或在光线充足处用细毛笔直接挑取根结线虫白色雌虫。本发明方法在短时间内可获得大量的雌性根结线虫，操作简单，不需要特殊仪器设备，弥补了常规技术费时费力和虫体易破的不足。
文档编号G01N1/28GK102175495SQ20101061561
公开日2011年9月7日 申请日期2010年12月30日 优先权日2010年12月30日
发明者吴海燕, 周勋波, 毕建杰 申请人:吴海燕