本发明涉及植物组织培养领域，具体地指一种基于改良培养基的“阿希蕉”培育方法。
背景技术：
阿希蕉(musarubrawall.exkurz)是姜目芭蕉科芭蕉属的草本植物，整株不超过1.5米。花序直立黄色，花苞色红鲜艳；果序直立紫红色，果实小巧饱满，冲天长出，观赏价值高。
目前，阿希蕉分布于缅甸、泰国和大陆云南等地，生长于海拔1,000米至1,270米的地区，多生长在阴湿沟谷底和半沼泽地，目前尚未由人工引种栽培。
目前，对阿希蕉的研究较少，基本上仅限于种质资源的搜集、分类等方面，大多为野生状态，无大规模繁育及种植，关于其育种及繁育等方面的研究尚无报道。采用传统组培的配方培育过程中，由于在芽分化诱导阶段的细胞分裂素过高，导致培养过程中呈现细胞增多但多为白色稀疏状，渐趋玻璃化，难以分化出不定芽；从而使其繁殖效率非常低，苗株数量极少，无法满足观赏价值的市场需求和遗传育种研究需要，
技术实现要素：
本发明针对现有组培的配方培育无法使“阿希蕉”外植体形成芽分化和增殖的缺陷，提供了一种基于改良培养基的“阿希蕉”培育方法，该方法通过对普通芭蕉属组培技术的改进，进行高效繁育，提高成活率和产量。
为实现上述目的，本发明提供的一种基于改良培养基的阿希蕉培育方法，包括以下步骤：
1)外植体消毒：
选取健康的阿希蕉花苞，剥除大的花苞片后进行表面消毒，在无菌条件下将阿希蕉花苞剥至长度为1～3cm的花苞；
2)愈伤组织诱导：
将长度为1～3cm的花苞横切成厚度均一的薄片，并将薄片置于愈伤组织诱导培养基上，进行愈伤组织诱导培养，得到愈伤组织；
3)芽分化培养：
将愈伤组织分成均一小块，转移至芽分化培养基上，进行光暗交替培养，分化得到多芽体；其中，芽分化培养基为ms+1.0～5.0mg/l6-ba+0.1～0.4mg/lnaa；所述多芽体呈多芽体状态，芽点多，芽分化率90％以上，而目前已知方法中，芽分化培养基的使用导致无法诱导出健康的芽体，表现在芽点少，芽体稀松，呈现玻璃化，无法进行芽增殖培养，随后逐步解体、枯死。
4)芽增殖培养
将多芽体切割成均一的小块芽，并将小块芽转移至芽增殖培养基上进行光暗交替培养得到不定芽，其中，芽增殖培养基为ms+1.0～3.0mg/l6-ba+0.1～0.3mg/lnaa；在芽增殖培养过程中，不定芽逐渐增多，生长健康，表现为变粗，伸长，芽增殖效率可达5～30株/愈伤组织块。
5)待不定芽长至2～3cm后将其切下，转移至生根培养基上培养，不定芽生根得到生根苗；其中，生根培养基配方为ms+1.0～3.0mg/liba+0.1～0.3mg/lnaa；在生根过程中，培养8～12d不定芽基部开始膨大，并逐渐长出凸起状的根原基，随着培养时间的推进，继而长出白色根并逐渐伸长，约40d左右可长出较长的根系，得到生根苗，生根诱导率100％；
6)炼苗和移栽
将生根苗放置于温室炼苗，然后将其用水清洗去掉根系上所粘附的培养基，栽入的基质中，用保鲜膜覆盖，每天定期喷水保湿，1周后去掉保鲜膜进行正常栽培管理。
进一步地，所述步骤2)中，愈伤组织诱导培养基ms+0.2mg/ltdz+0.2mg/lzt+1.0mg/l的生物素+100mg/l谷氨酰胺+40g/l糖。
再进一步地，所述步骤2)中，继代培养的条件为：在温度为23～28℃条件下黑暗培养28～32d。
再进一步地，所述步骤3)中，光暗交替培养的条件为：在温度为23～28℃条件下光暗交替培养35～45d。
再进一步地，芽分化培养基为ms+3.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa。
再进一步地，所述步骤4)中，光暗交替培养的条件为：在温度为23～28℃条件下光暗交替培养35～45d。
再进一步地，所述步骤4)中，芽增殖培养基为ms+2.0mg/l6-ba+0.1mg/l的naa。
再进一步地，所述光暗交替培养中，光培养时间：16h/d，暗培养时间：8h/d。
再进一步地，所述步骤6)中，基质是由椰糠和蛭石组成，椰糠和蛭石重量比为＝1：1～3。
本发明的有益效果在于：
本发明实现了“阿希蕉”组培方法的成功繁育，较好的保持母本性状，并且能够提高成活率，从而提高产量，移栽成活率可达95％。本发明筛选获得芽诱导和分化的最佳配方，分别是ms+3.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa和ms+2.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa，诱导效率较现有组培配方的使用增加了10％～36.7％，芽分化效率较现有组培配方提高了0.5～5倍。
具体实施方式
为了更好地解释本发明，以下结合具体实施例进一步阐明本发明的主要内容，但本发明的内容不仅仅局限于以下实施例。
实施例1：
基于改良培养基的阿希蕉培育方法，该方法包括以下步骤：
(1)外植体消毒
将大的花苞片逐个剥除至剩余花苞长度为9～10cm时，在超净工作台前用70％酒精进行表面消毒后，转入超净工作台，用尖嘴镊子继续剥除花苞片，每剥除一层花苞用70％酒精喷洒表面，剥至长度约为1～3cm的花苞；
(2)愈伤组织诱导
将长度约为1～3cm的花苞横切成厚度均一的薄片(厚度为1～2mm)，用手术刀轻轻将薄片转移至含愈伤组织诱导培养基上，在温度为26℃条件下黑暗条件培养28～32d，每两周继代一次得到愈伤组织(薄片在愈伤组织诱导培养基上，约一周左右开始膨大，30d左右长出愈伤组织，诱导率90％)；其中，愈伤组织诱导培养基ms+0.2mg/ltdz+0.2mg/lzt+1.0mg/l生物素+100mg/l谷氨酰胺+40g/l糖；
(3)芽分化培养
将愈伤组织分成均一小块，转移至芽分化培养基上，在温度为26℃条件下进行光暗交替培养35～45d，每两周继代一次，约30d左右分化出不定芽，形成多芽体，芽点多，芽分化率90％；其中，芽分化培养基为ms+3.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa；光暗交替培养中，光培养时间：16h/d，暗培养时间：8h/d；
(4)芽增殖培养
将多芽体切割成均一小块，并将小块芽接至芽增殖培养基上，在温度为23～28℃条件下光暗交替培养35～45d，芽体逐渐增多，变粗，伸长，得到不定芽；芽增殖效率达25～30株/愈伤组织块；其中，芽增殖培养基为ms+2.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa；
(5)生根诱导培养
待不定芽长至2～3cm后将其切下，转移至生根培养基上培养，不定芽生根得到生根苗；其中，生根培养基配方为ms+3.0mg/liba+0.3mg/lnaa；在生根过程中，培养8～12d不定芽基部开始膨大，并逐渐长出凸起状的根原基，随着培养时间的推进，继而长出白色根并逐渐伸长，约40d左右可长出较长的根系，得到生根苗，生根诱导率100％；
(6)炼苗和移栽将培养瓶打开瓶盖，将生根苗放置于温室炼苗，放置于温室炼苗1周左右，将组培苗取出用自来水清洗去掉根系上所粘附的培养基，栽入椰糠：蛭石重量比＝1：1的基质中，用保鲜膜覆盖，每天定期喷水保湿，约1周后去掉保鲜膜进行正常栽培管理。
实施例2
基于改良培养基的阿希蕉培育方法，该方法包括以下步骤：
(1)外植体消毒
将大的花苞片逐个剥除至剩余花苞长度为9～10cm时，在超净工作台前用70％酒精进行表面消毒后，转入超净工作台，用尖嘴镊子继续剥除花苞片，每剥除一层花苞用70％酒精喷洒表面，剥至长度约为1～3cm的花苞；
(2)愈伤组织诱导
将长度约为1～3cm的花苞横切成厚度均一的薄片(厚度为1～2mm)，用手术刀轻轻将薄片转移至含愈伤组织诱导培养基上，在温度为26℃条件下黑暗条件培养28～32d，每两周继代一次得到愈伤组织(薄片在愈伤组织诱导培养基上，约一周左右开始膨大，30d左右长出愈伤组织，诱导率90％)；其中，愈伤组织诱导培养基ms+0.2mg/ltdz+0.2mg/lzt+1.0mg/l生物素+100mg/l谷氨酰胺+40g/l糖；
(3)芽分化培养
将愈伤组织分成均一小块，转移至芽分化培养基上，在温度为26℃条件下进行光暗交替培养35～45d，每两周继代一次，约40d左右分化出不定芽，形成多芽体，芽点多，芽分化率60％；其中，芽分化培养基为ms+1.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa；光暗交替培养中，光培养时间：16h/d，暗培养时间：8h/d；
(4)芽增殖培养
将多芽体切割成均一小块，并将小块芽接至芽增殖培养基上，在温度为26℃条件下光暗交替培养35～45d，芽体逐渐增多，变粗，伸长，得到不定芽；芽增殖效率达15株/愈伤组织块；其中，芽增殖培养基为ms+1.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa；
(5)生根诱导培养
待不定芽长至2～3cm后将其切下，转移至生根培养基上培养，不定芽生根得到生根苗；其中，生根培养基配方为ms+1.0mg/liba+0.1mg/lnaa；在生根过程中，培养8～12d不定芽基部开始膨大，并逐渐长出凸起状的根原基，随着培养时间的推进，继而长出白色根并逐渐伸长，约40d左右可长出较长的根系，得到生根苗，生根诱导率100％；
(6)炼苗和移栽将培养瓶打开瓶盖，将生根苗放置于温室炼苗，放置于温室炼苗1周左右，将组培苗取出用自来水清洗去掉根系上所粘附的培养基，栽入椰糠：蛭石重量比＝1：1的基质中，用保鲜膜覆盖，每天定期喷水保湿，约1周后去掉保鲜膜进行正常栽培管理。
实施例3
基于改良培养基的阿希蕉培育方法，该方法包括以下步骤：
(1)外植体消毒
将大的花苞片逐个剥除至剩余花苞长度为9～10cm时，在超净工作台前用70％酒精进行表面消毒后，转入超净工作台，用尖嘴镊子继续剥除花苞片，每剥除一层花苞用70％酒精喷洒表面，剥至长度约为1～3cm的花苞；
(2)愈伤组织诱导
将长度约为1～3cm的花苞横切成厚度均一的薄片(厚度为1～2mm)，用手术刀轻轻将薄片转移至含愈伤组织诱导培养基上，在温度为26℃条件下黑暗条件培养28～32d，每两周继代一次得到愈伤组织(薄片在愈伤组织诱导培养基上，约一周左右开始膨大，30d左右长出愈伤组织，诱导率90％)；其中，愈伤组织诱导培养基ms+0.2mg/ltdz+0.2mg/lzt+1.0mg/l生物素+100mg/l谷氨酰胺+40g/l糖；
(3)芽分化培养
将愈伤组织分成均一小块，转移至芽分化培养基上，在温度为26℃条件下进行光暗交替培养35～45d，每两周继代一次，约35d左右分化出不定芽，形成多芽体，芽点多，芽分化率80％；其中，芽分化培养基为ms+2.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa；光暗交替培养中，光培养时间：16h/d，暗培养时间：8h/d；
(4)芽增殖培养
将多芽体切割成均一小块，并将小块芽接至芽增殖培养基上，在温度为26℃条件下光暗交替培养35～45d，芽体逐渐增多，变粗，伸长，得到不定芽；芽增殖效率达5株/愈伤组织块；其中，芽增殖培养基为ms+3.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa；
(5)生根诱导培养
待不定芽长至2～3cm后将其切下，转移至生根培养基上培养，不定芽生根得到生根苗；其中，生根培养基配方为ms+1.0mg/liba+0.1mg/lnaa；在生根过程中，培养8～12d不定芽基部开始膨大，并逐渐长出凸起状的根原基，随着培养时间的推进，继而长出白色根并逐渐伸长，约40d左右可长出较长的根系，得到生根苗，生根诱导率100％；
(6)炼苗和移栽将培养瓶打开瓶盖，将生根苗放置于温室炼苗，放置于温室炼苗1周左右，将组培苗取出用自来水清洗去掉根系上所粘附的培养基，栽入椰糠：蛭石重量比＝1：1的基质中，用保鲜膜覆盖，每天定期喷水保湿，约1周后去掉保鲜膜进行正常栽培管理。
实施例4
基于改良培养基的阿希蕉培育方法，该方法包括以下步骤：
(1)外植体消毒
将大的花苞片逐个剥除至剩余花苞长度为9～10cm时，在超净工作台前用70％酒精进行表面消毒后，转入超净工作台，用尖嘴镊子继续剥除花苞片，每剥除一层花苞用70％酒精喷洒表面，剥至长度约为1～3cm的花苞；
(2)愈伤组织诱导
将长度约为1～3cm的花苞横切成厚度均一的薄片(厚度为1～2mm)，用手术刀轻轻将薄片转移至含愈伤组织诱导培养基上，在温度为26℃条件下黑暗条件培养28～32d，每两周继代一次得到愈伤组织(薄片在愈伤组织诱导培养基上，约一周左右开始膨大，30d左右长出愈伤组织，诱导率90％)；其中，愈伤组织诱导培养基ms+0.2mg/ltdz+0.2mg/lzt+1.0mg/l生物素+100mg/l谷氨酰胺+40g/l糖；
(3)芽分化培养
将愈伤组织分成均一小块，转移至芽分化培养基上，在温度为26℃条件下进行光暗交替培养35～45d，每两周继代一次，约40d左右分化出不定芽，形成多芽体，芽点多，芽分化率53.3％；其中，芽分化培养基为ms+4.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa；光暗交替培养中，光培养时间：16h/d，暗培养时间：8h/d；
(4)芽增殖培养
将多芽体切割成均一小块，并将小块芽接至芽增殖培养基上，在温度为26℃条件下光暗交替培养35～45d，芽体逐渐增多，变粗，伸长，得到不定芽；芽增殖效率达20株/愈伤组织块；其中，芽增殖培养基为ms+3.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa；
(5)生根诱导培养
待不定芽长至2～3cm后将其切下，转移至生根培养基上培养，不定芽生根得到生根苗；其中，生根培养基配方为ms+1.0mg/liba+0.1mg/lnaa；在生根过程中，培养8～12d不定芽基部开始膨大，并逐渐长出凸起状的根原基，随着培养时间的推进，继而长出白色根并逐渐伸长，约40d左右可长出较长的根系，得到生根苗，生根诱导率100％；
(6)炼苗和移栽将培养瓶打开瓶盖，将生根苗放置于温室炼苗，放置于温室炼苗1周左右，将组培苗取出用自来水清洗去掉根系上所粘附的培养基，栽入椰糠：蛭石重量比＝1：1的基质中，用保鲜膜覆盖，每天定期喷水保湿，约1周后去掉保鲜膜进行正常栽培管理。
其它未详细说明的部分均为现有技术。尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。