专利名称：一种南瓜多糖及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种南瓜多糖及其制备方法，属于药用活性成分的提取技术领域。
(二)
背景技术：
南瓜不但具有非常高的营养价值，而且还具有极高的药用价值，其中最为人们所熟知的 药用、保健功能是抗糖尿病。南瓜中所含有的多糖等成份是其抗糖尿病的主要有效物质。目 前利用南瓜的抗糖尿病作用，通常是将南瓜脱水干燥磨粉，制成南瓜粉后冲服。这种方法制 得的产品所含药用成份低，服用量大，疗效不显著，服用不够方便。近年已有从南瓜中提取 分离出具有明显降血糖效果的南瓜多糖的公开报道。在公开的文献报道中，南瓜多糖的提取 多采用水提取乙醇沉淀法。水提乙醇沉淀法提取南瓜多糖，普遍存在着工艺复杂、流程繁琐 和提取率低、多糖含量低、成本高的问题。
CN1624001A公开了南瓜多糖的制备方法先将南瓜制成南瓜粉，再用热水抽提，滤液用
乙醇沉淀，沉淀物洗涤后加入三氯醋酸，冰箱中放置过夜，离心，所得滤液逆水透析后干燥 ，即得产物。该方法存在着提取时间较长，工艺复杂，流程繁琐，沉淀物需要经过多次洗涤 ，加入三氯醋酸脱蛋白后还需经过逆水透析、双蒸水透析，生产周期长，多糖提取率低，纯 度不高的问题。
(三)
发明内容
本发明所要解决的技术问题是利用现代生物方法从南瓜中提取、分离、纯化南瓜多糖 ，其工艺流程简单、生产周期短、多糖提取率高且产品纯度高。
本发明是这样实现的南瓜多糖的制备方法为取南瓜，洗净，去籽后切片，粉碎，加 水提取O. 5 3h，过滤，收集滤液；滤渣再加水提取2次，每次O. 5 3h，过滤，收集滤液； 合并滤液，离心，上清液过树脂柱进行柱层析，用水清洗树脂，收集洗脱液；洗脱液浓縮后 ，加入80% 95%乙醇进行沉淀；沉淀物用水溶解后加入5% 15%三氯醋酸离心，脱去蛋白质 ，取上清液进行浓縮，干燥，粉碎，即得南瓜多糖。由于多糖类成分在水中的溶解度较大， 而且和乙醇相比，用水作提取溶剂的成本明显降低，因此本发明在对南瓜进行初提和再提时 均以水为提取溶剂。柱层析可以通过吸附很好地去除提取液中的黄酮类物质及色素，在杂质 量更少的情况下，后续的醇沉效果更好，沉淀物无须经过多次洗涤。
更具体的制备方法为取南瓜，洗净，去籽后切片，粉碎，用4 12倍重量的水提取
40. 5 3h，过滤，收集滤液；滤渣再分别加4 12倍重量的水提取2次，每次O. 5 3h，过滤， 收集滤液；合并滤液，离心，上清液过树脂柱进行柱层析，用O. 1 3倍进柱液重量的水清洗 树脂，收集洗脱液；将其浓縮至洗脱液体积的l/20 l/5倍，然后加入3 12倍重量的80% 95%乙醇溶液进行沉淀，静置5 10h;沉淀物用1 8倍重量的水溶解后，加入O. 5 2倍重量 的5% 15%三氯醋酸，搅拌后静置6 10h，离心，除去蛋白质，取上清液进行浓縮，制膏， 冷冻干燥，粉碎，即得南瓜多糖。
上述制备过程中，南瓜洗净后最好切成长4 10cm、宽2 6cm、厚2 6cm的片，用粉碎 机粉碎至20 200目的颗粒，以便于搅拌，使有效成分的提取更为完全。为了提高南瓜多糖 的品质，在选取原料的时候，尽量选择口感甜、淀粉多，外观平滑、肉质硬且厚，成熟、无 霉坏的南瓜，清洗时去除瓜柄、瓜蒂并剔除虫叮咬部份后，先用清洁球或毛刷或抹布擦洗， 再用洁净饮用水冲洗干净。
南瓜粉碎物提取时的料液温度以及滤渣再提取时的料液温度均为50 12(TC ，优选为80 10CTC。可将南瓜粉碎物置于提取罐中，输入蒸汽进行加热。
南瓜的提取液均用50 300目滤网进行过滤。
柱层析过程用水清洗树脂时，当流出液呈浅黄色的时候开始收集洗脱液，流出液呈无色 时，停止洗脱、收集；树脂柱用50% 95%的乙醇溶液清洗处理，洗去树脂吸附的色素和黄酮 类物质。
柱层析所用树脂柱为HPD100型、D101型、AB-8型或D201型大孔吸附树脂。申请人经过筛 选实验发现，这几种大孔吸附树脂对南瓜多糖的纯化效果更好，而且其价格便宜，可以多次 重复使用，成本很低。
洗脱液采用真空浓縮，浓縮温度为40 8(TC (温度太低不利于浓縮、温度太高则对有效 成分有破坏作用)，真空度O. 06 0. 085MPa。
南瓜提取及纯化过程所用的水为纯化水、去离子水或饮用水。 以上所述南瓜多糖的制备方法制备得到的南瓜多糖。
与现有技术相比，本发明采用先进的树脂层析技术对南瓜多糖进行纯化，减少了洗涤次 数，简化了工艺流程；并对提取条件和工艺参数进行了优化，使得整个提取、纯化过程耗时 较短；因而本发明工艺流程简单，生产周期短，生产易于控制，生产成本低且产品纯度及提 取率高。用本发明方法制备得到的南瓜多糖，产品纯度可达80%以上，收率可达到25%以上。
用本发明所述方法提取得到的南瓜多糖含有D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖、木糖和 D-葡萄糖醛酸等成份。该南瓜多糖对糖尿病特别是II型糖尿病具有明显的降糖作用。因此可将本发明所得南瓜多糖用于糖尿病药物的制备中，也可将其制备成各种保健品制剂。 具体实施例方式
本发明的实施例l:南瓜多糖的制备方法，其步骤如下
1) 选取口感甜、淀粉多，外观平滑、肉质硬且厚，成熟、无霉坏的南瓜100kg，去除瓜 柄、瓜蒂并剔除虫叮咬部份，先用清洁球擦洗，再用洁净饮用水冲洗干净，切开去籽，切成
长5cm、宽2cm、厚2. 5cm的片，置于粉碎机中粉碎成80目的颗粒，得南瓜粉碎物。
2) 将南瓜粉碎物置于提取罐中，加入600kg纯化水，经搅拌、混合均匀后，输入蒸汽， 将罐内水温升至95。C，持续保温1.5h。
3) 用180目滤网过滤，收集滤液于贮液罐中，得滤液A。过滤后的滤渣加入550kg纯化水 ，经搅拌、混合后，输入蒸汽，将水温升至95。C，持续保温1.5h。用180目滤网过滤，收集 滤液于贮液罐中，得滤液B。再向滤渣中加入500kg纯化水，经搅拌、混合均匀后，输入蒸汽 ，将水温升至95。C，持续保温1.5h。再用180目滤网进行过滤，收集滤液于贮液罐中，得滤 液C。
4) 将滤液A 、滤液B 、滤液C合并置于离心机离心，收取上清液。
5) 将离心后的上清液通过HPD100型树脂柱进行柱层析，用300kg纯化水清洗树脂，当流 出液呈浅黄色的时候开始收集洗脱液于贮液罐中。流出液呈无色时，停止洗脱、收集。树脂 柱用85%浓度的乙醇溶液清洗处理，洗去树脂吸附的色素和黄酮类物质。
6) 将洗脱液吸入浓縮罐中进行真空浓縮，浓縮温度75。C，真空度0.075 MPa，浓縮至洗 脱液体积的1/15倍。
7) 将350kg浓度95。/。的乙醇溶液加入浓縮液中进行搅拌、混合、沉淀，静置6h。
8) 取醇沉后的沉淀物，力n400kg纯化水溶解后，再加入180kg浓度10。/。的三氯醋酸溶液， 搅拌后静置7h，经离心机离心，即可去除蛋白质。
9) 取上清液于浓縮罐中进行真空浓縮，再经制膏，冷冻干燥，粉碎，即得南瓜多糖。 本发明的实施例2:按以下步骤制备南瓜多糖
1) 选取外观平滑、肉质硬且厚，成熟、无霉坏的南瓜150kg，去除瓜柄、瓜蒂并剔除虫 叮咬部份，先用毛刷刷洗，再用洁净饮用水冲洗干净，切开去籽，切成长6cm、宽3cm、厚 2.2cm的片，用粉碎机粉碎成150目的颗粒，得南瓜粉碎物。
2) 将南瓜粉碎物置于提取罐中，力n750kg去离子水，经搅拌、混合均匀后，输入蒸汽， 将罐内水温升至92 °C ，持续保温l. 8h 。
3) 用120目滤网进行过滤，收集滤液于贮液罐中，得滤液A。过滤后的滤渣加入650kg去离子水，经搅拌、混合后，输入蒸汽，将水温升至92。C，持续保温1.8h。用120目滤网进行 过滤，收集滤液于贮液罐中，得滤液B。再向滤渣中加入600kg去离子水，经搅拌、混合均匀 后，输入蒸汽，将水温升至98。C，持续保温1.8h。再用120目滤网进行过滤，收集滤液于贮 液罐中，得滤液C。
4) 将滤液A 、滤液B 、滤液C合并，置于离心机离心，收取上清液。
5) 将离心后的上清液通过D101型树脂柱进行柱层析。用420kg去离子水清洗树脂，当流 出液呈浅黄色的时候开始收集洗脱液于贮液罐中。流出液呈无色时，停止洗脱、收集。树脂 柱用60%浓度的乙醇溶液清洗处理，洗去树脂吸附的色素和黄酮类物质。
6) 将贮液罐中的洗脱液吸入浓縮罐中进行真空浓縮，浓縮温度5(TC，真空度0.08MPa， 浓縮至洗脱液体积的1 /12倍。
7) 将420kg浓度85。/。的乙醇溶液加入浓縮液中进行搅拌、混合、沉淀，静置8h。
8) 取醇沉后沉淀物，力n460kg去离子水溶解，再加入220kg浓度13。/。的三氯醋酸，搅拌后 静置8h，经离心机离心，除去蛋白质。
9) 取上清液于浓縮罐中进行真空浓縮，再经制膏，冷冻干燥，粉碎，即得南瓜多糖。 本发明的实施例3:按以下步骤制备南瓜多糖
1) 选取成熟、无霉坏的南瓜220kg，去除瓜柄、瓜蒂并剔除虫叮咬部份，用抹布擦洗， 再用洁净饮用水冲洗干净，切开去籽，切成长4.5cm、宽3.6cm、厚3cm的片，置于粉碎机中 粉碎成160目的颗粒，得南瓜粉碎物。
2) 将南瓜粉碎物置于提取罐中，加1000kg饮用水，经搅拌、混合均匀后，输入蒸汽，将 罐内水温升至85°C ，持续保温2h 。
3) 用140目滤网进行过滤，收集滤液于贮液罐中，得滤液A。过滤后的滤渣加入900kg饮 用水，经搅拌、混合后，输入蒸汽，将水温升至85。C，持续保温2h。用140目滤网进行过滤
，收集滤液于贮液罐中，得滤液B。再向滤渣中加入800kg饮用水，经搅拌、混合均匀后，输 入蒸汽，将水温升至8(TC，持续保温2h。再用140目滤网进行过滤，收集滤液于贮液罐中， 得滤液C。
4) 将滤液A 、滤液B 、滤液C合并，置于离心机离心，收取上清液。
5) 将离心后的上清液通过AB-8型树脂柱进行柱层析，用1200kg饮用水清洗树脂，当流 出液呈浅黄色的时候开始收集洗脱液于贮液罐中。流出液呈无色时，停止洗脱、收集。树脂 柱用90%浓度的乙醇溶液清洗处理，洗去树脂吸附的色素和黄酮类物质。
6) 将贮液罐中的洗脱液吸入浓縮罐中进行真空浓縮，浓縮温度65。C，真空度0.065MPa，浓縮至洗脱液体积的1/10倍。
7) 将640kg浓度90。/。的乙醇溶液加入浓縮液中进行搅拌、混合、沉淀，静置10h。
8) 取醇沉后沉淀物，力Q750kg饮用水溶解，再加入400kg浓度5。/。的三氯醋酸，搅拌后静置 10h，经离心机离心，除去蛋白质。
9) 取上清液于浓縮罐中进行真空浓縮，再经制膏，冷冻干燥，粉碎，即得南瓜多糖。
权利要求
1.一种南瓜多糖的制备方法，其特征在于取南瓜，洗净，去籽后切片，粉碎，加水提取0.5～3h，过滤，收集滤液；滤渣再加水提取2次，每次0.5～3h，过滤，收集滤液；合并滤液，离心，上清液过树脂柱进行柱层析，用水清洗树脂，收集洗脱液；洗脱液浓缩后，加入80％～95％乙醇进行沉淀；沉淀物用水溶解后加入5％～15％三氯醋酸离心，脱去蛋白质，取上清液进行浓缩，干燥，粉碎，即得南瓜多糖。
1.
一种南瓜多糖的制备方法，其特征在于取南瓜，洗净，去籽后 切片，粉碎，加水提取O. 5 3h，过滤，收集滤液；滤渣再加水提取2次，每次O. 5 3h，过 滤，收集滤液；合并滤液，离心，上清液过树脂柱进行柱层析，用水清洗树脂，收集洗脱液 ;洗脱液浓縮后，加入80% 95%乙醇进行沉淀；沉淀物用水溶解后加入5% 15%三氯醋酸离 心，脱去蛋白质，取上清液进行浓縮，干燥，粉碎，即得南瓜多糖。权利要求
2.根据权利要求l所述南瓜多糖的制备方法，其特征在于取南瓜， 洗净，去籽后切片，粉碎，用4 12倍重量的水提取0.5 3h，过滤，收集滤液；滤渣再分别 加4 12倍重量的水提取2次，每次0.5 3h，过滤，收集滤液；合并滤液，离心，上清液过 树脂柱进行柱层析，用O. 1 3倍进柱液重量的水清洗树脂，收集洗脱液；将其浓縮至洗脱液 体积的l/20 l/5倍，然后加入3 12倍重量的80% 95%乙醇溶液进行沉淀，静置5 10h;沉 淀物用1 8倍重量的水溶解后，加入O. 5 2倍重量的5% 15%三氯醋酸，搅拌后静置6 10h ，离心，除去蛋白质，取上清液进行浓縮，制膏，冷冻干燥，粉碎，即得南瓜多糖。权利要求
3.根据权利要求1或2所述南瓜多糖的制备方法，其特征在于南瓜 洗净后切成长4 10cm、宽2 6cm、厚2 6cm的片，用粉碎机粉碎至20 200目的颗粒。权利要求
4.根据权利要求1或2所述南瓜多糖的制备方法，其特征在于南瓜 粉碎物提取时的料液温度为50 12(TC ，滤渣再提取时的料液温度也为50 12(TC 。权利要求
5.根据权利要求1或2所述南瓜多糖的制备方法，其特征在于南瓜 的提取液均用50 300目滤网进行过滤。权利要求
6.根据权利要求1或2所述南瓜多糖的制备方法，其特征在于柱层 析过程用水清洗树脂时，当流出液呈浅黄色的时候开始收集洗脱液，流出液呈无色时，停止 洗脱、收集；树脂柱用50% 95%的乙醇溶液清洗处理。权利要求
7.根据权利要求1或2所述南瓜多糖的制备方法，其特征在于柱层 析所用树脂柱为HPD100型、D101型、AB-8型或D201型大孔吸附树脂。权利要求
8.根据权利要求1或2所述南瓜多糖的制备方法，其特征在于洗脱液采用真空浓縮，浓縮温度为40 80。C，真空度O. 06 0. 085MPa。
9 根据权利要求1或2所述南瓜多糖的制备方法，其特征在于南瓜 提取及纯化过程所用的水为纯化水、去离子水或饮用水。
10 权利要求l-9中任一项所述南瓜多糖的制备方法制备得到的南瓜多糖。
全文摘要
本发明公开了一种南瓜多糖及其制备方法，它是以南瓜为原料，经前处理，加水提取0.5～3h，过滤，滤液离心，上清液过树脂柱进行柱层析，收集洗脱液；洗脱液浓缩后，加入乙醇进行沉淀；沉淀物用水溶解后加入三氯醋酸离心脱蛋白，上清液经浓缩，干燥，粉碎，即得南瓜多糖。本发明采用先进的树脂层析技术对南瓜多糖进行纯化，减少了洗涤次数，简化了工艺流程；并对提取条件和工艺参数进行了优化，使得整个提取、纯化过程耗时较短；因而本发明工艺流程简单，生产周期短，生产易于控制，生产成本低且产品纯度及提取率高。用本发明方法制备得到的南瓜多糖，产品纯度可达80％以上，收率可达到25％以上。
文档编号A61P3/00GK101314621SQ20081030294
公开日2008年12月3日 申请日期2008年7月23日 优先权日2008年7月23日
发明者卢昶年, 卢照凯 申请人:卢照凯;卢昶年