一种添加山药皮的姬松茸液体发酵培养基、发酵工艺及发酵制品的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种添加山药皮的姬松茸液体发酵培养 基、发酵工艺及发酵制品。
【背景技术】
[0002] 姬松鸾（Agaricus blazei Murill)是典型的食药兼用菌。其子实体肉质鲜嫩、气 香味美，且富含有蛋白质、核酸、多糖类、留醇、维生素等多种活性物质，营养价值极高。其中 的多糖类物质经试验证明具有显著的抗肿瘤活性，在具有抗癌功效的己知真菌中居首位。 其在治疗癌症、糖尿病、高血脂、慢性肝炎等方面也具有显著的医疗保健作用，是一种极具 开发价值的食药用真菌。
[0003] 山药作为药食两用的食品，富含淀粉、氨基酸，还含有黏液多糖、多酚氧化酶、甾体 化合物等。留体化合物具有抗炎、抗过敏、抗肿瘤、解毒等药理作用，在临床上有广泛的用 途。山药皮作为生活垃圾丢弃，污染环境浪费资源，不利于资源的综合利用和建设资源节约 型环境友好型社会。近年来，有关姬松茸液体培养基的筛选已有研宄，但以废弃山药皮为基 质发酵姬松茸的有关研宄尚未见报道。
【发明内容】
[0004] 本发明针对现有技术的不足，目的在于提供一种添加山药皮的姬松茸液体发酵培 养基、发酵工艺及发酵制品。
[0005] 为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为：
[0006] 一种添加山药皮的姬松茸液体发酵培养基，由山药皮处理液和PDA液体培养基组 成，所述山药皮处理液为将山药皮进行超微粉碎处理后的超微粉加水得到的山药皮超微粉 悬浊液、将山药皮经水提处理获得的山药皮超声波水提取浓缩液和将山药皮经醇提处理获 得的山药皮醇提取浓缩液中的一种或几种的组合。
[0007] 按上述方案，所述山药皮处理液和PDA液体培养基的体积比为1:2~1: 5。
[0008] 按上述方案，每100mL的山药皮处理液中，所述山药皮的处理量为9g~llg。
[0009] 按上述方案，所述山药皮处理液组合时，优选为山药皮超微粉悬浊液：山药皮超声 波水提取浓缩液体积比=1:1的组合，或山药皮超微粉悬浊液：山药皮超声波水提取浓缩 液：山药皮醇提取浓缩液体积比=1:1:1的组合，或山药皮超声波水提取浓缩液：山药皮醇 提取浓缩液体积比=1:1的组合。
[0010] 按上述方案，所述山药皮超声波水提取浓缩液是通过如下方法获得：将废弃山药 皮粉碎后加入到水中进行超声波提取，而后浓缩成浓缩液；所述山药皮醇提浓缩液通过如 下方法获得：将废弃山药皮粉碎后加入到醇中进行闪式提取，而后浓缩成浓缩液。
[0011] 按上述方案，所述超声波提取为200W超声波提取Ih。
[0012] 按上述方案，所述闪式提取的转速5000r/min，时间为lOmin。
[0013] 按上述方案，所述PDA液体培养基为：将去皮土豆200份加水煮沸后过滤，再加入 蛋白胨2重量份，酵母膏2重量份，磷酸二氢钾3重量份，硫酸镁2重量份，加水定容至1000 重量份，pH值自然。
[0014] -种基于上述添加山药皮的姬松茸液体发酵培养基的姬松茸发酵工艺，包括如下 步骤：
[0015] (1)姬松茸菌种的活化；
[0016] (2)液体发酵培养：将活化后的姬松茸菌株接种至添加山药皮的姬松茸液体发酵 培养基中，调节培养基的pH为4~7,置于20~28°C下摇床培养5~8d，发酵结束后，发酵 液经后处理后得到姬松茸发酵制品。
[0017] 按上述方案，所述姬松茸菌种的活化为：将姬松茸菌株接种到PDA固体培养基中， 置于25°C下培养3d。
[0018] 按上述方案，所述摇床培养的装液量为20% -60%，摇床转速为150r/min。
[0019] 按上述方案，所述的后处理为：将发酵液离心分离后得上清液①和菌丝体，将菌丝 体干燥、粉碎后置于水中进行超声波处理、离心，得上清液②，合并上清液①和②并喷雾干 燥。
[0020] 上述发酵工艺制备得到的姬松茸发酵制品。
[0021] 本发明的有益效果为：
[0022] (1)废弃山药皮中的淀粉含量较高，可作为姬松茸液体发酵的碳源，为姬松茸生长 提供充足的碳源，本发明首次将加工副产物废弃山药皮作为发酵基质添加到姬松茸液体发 酵培养基中，实现了对废弃副产物山药皮的综合利用，显著降低了生产成本。进一步，本发 明利用添加废弃山药皮的液体发酵培养基进行姬松茸液体发酵培养，还可以有效缩短发酵 时间，提高发酵效率，还可以显著提高发酵液中多糖黄酮的总含量、姬松茸菌丝体的生物量 及菌丝体中多糖黄酮的含量。
[0023] (2)本发明发酵制品包含了姬松茸发酵的胞内提取物和胞外提取物，相比常规的 姬松茸发酵制品仅包括单一的胞内提取物而言，本发明发酵制品中含有更多的活性物质且 活性物质的抗氧化活性强。
[0024] (3)本发明所述的发酵制品可作为活性物质加入功能食品。
【附图说明】
[0025] 图1为本发明姬松茸发酵工艺路线图。
[0026] 图2为对比例和实施例的上清液①和上清液②的DPPH自由基、羟基自由基、超氧 自由基清除率。
【具体实施方式】
[0027] 为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的 内容不仅仅局限于下面的实施例。
[0028] 实施例1
[0029] 一种基于添加山药皮的姬松茸液体发酵培养基的姬松茸发酵工艺，具体包括如下 步骤：
[0030] (1)山药皮处理液：将废弃山药皮进行超微粉碎后，取超微粉30g加入300ml水配 置成废弃山药皮超微粉悬浊液；
[0031] (2) PDA液体培养基：土豆（去皮）200g加水煮沸半小时过滤，加入蛋白胨2g，酵母 膏2g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁2g，pH值自然定容到1000 ml，取700ml待用；
[0032] (3)混合步骤（1)废弃山药皮超微粉水溶液和步骤（2)的PDA液体培养基（山药 皮处理液/PDA液体培养基=3:7)，得到添加山药皮的姬松茸液体发酵培养基，调节培养基 口!1值为6，分装在25〇1111三角瓶，每瓶装液量20%(5〇1111)，121°0灭菌151^11 ;
[0033] (4)用已灭菌的镊子取5mmX 5mm大小、平板活化好的姬松茸菌株接种于步骤（3) 的发酵培养基中，摇床培养温度25°C，转速150r/min，培养7d ;
[0034] (5)培养结束后分离醪液，得上清液①，抽滤得到菌丝体，干燥至恒重，称重得到姬 松茸发酵的菌丝体生物量；
[0035] (6)将姬松茸菌丝体干粉粉碎后加入20倍体积水超声波200w超声处理Ih后离 心，得上清液②，合并上清液①和②，并喷雾干燥，得到姬松茸胞内外提取物制品，即姬松茸 发酵制品。
[0036] 实施例2
[0037] 一种基于添加山药皮的姬松茸液体发酵培养基的姬松茸发酵工艺，具体包括如下 步骤：
[0038] (1)山药皮处理液：取粉碎后的山药皮25g，加500ml水200w超声波提取lh，离心 取上清液并浓缩到250ml，即为废弃山药皮超声波水提取浓缩液；
[0039] (2) PDA液体培养基：土豆（去皮）200g加水煮沸半小时过滤，加入蛋白胨2g，酵母 膏2g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁2g，pH值自然定容到1000 ml，取750ml待用；
[0040] (3)混合步骤（1)的废弃山药皮超声波水提取浓缩液和步骤（2)的PDA液体培养 基（山药皮处理液/PDA液体培养基=1:3)，得到添加山药皮的姬松茸液体发酵培养基，调 节培养基pH值为4,分装在250ml三角瓶，每瓶装液量30% (75ml)，121 °C灭菌15min ;
[0041] (4)用已灭菌的镊子取5mmX 5mm大小、平板活化好的姬松茸菌株接种于步骤（3) 的发酵培养基中，摇床培养温度26°C，转速150r/min，培养5d ;
[0042] (5)培养结束后分离醪液，得上清液①，抽滤得到菌丝体，干燥至恒重，称重得到姬 松茸发酵的菌丝体生物量；
[0043] (6)将姬松茸菌丝体干粉粉碎后加入20倍体积水超声波200w超声处理Ih后离 心，得上清液②，合并上清液①和②以后喷雾干燥，得到姬松茸胞内外提取物制品，即姬松 茸发酵制品。
[0044] 实施例3
[0045] 一种基于添加山药皮的姬松茸液体发酵培养基的姬松茸发酵工艺，具体包括如下 步骤：
[0046] (1)山药皮处理液：取粉碎后的山药皮20g，加入600ml 30vt% (体积浓度）乙醇 闪式提取l〇min，所述闪式提取的转速5000r/min，离心取上清液挥干乙醇，浓缩到200ml， 即为废弃山药皮醇提取浓缩液；
[0047] (2) PDA液体培养基：土豆（去皮）200g加水煮沸半小时过滤，加入蛋白胨2g，酵母 膏2g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁2g，pH值自然定容到1000 ml，取800ml待用；
[0048] (3)混合步骤⑴的废弃山药皮醇提取浓缩液和步骤⑵的PDA液体培养基（山 药皮处理液/PDA液体培养基=1:4)，得到添加山药皮的姬松茸液体发酵培养基，调节培养 基pH值为5,分装在250ml三角瓶，每瓶装液量40% (100ml)，121°C灭菌15min ;
[0049] (4)用已灭菌的镊子取5mmX 5mm大小、平板活化好的姬松茸接种于步骤（3)的发 酵培养基中，摇床培养温度28°C，转速150r/min，培养6d ;
[0050] (5)培养结束后分离醪液，得上清液①，抽滤得到菌丝体，干燥至恒重，称重得到姬 松茸发酵的菌丝体生物量；
[0051] (6)将姬松茸菌丝体干粉粉碎后加入20倍体积水超声波200w超声处理Ih后离 心，得上清液②，合并上清液①和②以后喷雾干燥，得到姬松茸胞内外提取物制品，即姬松 茸发酵制品。
[0052] 实施例4
[0053] 一种基于添加山药皮的姬松茸液体发酵培养基的姬松茸发酵工艺，具体包括如下 步骤：
[0054] (1)山药皮处理液：将山药皮经过气流式超微粉碎机粉碎，取超微粉15g加入 150ml水配置成废弃山药皮超微粉悬浊液；取粉碎后的山药皮15g，加30