一种适合板栗花粉培养的液体培养基及培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种适合板栗花粉培养的液体培养基及培养方法。
【背景技术】
[0002]花粉是具有独特结构和生物学功能的微小生命有机体，一般由2-5个细胞组成，由于其结构简单，易于离体操作，因此是研究植物细胞生长发育、物质转运、信号传递等生命过程的理想实验体系。同时花粉萌发和花粉管生长又是完成种子植物有性生殖的重要环节，这一过程是植物生殖生物学研究领域的重点。因此，建立合适的离体培养方法非常重要。
[0003]板栗是我国重要的木本粮食，雄、雌花比例非常高。大量花粉消耗了树体许多营养。有关花粉的研究至关重要。目前现存的有关板栗花粉培养的方法均为固体培养，其收集比较困难，为后续的细胞学、分子生物学及代谢组学的研究带来不便。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷，提供了一种液体培养基及相应的培养方法。
[0005]本发明的目的通过以下技术方案来具体实现:
一种适合板栗花粉培养的液体培养基，以双蒸水为溶剂，每10g溶剂中含有13_18g的蔗糖、0.005-0.0lg 硼酸、0.02-0.06g 氯化钙。
[0006]作为优选方案，上述的适合板栗花粉培养的液体培养基，每10g溶剂中含有15g的鹿糖、0.005g硼酸、0.04g氯化I丐。
[0007]优选的，所述培养基pH值为5.6-6.2。
[0008]进一步优选的，所述培养基pH值为6。
[0009]—种板栗花粉培养方法，将收集板栗花粉置于上述的花粉液体培养基中振荡培黑暗培养，即可。
[0010]优选的，收集板栗花粉时，用15%灭过菌的蔗糖水将花粉从花序上涮下来，并离心收集，并将收集到的花粉用无菌蔗糖水涮洗3遍以上。
[0011]优选的，黑暗培养时在30-38°C的摇床中振荡下培养，转速150-180转/分钟，湿度保持在85%以上，培养33-38小时。
[0012]进一步优选的，黑暗培养时，将花粉液体培养基分装于1mL离心管中。
[0013]优选的，培养时温度为34°C。
[0014]优选的，转速160转/分钟。
[0015]优选的，黑暗培养36小时。
[0016]优选的，所述板栗花粉为板栗成熟花粉或低温冷藏的板栗花粉。
[0017]本发明的有益效果:
本发明提供的培养基提高了板栗花粉离体萌发率，增加了花粉管长度，收集方便，可以广泛的应用于进一步相关科研试验中。
【具体实施方式】
[0018]以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
[0019]实施例1:
一种适合板栗培养的液体培养基及具体培养方法为:花粉培养基，以双蒸水为溶剂，包括的组分为15%的蔗糖和0.005%硼酸和0.04%氯化钙，培养基pH值为6.0 ;收集板栗成熟花粉或低温冷藏的花粉，于花粉离体萌发液体培养基中，在34°C摇床中振荡培养，转速160转/分钟，湿度保持在85%以上，进行黑暗培养36小时。
[0020]实施例2:
一种适合板栗培养的液体培养基及具体培养方法为:花粉培养基，以双蒸水为溶剂，包括的组分为13%的蔗糖和0.006%硼酸和0.02%氯化钙，培养基pH值为6.2 ;收集板栗成熟花粉或低温冷藏的花粉，于花粉离体萌发液体培养基中，在38°C摇床中振荡培养，转速150转/分钟，湿度保持在85%以上，进行黑暗培养33小时。
[0021]实施例3:
一种适合板栗培养的液体培养基及具体培养方法为:花粉培养基，以双蒸水为溶剂，包括的组分为18%的蔗糖和0.01%硼酸和0.06%氯化钙，培养基pH值为5.6 ;收集板栗成熟花粉或低温冷藏的花粉，于花粉离体萌发液体培养基中，在30°C摇床中振荡培养，转速180转/分钟，湿度保持在85%以上，进行黑暗培养38小时。
[0022]实施例4:
一种适合板栗培养的液体培养基及具体培养方法为:花粉培养基，以双蒸水为溶剂，包括的组分为15%的蔗糖和0.01%硼酸和0.03%氯化钙，培养基pH值为5.6 ;收集板栗成熟花粉或低温冷藏的花粉，于花粉离体萌发液体培养基中，在30°C摇床中振荡培养，转速180转/分钟，湿度保持在85%以上，进行黑暗培养38小时。
[0023]实施例5:
一种适合板栗培养的液体培养基及具体培养方法为:花粉培养基，以双蒸水为溶剂，包括的组分为16%的蔗糖和0.007%硼酸和0.05%氯化钙，培养基pH值为5.6 ;收集板栗成熟花粉或低温冷藏的花粉，于花粉离体萌发液体培养基中，在30°C摇床中振荡培养，转速180转/分钟，湿度保持在85%以上，进行黑暗培养38小时。
[0024]以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1.一种适合板栗花粉培养的液体培养基，其特征在于:以双蒸水为溶剂，每10g溶剂中含有13-18g的蔗糖、0.005-0.0lg硼酸、0.02-0.06g氯化钙。2.根据权利要求1所述的适合板栗花粉培养的液体培养基，其特征在于??每10g溶剂中含有15g的蔗糖、0.005g硼酸、0.04g氯化钙。3.根据权利要求1或2所述的适合板栗花粉培养的液体培养基，其特征在于:所述培养基PH值为5.6-6.2 ο4.根据权利要求3所述的适合板栗花粉培养的液体培养基，其特征在于:所述培养基pH值为6。5.一种板栗花粉培养方法，其特征在于:将收集板栗花粉置于权利要求1-4任一项所述的花粉液体培养基中振荡黑暗培养，即可。6.根据权利要求5所述的板栗花粉培养方法，其特征在于:收集板栗花粉时，用15%灭过菌的蔗糖水将花粉从花序上涮下来，并离心收集，并将收集到的花粉用无菌蔗糖水涮洗3遍以上。7.根据权利要求5所述的板栗花粉培养方法，其特征在于:黑暗培养时在30-38°C的摇床中振荡下培养，转速150-180转/分钟，湿度保持在85%以上，培养33-38小时。8.根据权利要求7所述的板栗花粉培养方法，其特征在于:黑暗培养时，将花粉液体培养基分装于1mL离心管中。9.根据权利要求6所述的板栗花粉培养方法，其特征在于:培养时温度为34°C;转速160转/分钟;黑暗培养36小时。10.根据权利要求5-9任一项所述的板栗花粉培养方法，其特征在于:所述板栗花粉为板栗成熟花粉或低温冷藏的板栗花粉。
【专利摘要】本发明公开了一种适合板栗花粉培养的液体培养基，以双蒸水为溶剂，每100g溶剂中含有13-18g的蔗糖、0.005-0.01g硼酸、0.02-0.06g氯化钙。本发明提供的培养基提高了板栗花粉离体萌发率，增加了花粉管长度，收集方便，可以广泛的应用于进一步相关科研试验中。
【IPC分类】C12N5/04
【公开号】CN105154385
【申请号】CN201510614412
【发明人】房克凤, 张伟伟, 秦岭, 谢彭雪, 张卿, 杨柳, 曹庆芹
【申请人】北京农学院
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年9月24日