一种用于生物反应器培养细胞过程中消耗葡萄糖的检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种用于生物反应器培养细胞过程中消耗葡萄糖检测的试剂盒，包括盒体，在盒体内设有用于装葡萄糖标准液的试剂瓶、用于装空白对照的试剂瓶、用于装检测液的试剂瓶、多个0.22μm水相针头过滤器、多个一次性注射器和ELISA平板，所述盒体为硬质纸质盒体，盒体内装有多孔缓冲泡沫塑料，其上设有与各配件形状一致的固定凹槽。本实用新型用于生物反应器培养细胞过程中葡萄糖消耗量的测定，测定灵敏度高、选择性强，操作简单，制作成本低，在大批量样品的检测中具有巨大的应用前景。
【专利说明】
一种用于生物反应器培养细胞过程中消耗葡萄糖的检测试剂盒
技术领域
[0001]本实用新型涉及检测试剂盒，具体说是一种用于生物反应器培养细胞过程中消耗葡萄糖的检测试剂盒。【背景技术】
[0002]大规模生产重组蛋白药物、抗体及过程中，动物细胞体外培养的密度是至关重要的。生物反应器是规模化体外培养动物细胞的关键设备，为细胞提供了适宜的生长环境，使之快速增殖并形成所需的生物组织制品。生物反应器培养细胞过程中需要对细胞消耗的营养物质(如谷氨酰胺，葡萄糖等)，培养液pH，培养温度以及细胞液溶氧量进行实时监控和调节，以便维持细胞生长的最佳条件。其中细胞消耗葡萄糖是监测的一项重要指标，准确快速的对细胞消耗葡萄糖进行检测，在不同时间绘制糖耗曲线，根据这些数据，实验人员及时调整在培养液中添加葡萄糖的频率，进而维持细胞生长最佳状态。
[0003]葡萄糖含量的检测方法，包括过氧化还原滴定法、碘-淀粉体系褪色光度法、葡萄糖己糖激酶法、中红外衰减全反射光谱法、高效液相法、表面等离子体共振技术、葡萄糖氧化酶法、葡萄糖氧电极法、纳米材料模拟酶比色法、无酶型葡萄糖电化学法等，其中医学检测中常用葡萄糖氧化酶法对血液葡萄糖含量进行测定。
[0004]葡萄糖被葡萄糖氧化酶(G0D)氧化生成葡萄糖酸和H202，H202与过氧化物酶(P0D) 作用，分解出氧，将无色的4-氨基安替比林和苯酚偶联氧化，并缩合成红色醌亚胺，其颜色深浅与葡萄糖浓度呈正比，在500nm下的吸收峰度值会随葡萄糖浓度的增加而增加，利用这一原理可以测定葡萄糖含量。
[0005]葡萄糖氧化酶法由于其简便、灵敏等优点，在医学和食品检测中展现了广阔的应用前景，尤其是在血糖检测领域备受关注，成为最常用的检测方法。【实用新型内容】
[0006]本实用新型要解决的问题是，提供一种操作简单、使用方便、可高效用于生物反应器培养细胞过程中消耗葡萄糖的检测试剂盒。
[0007]为了解决这一问题，本实用新型的方案是:一种用于生物反应器培养细胞过程中消耗葡萄糖的检测试剂盒，包括盒体，在盒体内设有用于装葡萄糖标准液的试剂瓶、用于装空白对照的试剂瓶、用于装检测液的试剂瓶、多个〇.22WI1水相针头过滤器、多个一次性注射器和ELISA平板，所述盒体为硬质纸质盒体，盒体内装有多孔缓冲泡沫塑料，其上设有与各配件形状一致的固定凹槽。
[0008]所述用于葡萄糖标准液的试剂瓶和用于装空白对照的试剂瓶的规格为10mL，所述用于检测液的试剂瓶的规格为l〇〇mL，材料均为聚乙烯。
[0009]所述一次性注射器为2mL，配备10-20个，上下叠放。
[0010]所述水相针头过滤器配备10-20个，串联放置。[0〇11] 所述的ELISA平板为96孔，可拆卸为12条。
[0012]本实用新型具有的有益效果为:所需的所有试剂都存放在一个试剂盒内，体积小， 重量轻，4°C下保存即可，易于携带、存放和使用。【附图说明】
[0013]图1为本实用新型的用于生物反应器培养细胞过程中葡萄糖消耗的检测试剂盒组成示意图。【具体实施方式】
[0014]下面结合附图和【具体实施方式】对本实用新型作进一步详细说明:
[0015]如图1所示，本实用新型的用于生物反应器培养细胞过程中葡萄糖消耗的检测试剂盒，包括盒体1;盒体1内设有3个试剂瓶，用于装葡萄糖标准液的试剂瓶2,用于装空白对照的试剂瓶3，用于装检测液的试剂瓶4，还包括0.22wii水相针头过滤器5，一次性注射器6以及ELISA平板7。
[0016]所述盒体为硬质纸质盒体，盒体内装有多孔缓冲泡沫塑料，其上设有用于固定安放各配件的凹槽。[0〇17]所述装有葡萄糖标准液的试剂瓶和空白对照的试剂瓶l〇mL，所述装有检须酿的试剂瓶规格为1 〇〇mL，材料均为聚乙烯。
[0018]所述葡萄糖标准液浓度为5mM，用100mM的磷酸盐缓冲液溶解。[0〇19] 所述空白对照为pH值7.0的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐选自Na2HP〇4、NaH2P〇4和 KH2P〇4中的至少一种;所述磷酸盐的浓度为lOOmM。
[0020]所述检测液中氧化酶浓度是6U/mL，过氧化氢酶浓度是6U/mL，4-氨基安替比林浓度为0.05mg/mL，酚浓度为0.5mg/mL，用100mM的磷酸盐缓冲液溶解。
[0021]所述一次性注射器及水相针头过滤器用于去除细胞培养液中的大颗粒物质以及细胞碎片;所述水相针头过滤器直径13mm，配备10-20个，串联放置;所述一次性注射器配备 10-20个，上下叠放。
[0022]实验原理:本实用新型通过测量光吸收值，从而间接测定细胞培养液中总葡萄糖含量。葡萄糖被葡萄糖氧化酶氧化生成葡萄糖酸和H202，H202又经过氧化物酶作用分解出氧，将无色的4-氨基安替比林和苯酚偶联氧化，并缩合成红色醌亚胺，其颜色深浅与葡萄糖浓度呈正比，在500nm下的光吸收值会随葡萄糖浓度的增加而增加，利用这一原理可以间接测定葡萄糖含量。
[0023]为进一步了解本实用新型的技术内容、特征和作用，兹例举以下实施例，详细说明如下。[〇〇24]1)制作标准曲线:
[0025]在500nm波长条件下，测定一系列不同浓度的葡萄糖标准品的溶液光吸收值，记为 F;并以空白对照调零，以葡萄糖标准液的浓度C为横坐标，不同浓度的葡萄糖标准液光吸收值F为纵坐标，绘制标准曲线；
[0026]上述一系列不同浓度的葡萄糖标准品的溶液上述检测生物反应器培养细胞消耗葡萄糖的检测试剂盒中的试剂瓶2稀释获得；上述葡萄糖标准品的浓度依次为0,0.10，0?25，0?50，1?00，2?00，3?00，4?00，5?00mM〇 [〇〇27] 2)检测待测样品中葡萄糖的含量:
[0028]待测样品前处理:分别取待测生物反应器中细胞培养液和未使用的同批次培养液 2mL，用针头滤器和注射器过滤至EP管。然后向EP管中加入检测液，并保证最后体积为4mL， 37°C 孵育 lOmin。
[0029]将步骤1)中所述葡萄糖标准品替换为前处理后的待测样品，按照所述步骤1)所述方法检测前处理后的待测样品在发射波长为500nm处的光吸收值，将所述样品0D带入所述步骤1)所得标准曲线，得到所检测样品中葡萄糖的含量，进而推算出所述生物反应器培养过程中细胞消耗的葡萄糖量。
[0030]利用本实用新型的试剂盒测定生物反应器培养细胞过程中消耗葡萄糖量，具有很好的灵敏度和专一性。本实用新型检测时间仅需15min，并且可以同时对多个样品进行检测，适用于大批量样品的检测。本实用新型所需检测液为混合液，使用方便，可拆卸ELISA平板在酶标仪上检测样品，可根据样品数量进行调节，造价低，经济实惠，生产工艺简单，有利于推广使用。
[0031]以上所述的实施例仅用于说明本实用新型的技术思想及特点，其目的在于使本领域内的技术人员能够理解本实用新型的内容并据以实施，不能仅以本实施例来限定本实用新型的专利范围，即凡本实用新型所揭示的精神所作的同等变化或修饰，仍落在本实用新型的专利范围内。
【主权项】
1.一种用于生物反应器培养细胞过程中消耗葡萄糖的检测试剂盒，包括盒体(1)，其特 征在于，在盒体(1)内设有用于装葡萄糖标准液的试剂瓶(2)、用于装空白对照的试剂瓶 (3)、用于装检测液的试剂瓶(4)、多个0.22wii水相针头过滤器(5)、多个一次性注射器(6)和 ELI SA平板(7 )，所述盒体(1)为硬质纸质盒体，盒体内装有多孔缓冲泡沫塑料，其上设有与 各配件形状一致的固定凹槽。2.根据权利要求1所述的用于生物反应器培养细胞过程中消耗葡萄糖的检测试剂盒， 其特征在于，所述用于葡萄糖标准液的试剂瓶(2)和用于装空白对照的试剂瓶(3)的规格为 10mL，所述用于检测液的试剂瓶(4)的规格为lOOmL，材料均为聚乙烯。3.根据权利要求1所述的用于生物反应器培养细胞过程中消耗葡萄糖的检测试剂盒， 其特征在于，所述一次性注射器(6)为2mL，配备10-20个，上下叠放。4.根据权利要求1所述的用于生物反应器培养细胞过程中消耗葡萄糖的检测试剂盒， 其特征在于，所述水相针头过滤器(5)配备10-20个，串联放置。5.根据权利要求1所述的用于生物反应器培养细胞过程中消耗葡萄糖的检测试剂盒， 其特征在于，所述的ELISA平板为96孔，可拆卸为12条。
【文档编号】C12M1/34GK205635606SQ201620425651
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年5月10日
【发明人】陈小金, 王建华, 刘洋, 董志珍, 赵祥平, 王玉玲, 王乃福, 张俊哲, 赵丹
【申请人】天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心