专利名称：改良罗氏快速培养基及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种改良罗氏快速培养基，还涉及一种培养基的制 备方法。
技术背景目前我国普遍使用一种被称之为"罗氏培养基"的固体结核菌 培养基来对结核菌进行体外人工分离培养，这些记载在福州部队总医院编、朱忠勇、陈之航主编、上海科学技术出版社1978年4月 出版的《临床医学检验》第454页上。由于现有的固体结核菌培养 基均是靠各医院去配制而无现成产品可购，这就需要院方单独为此 添置一套相应的生产设备，既加大了医院的设备开支，又相应增加 了配制工作量。经检索中国专利，专利申请号98 1 10068其技术 方案是由基础物质、能量物质、植物生长刺激物质混合配制而成， 基础物质中有磷酸二氢钾、硫酸镁(MgS0 。
7HZo )、构榜酸镁、 柠檬酸铁按、天门冬酞胺、中性甘油、马铃薯粉、新鲜鸡蛋液、2 % 孔雀绿水溶液、水、动物血清，能量物质中有辅酶A 、三磷酸腺昔、 细胞色素丙，植物生长刺激物质中有Q—蔡乙酸，每1000克结核 菌快速培养基中各组分的含量为磷酸二氢钾1.36 1.4克、新鲜 鸡蛋液560 600克、硫酸镁0. 136 0. 14克2 %孔雀绿水溶液 11 13克构榜酸镁0.3 0.4克水300 340克柠檬酸铁钱 0.028 0.03克动物血清56 60克天门冬酞胺2.06 2. 1克辅 酶A0.4 0.8克中性甘油6 8克三磷酸腺昔0.04 0. 08克马铃薯粉17 17. 5克细胞色素丙0. 045 0. 075克。 一蔡乙酸0. 05 0. 1毫克。其步骤是A、制糊将17 17. 5克的马铃薯粉加150 170克水后，置于沸水浴中加热，时加搅拌，使成均匀糊状，自然降 至室温后备用；B、混合调配将1.36 1.4克的磷酸二氢钾、 0. 136 0. 14克的硫酸镁、0.3 0.4克的构栋酸镁、0. 028 0. 03克 的柠檬酸铁钱、2.06 2. 1克的天门冬酞胺、6 8克的中性甘油加 150 170克水后，置于沸水浴中加热溶解，待冷至50 。C以下时， 加入560 600克的新鲜鸡蛋液、56 60克的动物血清、0. 4 0. 8 克的辅酶A、 0.04 0.08克的三磷酸腺昔、0.045 0.075克细胞 色素丙、0.05 0. 1毫克的Q —蔡乙酸，充分搅拌均匀后，再加入 167 187.5克的马铃薯粉及11 一 13克的2 %孔雀绿水溶液， 并经充分搅匀后得1000克混合物；C 、分装及密封；将混合物分 装于大试管中，每管分装5克，置成长斜面后，熔封；D 、灭菌； 采用血清凝固器对大试管进行灭菌，灭菌条件为头日，85 °C ， 30分钟；次日，80°C ， 30分钟；第三是，80 。C ， 30分钟。 由以上所述可知，固体结核菌培养基的现有配制过程较为复杂和麻 烦，故医院只能根据近期内固体结核菌培养基的大致用量予先配制 一些备用，但是，全国几千家医院各自分散配制的固体结核菌培养 基，均存在着质量标准不一致、成品率不高、不易长期贮存及贮存 期稍长因水份散失、药物分解而使检测结果不准的缺陷。临床检测是发现现有的结核菌培养基存在以下缺陷1 、由于现有的固体结 核培养基保藏在大试管中，管口用橡皮塞塞紧，故该培养基被密封的程度较差，其内的水份易散失，以至该培养基的贮藏期很短(仅3个月)，这样便不能通过工业化生产手其培养基中需有多种营养物 质，而如上所述可知，现有的固体结核菌培养基中营养物质的种类 少，另外其内也没有能加快结核菌新陈代谢活动以提高结核菌生长 繁殖速度的能量物质和植物生长刺激物质，这样使得结核菌在现有 的固体结核菌培养基中不能进行很好地生长繁殖，分裂周期长达12 16小时，要4 6周方能看到菌落。3 、有些液体培养基配方 复杂，方法繁琐，罗氏培养基需35天。因此，使用现有的结核菌 培养基来对结核菌进行体外人工分离培养时，其检测速度相当慢， 阳性检出率低，不利于结核病的早期诊断和治疗。 发明内容本发明的目的在于提供一种简单，实现快速培养结核杆菌培养 基，解决了临床早期诊断及有效地治疗的问题。本发明的另一目的是提供了一种方法易行，操作方便的一种改 良罗氏快速培养基的制备方法。为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施一种改良罗氏快速培养基，它由下述重量配比的原料制成的培 养基磷酸二氢钾(无水)0.96g，天门冬素(天门冬酰胺)0.27g， 枸橼酸0.21g，硫酸镁(MgS04、 7H20) 0.084g，纯甘油(中性) 4. 2ml， 2. 4 — 二氯苯氧乙酸钠0. lg， 6 —糠氨基嘌呤 0. lg，蒸馏水120 ml，马铃薯粉0. 6g，新鲜鸡蛋3-4个，10g/L的孔 雀绿溶液8 ml。一种改良罗氏快速培养基的制备方法，该方法包括下列步骤A、 将"磷酸二氢钾(无水)0.96g，天门冬素(天门冬酰胺) 0. 27g,枸橼酸镁0. 21g，硫酸镁(MgS04、 7H20)0. 084g，纯甘油(中 性4. 2ml， 2. 4 — 二氯苯氧乙酸钠0. lg， 6 —糠氨基嘌呤 0. lg和蒸馏水120ml，"的各成份混合，置沸水中加热溶解；B、 加入马铃薯粉，边加边搅拌，注意勿结成块，并继续在沸水 浴中加热半小时，时加搅拌；C、 待冷至65'C时加入全蛋液200ml及10g/L孔雀绿溶液8ml，充 分混匀。D、 分装无菌试管，每管约5 6ml，塞上塞；E、 置血清凝固器内制成斜面，经90。C1小时或高压(103. 43kpa)，灭菌20分钟后，再作无菌试验后备用。一种改良罗氏快速培养基，所述的本培养基ra为6. 0左右；一种改良罗氏快速培养基的使用方法，该方法包括下列步骤把前处理好的标本直接接种2 3滴，盖满斜面，经37。C培养，每天观查生长情况。约二 三天就可见到针尖样细小菌落，六 七天就可见到成形菌落，七 十四天就可见到丰满的菌落。即可做菌型鉴定和药敏试验。本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果，配方合理，方 法易行，操作方便，检测快速、准确可靠，价格低廉，通过临床实 验证明，尤其适用于基层医院，具有良好的社会和经济效益。
具体实施方式
一种改良罗氏快速培养基，它由下述重量配比的原料制成的培养基磷酸二氢钾(无水)0.96g，天门冬素(天门冬酰胺)0.27g， 枸橼酸镁0.21g，硫酸镁(MgS04、 7H20) 0.084g，纯甘油(中性) 4.2ml，2.4—二氯苯氧乙酸钠0. lg，6—糠氨基嘌呤0. lg，蒸馏水 120 ml，马铃薯粉0. 6g，新鲜鸡3-4个，10g/L的孔雀绿溶液8 ml; 一种改良罗氏快速培养基的制备方法，该方法包括下列步骤A、 将"磷酸二氢钾(无水)0.96g，天门冬素(天门冬酰胺) 0.27g，枸橼酸镁0. 21g，硫酸镁(MgS04、 7H20) 0. 084g，纯甘油(中性)4. 2ml， 2. 4—二氯苯氧乙酸钠O. lg， 6—糠氨基嘌吟 0. lg和蒸馏水120ml"的各成分混合，置沸水中加热溶解；B、 加入马铃薯粉，边加边搅拌，注意勿结成块，并继续在沸水 浴中加热半小时，时加搅拌；C、 待冷至65。C时加入全蛋液200ml及10g/L孔雀绿溶液8ml，充 分混匀。D、 分装无菌试管，每管约5 6ml，塞上塞；E、 置血清凝固器内制成斜面，经9(TC1小时或高压(103. 43kpa)，灭菌20分钟后，再作无菌试验后备用。一种改良罗氏快速培养基，所述的本培养基PH为6. 0左右；一种改良罗氏快速培养基的使用方法，该方法包括下列步骤把前处理好的标本直接接种2 3滴，盖满斜面，经37"C培养，每天观査生长情况。约二 三天就可见到针尖样细小菌落，六 七天就可见 到成形菌落，七 十四天就可见到丰满的菌落。即可做菌型鉴定和 药敏试验。本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果，配方合理，方 法易行，操作方便，检测快速、准确可靠，价格低廉，通过临床实 验证明，尤其适用于基层医院，具有良好的社会和经济效益。
权利要求
1. 一种改良罗氏快速培养基，其特征在于它由下述重量配比的原料制成的培养基磷酸二氢钾(无水)0.96g，天门冬素(天门冬酰胺)0.27g，枸橼酸镁0.21g，硫酸镁(MgSO4、7H2O)0.084g，纯甘油(中性)4.2ml，2.4-二氯苯氧乙酸钠0.1g，6-糠氨基嘌呤0.1g，蒸馏水120ml，马铃薯粉0.6g，新鲜鸡蛋3-4个，10g/L的孔雀绿溶液8ml。
2 、一种实现权利要求1所述的一种改良罗氏快速培养基的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤A、 将"磷酸二氢钾(无水)0.96g,天门冬素(天门冬酰胺) 0. 27g，枸橼酸镁0. 21g，硫酸镁(MgS04、 7H20) 0. 084g，纯甘油(中 性4. 2ml， 2. 4 — 二氯苯氧乙酸钠0. lg， 6 —糠氨基嘌呤 0.1g和蒸馏水120 ml"的各成份混合，置沸水中加热溶解；B、 加入马铃薯粉，边加边搅拌，注意勿结成块，并继续在沸水 浴中加热半小时，时加搅拌；C、 待冷至65r时加入全蛋液200ml及10g/L孔雀绿溶液8ml，充分混匀；D、 分装无菌试管，每管约5 6ml，塞上塞；E、 置血清凝固器内制成斜面，经9(TC1小时或高压(103. 43kpa)， 灭菌20分钟后，再作无菌试验后备用。
3、根据权利要求1所述的一种改良罗氏快速培养基，其特征在于所述的本培养基ra为6. 0左右。
4、 一种实现权利要求1所述的一种改良罗氏快速培养基的方法，其特征在于该方法包括下列步骤把前处理好的标本直接接种2 3滴，盖满斜面，经37'C培养，每天观査生长情况。约二 三天就可见到针尖样细小菌落，六 七天就可见到成形菌落，七 十四天 就可见到丰满的菌落。即可做菌型鉴定和药敏试验。
全文摘要
本发明公开了一种改良罗氏快速培养基及其制备方法一、由下述原料制成的培养基基础液(磷酸二氢钾，天门冬素，枸橼酸镁，硫酸镁，纯甘油，2.4-二氯苯氧乙酸钠，6-糠氨基嘌呤和蒸馏水)、马铃薯粉、新鲜鸡蛋和孔雀绿溶液。二、培养基的制备方法，该方法包括下列步骤A、将“基础液”的各成份混合，置沸水中加热溶解；B、加入马铃薯粉，边加边搅拌，注意勿结成块，并继续在沸水浴中加热半小时，时加搅拌；C、待冷至65℃时加入全蛋液及孔雀绿溶液，充分混匀；D、用无菌试管分装，塞上塞；E、置血清凝固器内制成斜面，经90℃1小时或高压20分钟，灭菌，再作无菌试验后备用。
文档编号C12Q1/04GK101280337SQ20081009981
公开日2008年10月8日 申请日期2008年5月25日 优先权日2008年5月25日
发明者刘照云 申请人:深圳市伯劳特生物制品有限公司