一种提高大樱桃花粉萌发率的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种提高植物花粉萌发率的方法，具体设及一种一种提高大樓桃花粉 萌发率的方法。
【背景技术】
[0002] 大樓桃属于菩薇科落叶乔木果树，是中国北方落叶果树中继中国樓桃之后果实成 熟最早的果树树种，因此，早有"春果第一枝"的美誉。在调节鲜果淡季，均衡周年供应和满 足人民生活的需要方面，有着特殊的作用。一直W来，大樓桃适宜在迂宁、山东、陕西、河南、 河北等地栽培，长江中下游暖冬地区由于存在着年均气溫过高，尤其是夏季高溫、雨水多、 ±质粘重等问题而被认为是大樓桃栽种的非适宜区，"花而不实"、花器崎形、坐果率偏低、 崎形果率偏高等问题一直限制着大樓桃产区向低海拔地区推进。但是，由于长江中下游地 区春季升溫快，大樓桃生育期有望比北方适栽区明显缩短、果实成熟期提早、价格高，因而 近年来大樓桃在南方地区引种试栽正逐渐受到重视。
[0003] 大樓桃绝大多数品种自花授粉不结实，在生产上必须配置授粉树或在花期人工辅 助授粉才能获得预期的产量和品质。人工授粉所用的花粉主要是新鲜花粉，但也有用上年 采集的胆藏花粉授粉。使用胆藏花粉时，其生活力的高低直接影响人工授粉的效果。在正常 条件下，花粉在雌蕊柱头上所具有的萌发能力，就是花粉的生活力。采集的花粉和胆存的花 粉，在使用之前必须作生活力的鉴定，W评价花粉是否有授精能力。所W，对花粉生活力进 行测定，可W成为其W后分析坐果率高低的重要依据。此外，在杂交工作中，往往由于需要 应用经胆藏的花粉或经邮寄的花粉，因此在杂交前检查是否具有生活力是十分必要的。其 原理是人工创造一个适于花粉发芽的环境条件，从而鉴定花粉发芽能力的强弱。在人工创 造花粉发芽的环境条件时，其培养基的种类及配比、培养溫湿度对大樓桃花粉萌发具有十 分重要的影响，因此找到合适的上述培养条件十分必要。
【发明内容】
[0004] 本发明针对目前的问题，本发明提供一种提高大樓桃花粉萌发率的方法，可W有 效的解决大樓桃花粉的收集、胆藏和萌发等问题。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种提高大樓桃花粉 萌发率的方法，包括：
[0006] 1)花粉的采集与保存：4月初采集含巷待放的铃链花带回室内，用软毛牙刷刷下 花药，置于光滑纸面，用50目铁筛除去花丝，把鲜花药均匀地铺在60cmX 45cm的白纸上， 置于20-25°C干燥培养箱中干燥散粉，每两小时翻动一次，24h后，花药开裂散出花粉，然 后，把花药倒入100目细萝筛，把花粉筛入侣盆中，最后用毛刷将白纸上W及细萝筛上的花 粉也轻轻刷入盆中，将筛出的花粉用若干硫酸纸小袋包好标记后放入塑料盒子中，再添加 1.5-2倍的变色硅胶干燥剂，花粉要分散埋在变色硅胶中，然后密封，放入-18°C冰柜里胆 藏备用；
[0007]。花粉生活力测定
[000引固体培养基的制备：在500血的烧杯中加入IOOmL蒸馈水，再加入琼脂，在微波炉 中加热，使之完全烙解，然后加入薦糖，制成糖液。注意在熬制时要用玻璃棒不断揽拌，使其 融化均匀，还可加入微量聚乙二醇、维生素等W形成花粉粒发芽的最适环境条件。再加入少 量棚酸，W促进花粉的萌发。等到溶液冷却后，调节抑值6. 5。在熬制培养基时，应在烧杯 上的液面处用计号笔沿液面划线标记。当液面在熬制过程中因水分蒸发下降时，应及时添 加蒸馈水，W保持培养基的标准浓度，并将熬制好的培养基溶液连烧杯放入盛有35°C热水 的容器中，防止冷却凝固，W备随后使用。
[0009] 器皿消毒：发芽实验时所用的载玻片、盖玻片、綴子等都要经过酒精消毒后备用， 使用时要尽量减少和手指接触的面积，W减少污染。
[0010] 花粉的播种与活力测定：用滴管吸取培养基溶液，立即滴一滴于载玻片的中央，越 薄越好，否则透光性差，影响在显微镜下观察，当凝固后再进行花粉的播种。播花粉时，用经 酒精消毒过的头发丝薩取花粉，在培养基的表面轻轻震动。一要在培养基上划波浪线，避免 头发丝过重地接触培养基，破坏培养基的表面；二要注意尽量在培养基上均匀划线，使得花 粉的分布松散、均匀，不能密集成堆；=要注意适宜的播种数量。一般情况下，一个显微镜 视野W分布80~120粒花粉粒为宜。播好后将载玻片放置于培养皿中，该培养皿要事先在 皿内放好滤纸或棉垫并加水用于保湿。每种花粉做3组即3个载玻片。而后要在培养皿上 用玻璃铅笔标号，并进行记录，记录内容包括花粉种类、采粉时间，播种时间。用湿纱布覆 盖后加盖，放于25°C的光暗培养箱内采用光照培养和暗培养相结合的方法培养。花粉培养 15min~25min后部分花粉开始萌发，花粉萌发后花粉管长度超过花粉粒直径，花粉管开始 快速生长。培养3.化~4h后，W花粉管长度大于花粉粒直径为花粉萌发标准，每处理重复 3次，每重复随机观察3~5个视野，每视野观察花粉数30~80粒，统计花粉萌发率。
[0011] 所述的消毒处理是将实验用品用无菌纱布包裹浸入70-75%浓度的酒精中消毒 10-15S，快速取出立即浸入饱和次氯酸钢溶液中消毒6minW上，在消毒过程中轻轻晃动使 其消毒充分，最后用无菌水冲洗多次。
[001引所述的固体培养基为0. 5 %琼脂+10 %薦糖+0. 3 %棚酸+Img?L1吗I噪乙酸 +30g?L1聚乙二醇+IOmg?L1维生素Vc。
[0013] 所述的光照培养箱培养花粉是采用光照培养和暗培养相结合的方法，光照培养光 源采用日光灯，溫度控制在20°C-25°c，光照强度10Jimol.m2.S1-13Jimol.m2.S1，光照培 养20min后转为暗培养，再隔20min后切换为光照培养，如此反复。
[0014]本发明的有益效果是：本发明解决了大樓桃花粉的收集、胆藏和萌发等技术难题， 通过采用固体培养基结合光照培养和暗培养相结合的方法交替培养花粉来测定花粉发芽 情况。本发明培养基测定的花粉具有良好的萌发率，用本发明的方法对大樓桃的花粉进行 培养，具有花粉萌发时间短、萌发率高等优点，具有较好的应用前景。
【具体实施方式】
[0015] 下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，W使本发明的优点和特征能更易于被 本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
[0016] 实施时间：2015年4月-2015年8月
[0017] 实施地点：镇江农科院华阳园区果树示范区
[0018](一）具体实施例：
[0019] 实验品种为4年生'布鲁克斯'大樓桃。4月初采集含巷待放的铃链花带回室 内，用软毛牙刷刷下花药，置于光滑纸面，用50目铁筛除去花丝，把鲜花药均匀地铺在 60cmX45cm的白纸上，置于20-25°C干燥培养箱中干燥散粉，每两小时翻动一次，24h后，花 药开裂散出花粉，然后，把花药倒入100目细萝筛，把花粉筛入侣盆中，最后用毛刷将白纸 上W及细萝筛上的花粉也轻轻刷入盆中；
[0020] 采用固体培养法进行花粉萌发条件的筛选。其中固体培养基的配制方法为：在 SOOmL的烧杯中加入IOOmL蒸馈水，再加入琼脂，在微波炉中加热，使之完全烙解，然后加入 糖液，再加入少量棚酸，在其中加入微量聚乙二醇、维生素W形成花粉粒发芽的最适环境条 件，促进花粉的萌发，等到溶液冷却后，调节pH值6. 5,在熬制培养基时，应在烧杯上的液面 处用计号笔沿液面划线标记；当液面在熬制过程中因水分蒸发下降时，应及时添加蒸馈水， W保持培养基的标准浓度，并将熬制好的培养基溶液连烧杯放入盛有35°C热水的容器中， 防止冷却凝固，W备随后使用；
[002。 花粉培养W10%薦糖、棚酸0. 1 %、0. 5%琼脂为基本培养基，抑值6. 5,溫度25°C， 在凹玻片上用滴管滴上配好的培养基，然后用头发丝条播花粉，播好后放入铺有加湿滤纸 的消毒处理好的培养皿中，然后放于25°C的光暗培养箱内采用光照培养和暗培养相结合的 方法培养。花粉培养15min~25min后部分花粉开始萌发，花粉萌发后花粉管长度超过花 粉粒直径，花粉管开始快速生长。培养3.化~4h后，W花粉管长度大于花粉粒直径为花粉 萌发标准，每处理重复3次，每重复随机观察3~5个视野，一个显微镜视野分布80~120 粒花粉粒，每视野观察花粉数30~80粒，统计花粉萌发率。
[002引（二）、实施处理：
[002引实验（1):^不同薦糖浓度（0,5%，10%，15%)+0.1%&803+0.5%琼脂为培养基， 探讨薦糖浓度变化对花粉萌发的影响，确定最佳薦糖浓度；
[0024] 实验似：^最佳薦糖浓度+不同蝴〇3浓度（0,0.1%，0.3%，0.5%)+0.5%琼脂 为培养基，探讨H3BO3因子对花粉萌发的影响，确定最佳H3BO3浓度；
[0025] 实验（3) :W最佳薦糖浓度+最佳H3BO3浓度+0. 5 %琼脂+吗I噪乙酸不同浓度（0， 0. 5,1，1. 5, 2mg?L1)为培养基，探