一种苦瓜离体快速繁殖的方法
【专利摘要】本发明公开了一种苦瓜离体快速繁殖的方法，通过对获取的大田栽培的苦瓜苗顶芽或腋芽作为外植体，接种于MS+6-BA的培养基中，诱导出芽后，切取诱导出的芽接种于MS+6-BA的培养基中，使芽增殖并伸长，取株高1.5cm左右的健壮的无根苗，转入1/2MS+IAA的生根培养基中，10d左右即可出现不定根，在生根培养基中培养25d左右有大量不定根产生，进行炼苗，炼苗3d后，移栽至土壤获得再生植株。本发明技术方法使苦瓜苗的繁殖速度加快，每代苦瓜苗的繁殖只需要1～2个月时间，为加快培育苦瓜新品种提供了技术支持。
【专利说明】一种苦瓜离体快速繁殖的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于农业栽培【技术领域】，具体涉及一种苦瓜离体快速繁殖的方法。
【背景技术】
[0002]苦瓜又名凉瓜,学名Momordica charantia L.是葫芦科苦瓜属蔬菜作物，因其具有明显的降血糖、降血脂、抗炎、抑制组织癌细胞生长、利尿活血和消炎退热等药理作用，越来越受到人们的喜爱。作为一种蔬菜作物和药用植物，苦瓜有着重要的研究价值，对其进行抗病、延迟成熟和品质改良的研究具有重要的理论和实践意义。然而目前苦瓜栽培依赖于种子育苗，具有繁种成本高、育苗速度慢、成苗率低等缺点，育成一个新的苦瓜品种更是需要5年以上的时间，优良品种种子供不应求，价格昂贵。
[0003]目前关于苦瓜的研究主要集中在大田栽培方法、遗传多样性、苦瓜营养价值和药用价值等方面，有关组织培养方面国内外曾做了一些研究工作，但进展不显著。关于快速繁殖研究主要停留在取无菌苗的胚轴或子叶为外植体或由外植体诱导出愈伤组织再诱导出芽进行离体再生繁殖，总的来看，苦瓜外植体易于形成愈伤组织而再生不定芽较困难。此夕卜，不同研究者所得的结论差异较大，可重复性差。目前还缺乏对采用苦瓜大田正常植株顶芽或腋芽作为外植体进行组织培养技术的研究，这一研究的成功再应用于苦瓜杂交育种，将能大大缩短苦瓜杂交育种的年限，有力推动现代生物技术在苦瓜上的应用。
【发明内容】
[0004]本发明旨在提供一种苦瓜离体快速繁殖的方法，该技术目的在于解决苦瓜杂交育种时亲本需要反复纯化、耗时长的问题。
[0005]本发明通过以下技术方案实现:
[0006]一种苦瓜离体快速繁殖的方法，包含以下步骤:
[0007]I)大田中选取生长健壮的苦瓜植株的顶芽或腋芽作为外植体，并进行处理；
[0008]2)将消毒好的外植体接种于MS+6-BA的培养基中，温度27± I°C，光照时间16h/d，光照强度15001x,十天后诱导出芽；
[0009]3)切取诱导出的芽接种于MS+6-BA的培养基中，使芽增殖并伸长；
[0010]4)取株高1.5cm左右的健壮的无根苗，转入1/2MS+IAA的生根培养基中，15d左右出现不定根；
[0011]5)在生根培养基中培养25d后产生大量不定根，进行炼苗，炼苗3d后，移栽至土壤获得再生植株。
[0012]本发明步骤(I)对顶芽或腋芽的处理方法为:用75%的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，切去伤口部位，再用0.1 %的HgCl2溶液消毒7?lOmin，无菌水冲洗6?8次，切去伤口部位后用无菌纸巾吸干表面水分；
[0013]本发明步骤⑵中培养基中6-BA的浓度为0.5?lmg/L ；
[0014]本发明步骤(3)中培养基中6-BA的浓度为1.0?2.0mg/L ；
[0015]本发明步骤(4)所述的生根培养基中IAA的浓度为0.5?1.0mg/L。
[0016]本发明的有益效果为:1)繁殖速度快，通常育成一个苦瓜品种需要5年以上，而应用高效的苦瓜离体快繁技术结合田间杂交技术选育苦瓜新品种只需I至2年时间；2)已建立的苦瓜组织培养体系多是采用消毒后的种子萌发几天后的胚轴或子叶等作为外植体，现有的苦瓜组培体系无法将大田中具有优良性状的苦瓜品种保留下来，为苦瓜的离体繁殖提供了技术基础，具有开拓创新的意义。
【具体实施方式】
[0017]下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
[0018]实施例1
[0019]一种苦瓜离体快速繁殖的方法，通过以下步骤完成:
[0020]I)大田中选取生长健壮的苦瓜植株的顶芽作为外植体，用75%的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，切去伤口部位，再用0.1%的HgCl2溶液消毒7-10min，无菌水冲洗6?8次,切去伤口部位后用纸巾吸干表面水分；
[0021]2)将消毒好的顶芽外植体接种于MS+6-BA0.5mg/L的培养基中,温度27±1°C,光照时间16h/d，光照强度15001x，10d后诱导出芽；
[0022]3)切取诱导出的芽接种于MS+6-BA1.0mg/L的培养基中，使芽增殖并伸长；
[0023]4)取株高1.5cm左右的健壮的无根苗，转入1/2MS+IAA0.5mg/L的生根培养基中，15d左右即可出现不定根；
[0024]5)在生根培养基中培养25d左右有大量不定根产生，进行炼苗，炼苗3d后，移栽至土壤获得再生植株。
[0025]实施例2
[0026]一种苦瓜离体快速繁殖的方法，通过以下步骤完成:
[0027]I)大田中选取生长健壮的苦瓜植株的腋芽作为外植体，用75%的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，切去伤口部位，再用0.1%的HgCl2溶液消毒7-10min，无菌水冲洗6?8次,切去伤口部位后用纸巾吸干表面水分；
[0028]2)将消毒好的腋芽外植体接种于MS+6-BA0.8mg/L的培养基中，温度27±1°C，光照时间16h/d，光照强度15001x，10d后诱导出芽；
[0029]3)切取诱导出的芽接种于MS+6-BA1.5mg/L的培养基中，使芽增殖并伸长；
[0030]4)取株高1.5cm左右的健壮的无根苗，转入1/2MS+IAA0.8mg/L的生根培养基中，1d左右即可出现不定根；
[0031]5)在生根培养基中培养20d左右有大量不定根产生，进行炼苗，炼苗3d后，移栽至土壤获得再生植株。
[0032]实施例3
[0033]一种苦瓜离体快速繁殖的方法，通过以下步骤完成:
[0034]I)大田中选取生长健壮的苦瓜植株的腋芽作为外植体，用75%的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，切去伤口部位，再用0.1%的HgCl2溶液消毒7-10min，无菌水冲洗6?8次,切去伤口部位后用纸巾吸干表面水分；
[0035]2)将消毒好的腋芽外植体接种于MS+6-BA1.0mg/L的培养基中，温度27±1°C，光照时间16h/d，光照强度15001x，十天后诱导出芽；
[0036]3)切取诱导出的芽接种于MS+6-BA2.0mg/L的培养基中，使芽增殖并伸长；
[0037]4)取株高1.5cm左右的健壮的无根苗，转入1/2MS+IAA1.0mg/L的生根培养基中，1d左右即可出现不定根；
[0038]5)在生根培养基中培养25d左右有大量不定根产生，进行炼苗，炼苗3d后，移栽至土壤获得再生植株。
[0039]实施例4
[0040]一种苦瓜离体快速繁殖的方法，通过以下步骤完成:
[0041]I)大田中选取生长健壮的苦瓜植株的顶芽作为外植体，用75%的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，切去伤口部位，再用0.1 %的HgCl2溶液消毒7min，无菌水冲洗6?8次，切去伤口部位后用纸巾吸干表面水分；
[0042]2)将消毒好的顶芽外植体接种于MS+6-BA0.5mg/L的培养基中，温度27±1°C，光照时间16h/d，光照强度15001x，使顶芽伸长，分节；
[0043]3)切取伸长的顶芽接种于MS+6-BA0.8mg/L的培养基中，诱导侧芽的生长；
[0044]4)切取无菌苗上半部分伸长至1.5cm左右健壮的顶芽和侧芽接种于1/2MS+IAA1.0mg/L的培养基中，1d左右即可出现不定根；
[0045]5)无菌苗的下半部分，切去伤口，继续接种于MS+6-BA0.5mg/L培养基中，诱导出芽；
[0046]6)在生根培养基中培养25d左右有大量不定根产生，进行炼苗，炼苗3d后，移栽至土壤获得再生植株。
【权利要求】
1.一种苦瓜离体快速繁殖的方法，其特征在于:包含以下步骤: 1)大田中选取生长健壮的苦瓜植株的顶芽或腋芽作为外植体，并进行处理； 2)将消毒好的外植体接种于MS+6-BA的培养基中，温度27±I°C，光照时间16h/d，光照强度15001x,十天后诱导出芽； 3)切取诱导出的芽接种于MS+6-BA的培养基中，使芽增殖并伸长； 4)取株高1.5cm左右的健壮的无根苗，转入1/2MS+IAA的生根培养基中，1d左右出现不定根； 5)在生根培养基中培养25d后产生大量不定根，进行炼苗，炼苗3d后，移栽至土壤获得再生植株。
2.根据权利要求1所述的一种苦瓜离体快速繁殖的方法，其特征在于:步骤(I)中对顶芽或腋芽的处理方法为:用75 %的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，切去伤口部位，再用0.1%的HgCl2溶液消毒7?lOmin，无菌水冲洗6-8次，切去伤口部位后用纸巾吸干表面水分。
3.根据权利要求1所述的一种苦瓜离体快速繁殖的方法，其特征在于:步骤(2)中培养基中6-BA的浓度为0.5?lmg/L。
4.根据权利要求1所述的一种苦瓜离体快速繁殖的方法，其特征在于:步骤(3)中培养基中6-BA的浓度为1.0?2.0mg/L。
5.根据权利要求1所述的一种苦瓜离体快速繁殖的方法，其特征在于:步骤(4)所述的生根培养基中IAA的浓度为0.5?1.0mg/L。
【文档编号】A01H4/00GK104322370SQ201410572618
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2014年10月23日 优先权日:2014年10月23日
【发明者】戴修纯, 吴蓓, 郑岩松, 谭耀文, 张华 , 刘绍钦, 邹集文, 黄炽辉, 张木清, 秦鹏, 黄健新 申请人:广州市农业科学研究院