一种牡蛎多糖及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种牡蛎多糖及其应用，该多糖由牡蛎经水提醇沉法提取、分离纯化而成。在仔猪上的应用表明牡蛎多糖可以促进仔猪生长，改善免疫应激仔猪的肠道健康，可在仔猪上应用于动物保健品的研制。牡蛎多糖目前未有报道具有促进仔猪生长，改善免疫应激仔猪肠道健康的作用。本发明发现牡蛎多糖能促进仔猪生长，改善免疫应激仔猪肠道健康，与现有猪的其他保健品相比，毒副小，无不良反应，且还有抗氧化、提高机体免疫力等作用，可长期使用；牡蛎原料易得，价廉，提取分离工艺简单，生产方便，开发价值高。
【专利说明】一种牡蛎多糖及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于畜牧业领域，具体涉及一种牡蛎多糖及其应用。
【背景技术】
[0002] 多糖（Polysaccharide)又叫多聚糖，是自然界中分子结构复杂且庞大的一类生 物，是由多个（10个以上到上万个）单糖分子或单糖衍生物缩合、失水、通过糖苷键连接 而成的高分子化合物。从1936年至今，随着世界各国学者逐步深入的研究，多糖的生物 活性渐渐出现在人们视野中。近年来，各国学者从各种生物体内提取并研究了大量的生 物活性多糖，人类医学研究和动物实验已经证实多糖具有免疫调节和抗肿瘤；抗血栓；抗 病毒；降血脂、降血糖、保肝护肝、修复组织；抗氧化和抗衰老；抗寄生虫、抗溃疡、抗辐射、 调节造血功能、保肝护肝、修复组织以及改善动物生产性能等一系列作用。其中多糖的免 疫调节作用是主要的功能。多糖是国际上公认的天然优良的免疫调节剂，因此又叫生物 反应调节剂（Biological response modifier, BRM)、生物活性多糖（Biological active polysaccharide, BAP)或免疫活性多糖（Immunological active polysaccharide)等。
[0003] 应激，是指动物机体受到刺激后，发生的全身适应性的反应，故又称全身适应综合 征，它是非特异性应答反应的总和，最早是由Hans Selye在论文"各种不同有害因素产生 的综合征"和"机体胸腺和肾上腺对外伤和中毒的反应"中提出的，其中应激原包括环境温 度、各种病原微生物及毒素等各种对机体有害的物质。Johnson认为，不良饲养环境中的病 原体能激活动物机体的免疫系统，产生应激反应。而动物免疫应激是指病原微生物、疫苗或 异源蛋白等抗原通过刺激动物机体，激活免疫系统，使后者产生了免疫应答，并导致动物群 体中少数动物采食量下降，生长缓慢的一种普遍现象。免疫应激在畜牧业的生产实践中普 遍存在，诱因主要包括疫苗的使用不当，免疫程序不合理，生产环境恶劣而使病原微生物滋 生等。张建峰等曾报告了秦川牛注射口蹄疫油乳剂灭活苗后，部分牛出现精神萎靡不振，体 温升高，采食量下降，瘤胃蠕动减弱的症状；刘建明等也报告过羊群在注射牛口蹄疫〇型苗 后出现精神不振，食欲减退甚至废绝等异常症状，之后有母羊和小羊出现死亡的现象。上述 实例充分说明，由于疫苗的安全性不高或者个别畜禽对其反映强烈，部分畜禽在免疫后产 生应激反应，出现生长缓慢，采食量下降，体温升高等应激症状，有的甚至出现个别畜禽死 亡的现象。由此可知，免疫应激已对养殖业的发展造成了一定的影响。
[0004] 肠道屏障分别由肠黏膜机械屏障、化学屏障、生物屏障和免疫屏障组成。当外来抗 原侵袭时，各个屏障通过自身的分子调控机制和生物学功能协同抵抗。动物机体和外界环 境接触面积最大的是肠黏膜。其屏障功能由特异性免疫效应和非特异性屏障组成 [15]。特 异性免疫屏障是指由肠黏膜介导的体液和细胞免疫系统，即肠黏膜免疫系统，包括肠相关 淋巴组织、免疫效应分子、细胞因子和弥散免疫细胞。肠黏膜免疫系统既要忙碌于对营养物 质的消化吸收以维持机体的需要,又要对抗外来抗原物质的侵入,产生正确的免疫应答。
[0005] 应激会使与大分子营养代谢和细胞增殖相关基因的表达量明显下降，而与氧化应 激和免疫激活相关的基因的表达量显著上升，刺激仔猪肠道炎性细胞因子如IL-I、IL-6、 IL-12等的过量表达，从而引起肠黏膜代谢和生理紊乱，导致肠道损伤。免疫应激会抑制仔 猪和鸡的食欲；降低日增重和日采食量；肌肉组织、脂肪组织、体蛋白质和体脂肪的生长或 沉积速度降低 目前已有200多种多糖被发现具有增强免疫的功能。关于多糖的生物学活性和功能性 研究的逐渐深入，越来越多的多糖产品被开成为具有使用价值的美容和医药产品。通过与 淋巴细胞的相互影响发挥免疫调节作用，多糖更是成为现今免疫学研究的宠儿。
[0006] 牡贩为牡贩科动物长牡贩（Ostrea gigas thunb)或近江牡贩（Ostrea rivularis gould)等的肉。别名牡蛤《名医别录》，蛎蛤《神农本草经》，蛎房、蠔莆《本草图经》，左壳《中 药志》，蠔《本草纲目》。牡蛎生于江河流入大海处，系杂食性动物，以细小的浮游生物为食。 牡蛎在世界各国如中国、日本、美国等地都有生产，生长于沿海、河口及内湾。《民间兽医本 草》中记载：牡蛎味咸涩，性凉。敛阴潜阳，止汗涩精。《师皇安骥集》:"味咸，微寒。下焦湿 感，汗多出，阴下湿气，泄精，心胁痞热用之良。"《抱犊集》："补肾，补大肠，补小肠。"《兽医 药性赋》："固涩软坚散阴结。" 牡贩粗多糖（Oyster polysaccharides, 0PS)是从牡贩中提取出来的有效活性成分之 一。它可以通过不同的方式抑制病毒的增殖和肿瘤细胞的增长，也可以通过T淋巴细胞的 活性介导免疫应答，参与免疫反应。李志研究表明，牡蛎粗多糖中可得到OPS- I和OPS-II 两种多糖，同时对小鼠实验中表明其具有较好的抗氧化作用，且腹腔注射3mg/ml牡蛎粗多 糖能提高正常小鼠免疫功能，有效增加脾淋巴细胞和碳廓清洁力。其它研究表明，牡蛎粗提 液具有抗肿瘤，抗氧化衰老，抗菌抗病毒，以及提高机体免疫功能等作用。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种牡蛎多糖及其应用，牡蛎多糖是从牡蛎中提取出来的 有效活性成分之一。它可以通过不同的方式抑制病毒的增殖和肿瘤细胞的增长，也可以通 过T淋巴细胞的活性介导免疫应答，参与免疫反应。
[0008] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种牡蛎多糖，由葡萄糖单糖组成，由牡蛎经水提醇沉法提取、分离纯化而获得。
[0009] 一种牡蛎多糖在断奶仔猪基础日粮中的应用。
[0010] 所述牡蛎多糖在日粮中的含量为〇· 5-1. 2%。
[0011] 未见其具有促进仔猪生长，改善免疫应激仔猪肠道健康作用的有文献报道。
[0012] 牡蛎多糖的提取方法及其理化特性由于已经发表，故不作为专利保护。具体方法 见李志的硕士论文《牡蛎多糖的分离纯化及生物学活性研究》。
[0013] 本发明的优点在于： 1、牡蛎多糖目前未有报道具有促进仔猪生长，改善免疫应激仔猪肠道健康的作用。本 发明发现牡蛎多糖能促进仔猪生长，改善免疫应激仔猪肠道健康，与现有猪的其他保健品 相比，毒副小，无不良反应，且还有抗氧化、提高机体免疫力等作用，可长期使用；2、牡蛎 原料易得，价廉，提取分离工艺简单，生产方便，开发价值高。
【专利附图】
【附图说明】
[0014] 图1十二指肠(左)、空肠（中）和回肠(右）HE染色图。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合实施例对本发明进行详细说明： 实施例1牡蛎多糖的提取与纯化 利用水提醇沉法提取牡蛎粗多糖，在单因素分析（提取时间、料液比、提取温度）的 基础上进行正交分析，优化提取条件。正交试验结果显示，多糖提取的最佳工艺为温度为 90°C，料液比为1 :80,时间为3 h。采用苯酚一硫酸法测得牡蛎粗多糖总糖含量为72. 43%。 牡蛎粗多糖经除蛋白、透析、DEAE-52离子交换柱和Sephadex G-100凝胶层析柱，得到 OPSII和OPSIIb两种多糖组分。紫外光谱分析（UV)显示，在260 m和280 nil 1均无核酸 和蛋白质吸收峰。高效液相色谱（HPLC)法检测OPSIIb，有一个吸收峰，说明OPSIIb为均一 多糖，可对其进行组成和结构分析。OPSIIb通过高效液相色谱（HPLC)、气相色谱（GC)、红外 光谱（IR)、薄层色谱（TLC)和其他物理化学分析方法初步鉴定多糖的理化性质，结果表明 OPSIIb具有多糖的特征吸收峰而且OPSIIb是由葡萄糖一种组分组成。
[0016] 实施例2牡蛎粗多糖对断奶仔猪生长性能的影响 1材料和方法 1. 1材料 LPS (大肠杆菌血清型 055 :B5，Sigma 公司），ELISA 试剂盒（Cusabio Biotech Co. , LTD) ； Trizol Prime Script? RT reagent Kit Perfect Real Time (TaKaRa Biotechnology Co. , Ltd),突光试剂盒(北京百泰克生物技术有限公司），琼脂糖。
[0017] 试验动物与设计 选取体重相近的30头日龄在（28±l)d的断奶杜洛克X长白X大白三元已阉割公仔 猪，随机分为空白对照组（A组)，应激对照组（B组)，牡蛎粗多糖高（C组)、中（D组)、低剂量 (E组）组，每组6个重复，每个重复1头猪。空白对照组和免疫应激组饲喂基础日粮，牡蛎 粗多糖高、中、低剂量组分别饲喂含有I. 2%、0. 8%、0. 5%牡蛎粗多糖的基础日粮，饲喂周期 为30d。试验前12h断水断料，试验各组腹腔注射100μ g/kg BW LPS，空白对照组注射等量 生理盐水。于注射3h后采血，剖检。
[0018] 测定方法 (1) 生长性能指标 始重：试验期第一天所称的重量（kg) 末重：结束试验当天所称的重量（kg) 平均日增重（ADG):(末重-始重）（g)/试验天数（d) 平均日采食量(ADFI):全期采食量（g) /试验天数（d) 料肉比（F/G):饲料消耗（kg) /增重（kg) (2) 数据统计分析 采用SPSS13. 0统计软件Compare Means中的单因素方差分析，用LSD和S-N-K进行方 差异显著性分析，结果采用平均值土标准差（Mean土S.D)表示。本试验各实施例数据都按 如上统计方法进行分析。
[0019] 结果分析 2. 1仔猪生长性能 表1仔猪生长性能结果
【权利要求】
1. 一种牡蛎多糖，其特征在于：所述牡蛎多糖由葡萄糖单糖组成，由牡蛎经水提醇沉 法提取、分离纯化而获得。
2. -种如权利要求1所述的一种牡蛎多糖在断奶仔猪基础日粮中的应用。
3. 根据权利要求2所述的一种牡蛎多糖在断奶仔猪基础日粮中的应用，其特征在于： 所述牡蛎多糖在日粮中的含量为〇. 5-1. 2%。
【文档编号】A23K1/16GK104311694SQ201410576493
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年10月24日 优先权日:2014年10月24日
【发明者】黄志坚, 殷光文, 江和基, 陈腾腾, 罗刚, 李志
申请人:福建农林大学