一种羊肚菌液体培养发酵原种及制备方法以及用该原种进行液体培养的方法
【专利摘要】本发明公开了一种羊肚菌液体培养发酵原种及制备方法以及用该原种进行液体培养的方法。本发明以木屑、麦麸、玉米粉、黄豆粉为主要原料，制作羊肚菌固体培养基，经过接种培养后，形成一种用于羊肚菌液体培养的发酵原种，此固体发酵原种无需逐级扩大，可直接用于羊肚菌液体培养，操作简单，菌丝生长快，较传统工艺发酵周期缩短，羊肚菌胞外多糖含量显著提高。
【专利说明】一种羊肚菌液体培养发酵原种及制备方法以及用该原种进行液体培养的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于菌种培养领域，具体涉及一种羊肚菌液体培养发酵原种及制备方法以及用该原种进行液体培养的方法。
【背景技术】
[0002]羊肚菌是一种珍贵稀有的野生食药用菌，营养价值高。现代药理学研究表明，羊肚菌生物活性有效组分食(药)用真菌多糖的含量很高，其子实体多糖入药有消积杀虫的作用，能增强人体免疫功能，具有抗病毒、抗肿瘤作用，能降低胆固醇含量，防止动脉硬化等。
[0003]目前虽有报道称已实现羊肚菌的人工栽培，但迄今未见商品化人工栽培羊肚菌的报道，究其原因主要是羊肚菌子实体形成阶段对空气十分敏感。利用野生子实体来提取羊肚菌多糖不但成本高，而且原料来源有限，以液体培养羊肚菌菌丝体和发酵液为主要原料提取多糖，既可降低成本又可提高生产效率，具有十分广阔的应用前景，而筛选适合羊肚菌液体培养的发酵工艺是提高羊肚菌多糖产率主要因素。
[0004]传统的液体培养发酵工艺要经过接种、静置培养和摇瓶培养等多个步骤，而接种块的大小、薄厚及接种的好坏直接影响液体培养的产量，接种后菌种块必须浮在液面不能沉下去，这样静置后才容易形成更多的菌丝体，成功完成液体培养。
【发明内容】
[0005]本发明的目的 是提供一种产量高的羊肚菌液体培养发酵原种；
本发明的另一个目的是提供一种该羊肚菌液体培养发酵原种的制备方法。
[0006]羊肚菌液体培养发酵原种是由羊肚菌一级种培养而成的菌种，以固体培养基在专用瓶或袋进行培养，用于羊肚菌液体培养，操作简单，菌丝生长快，发酵周期短，简化了传统羊肚菌液体培养过程中菌种逐级扩大培养的工艺。
[0007]本发明技术方案如下:
一种羊肚菌液体培养发酵原种，它由羊肚菌(Morchella sp.)经过接种培养后制得。
[0008]一种羊肚菌液体培养发酵原种的制备方法，包括下列步骤:
A、羊肚菌液体培养发酵原种培养基包括下列质量份配比的组份，木屑15.0份一25.0份、麦麸65.0份一 75.0份、玉米粉4.5份一6.0份、黄豆粉3.7份一 5.0份，拌水量为上述组分总质量的120% —140% ；
B、羊肚菌液体培养发酵原种的培养，将羊肚菌液体培养发酵原种培养基装袋灭菌冷却后，无菌操作接入羊肚菌(Morchella sp.)，于23°C—27 °C温度下恒温培养得羊肚菌液体培养发酵原种。
[0009]优选地，所述羊肚菌液体培养发酵原种培养基还包括下列组份，磷酸氢二钾
0.10—0.20质量份，磷酸二氢钾0.10—0.25质量份，硫酸镁0.10—0.20质量份份的，维生素B1IO —15毫克/千克，维 生素B2IO —15毫克/千克。[0010]优选地,所述羊肚菌液体培养发酵原种培养基在0.12MPa压力下灭菌I小时。
[0011]用上述方法制备的羊肚菌液体培养发酵原种进行液体培养的方法，它包括下列步骤:
A、液体发酵培养基制备:玉米粉100g，黄豆粉50g，硫酸镁10g，磷酸二氢钾15g，磷酸氢二钾15g，加水至10L，熬煮过滤后装入600ml三角瓶，每瓶装料300ml，棉花塞封口，高压
0.12MPa灭菌30min，冷却后可得液体发酵培养基；
B、羊肚菌液体培养，将权利要求4制备的羊肚菌液体培养发酵原种在无菌条件下搅碎，接入液体发酵培养基中，置于摇床上培养，以培养液清亮为培养终点。优选地，所述步骤B中羊肚菌液体培养以180r/min的转速，在25°C温度下摇瓶培养。
[0012]本发明羊肚菌(Morchella sp.) 801号购买于四川绵阳食用菌研究所。
[0013]本发明以木屑、麦麸、玉米粉、黄豆粉为主要原料制作羊肚菌原种培养基，经过转接、培养后，形成一种用于羊肚菌液体培养发酵原种，此固体发酵原种无需静置培养，无需逐级扩大，接入液体培养基后可实现多个萌发点，可以简化传统液体培养发酵工艺，缩短发酵周期，提高菌丝体产量和发酵效率，操作简单，菌丝生长快，较传统工艺发酵周期缩短，羊肚菌胞外多糖含量显著提高。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1是一种羊肚菌液体培养发酵原种制备方法的工艺流程图；
图2是一种用羊肚菌液体培养发酵原种进行液体培养的工艺流程图；
图3是传统液体培养方法的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0015]下面的实施例可以使本领域的技术人员更好地理解本项技术，但不以任何方式限制本发明。
[0016]实施例1、羊肚菌液体培养发酵原种的制备方法如下:
A、一级种的准备:羊肚菌(Morchellasp.) 801号购买于四川绵阳食用菌研究所；
B、羊肚菌液体培养发酵原种培养基组成:木屑2000g，麦麸7000g，玉米粉500g，黄豆粉460g,磷酸氢二钾15g,磷酸二氢钾15g,硫酸镁IOg,维生素B1IOOmg,维生素B2IOO mg,水12.5L ；
C、羊肚菌液体培养发酵原种的培养:将步骤B原种培养基拌匀后分别装入500ml食用菌聚丙烯塑料袋中，松紧适宜，用棉花塞封口，高压0.12MPa灭菌I小时。待冷却后，无菌操作接入A步骤准备的羊肚菌一级种，25°C恒温培养20天可得羊肚菌液体培养原种。
[0017]实施例2、羊肚菌液体培养发酵原种的制备方法如下:
A、一级种的准备:羊肚菌(Morchellasp.) 801号购买于四川绵阳食用菌研究所；
B、羊肚菌液体培养发酵原种培养基组成:木屑2500g，麦麸6500g，玉米粉600g，黄豆粉370g,磷酸氢二钾IOg,磷酸二氢钾IOg,硫酸镁20g,维生素B1IOOmg,维生素B2150mg,水12.0L。
[0018]C、羊肚菌液体培养发酵原种的培养:将步骤B原种培养基拌匀后分别装入500ml食用菌聚丙烯塑料袋中，松紧适宜，用棉花塞封口，高压0.12MPa灭菌I小时。待冷却后，无菌操作接入A步骤准备的羊肚菌一级种，23°C恒温培养20天可得羊肚菌液体培养原种。
[0019]实施例3、羊肚菌液体培养发酵原种的制备方法如下:
A、一级种的准备:羊肚菌(Morchellasp.) 801号购买于四川绵阳食用菌研究所；
B、羊肚菌液体培养发酵原种培养基组成:木屑1500g，麦麸7500g，玉米粉450g，黄豆粉500g,磷酸氢二钾20g,磷酸二氢钾25g,硫酸镁15g,维生素B1ISOmg,维生素B2IOO mg,水14.0L0
[0020]C、羊肚菌液体培养发酵原种的培养:将步骤B原种培养基拌匀后分别装入500ml食用菌聚丙烯塑料袋中，松紧适宜，用棉花塞封口，高压0.12MPa灭菌I小时。待冷却后，无菌操作接入A步骤准备的羊肚菌一级种，27°C恒温培养20天可得羊肚菌液体培养原种。
[0021]实施例4、与实施例1不同之处在于:羊肚菌液体培养发酵原种培养基组成为:木屑2000g，麦麸7000g，玉米粉500g，黄豆粉460g,水12.5L。
[0022]实施例5、用羊肚菌液体培养发酵原种进行液体培养的方法如下:
液体发酵培养基制备:玉米粉100g，黄豆粉50g，硫酸镁10g，磷酸二氢钾15g，磷酸氢二钾15g，加水至10L，熬煮过滤后装入600ml三角瓶，每瓶装料300ml，棉花塞封口，高压
0.12MPa灭菌30min，冷却后可得液体发酵培养基。
[0023]用羊肚菌液体培养发酵原种进行液体培养，将实施例1-实施例3得到的羊肚菌液体培养发酵原种在无菌条件下搅碎，接入液体发酵培养基中，置于摇床上，以180r/min的转速，于25°C温度下摇瓶培养，以培养液清亮为培养终点，测定菌丝球数、菌丝球直径、菌丝干重和胞外多糖含量等发酵指标，结果见表1。
[0024]对照例:为羊肚菌传统液体培养方法，与实施例1不同在于将步骤A准备的羊肚菌(801号)一级种无菌操作接入实施例5中的液体发酵培养基中，接种块的大小、薄厚以菌种块浮在液面不沉下去为准，先置于恒温培养箱，25°C静置48-72小时，待菌丝萌发后，置于摇床上，以180r/min、25°C摇瓶培养7天作为液体菌种。将此液体菌种无菌操作抽取5ml接入步骤D制备的液体发酵培养基，置于摇床上，以180r/min、25°C摇瓶培养，以培养液清亮为培养终点，测定菌丝球数、菌丝球直径、菌丝干重和胞外多糖含量等发酵指标。
[0025]羊肚菌液体培养发酵试验结果参见表1，利用羊肚菌液体培养发酵原种进行液体发酵时，可直接将发 酵原种接入液体培养基进行发酵，简化了传统羊肚菌液体培养过程中菌种逐级扩大培养的工艺。利用羊肚菌液体培养发酵原种进行的液体发酵相比传统液体培养，菌丝球数量多，大小均匀，菌丝干重增加，且胞外多糖含量最高提高了 10%。
【权利要求】
1.一种羊肚菌液体培养发酵原种,其特征在于:它由羊肚菌(Morchella sp.)经过接种培养后制得。
2.一种羊肚菌液体培养发酵原种的制备方法，其特征在于它包括下列步骤: A、羊肚菌液体培养发酵原种培养基包括下列质量份配比的组份，木屑15.0份一25.0份、麦麸65.0份一75.0份、玉米粉4.5份一6.0份、黄豆粉3.7份一5.0份，拌水量为上述组分总质量的120% —140% ； B、羊肚菌液体培养发酵原种的培养，将羊肚菌液体培养发酵原种培养基装袋灭菌冷却后，无菌操作接入羊肚菌(Morchella sp.)，于23°C—27 °C温度下恒温培养得羊肚菌液体培养发酵原种。
3.根据权利要求2所述的羊肚菌液体培养发酵原种的制备方法，其特征在于:所述羊肚菌液体培养发酵原种培养基还包括下列组份，磷酸氢二钾0.10—0.20质量份，磷酸二氢钾0.10—0.25质量份，硫酸镁0.10—0.20质量份份的，维生素B1IO —15毫克/千克，维生素B2IO —15毫克/千克。
4.根据权利要求2或3所述的羊肚菌液体培养发酵原种的制备方法，其特征在于:所述羊肚菌液体培养发酵原种培养基在0.12MPa压力下灭菌I小时。
5.用权利要求4制备的羊肚菌液体培养发酵原种进行液体培养的方法，其特征在于它包括下列步骤: A、液体发酵培养基制备:玉米粉100g，黄豆粉50g，硫酸镁10g，磷酸二氢钾15g，磷酸氢二钾15g，加水至10L，熬煮过滤后装入600ml三角瓶，每瓶装料300ml，棉花塞封口，高压0.12MPa灭菌30min，冷 却后可得液体发酵培养基； B、羊肚菌液体培养，将权利要求4制备的羊肚菌液体培养发酵原种在无菌条件下搅碎，接入液体发酵培养基中，置于摇床上培养，以培养液清亮为培养终点。
6.权利要求5所述的羊肚菌 液体培养发酵原种进行液体培养的方法，其特征在于:所述步骤B中羊肚菌液体培养以180r/min的转速，在25°C温度下摇瓶培养。
【文档编号】C05G3/00GK103804090SQ201410059492
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2014年2月21日 优先权日:2014年2月21日
【发明者】韩融冰, 路等学, 赵玉卉, 王龙 申请人:甘肃省科学院生物研究所