1.一种提高鸡胚孵化期骨骼肌卫星细胞增殖活性的方法,其特征在于,于鸡胚孵化期采用不同颜色的光照进行孵化。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,将0胚龄鸡胚采用不同颜色的光照进行孵化。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述不同颜色的光照为白色、红色、绿色和蓝色。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述不同颜色的光照为白色、红色、绿色和蓝色。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述不同颜色的光照为绿色。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,孵化温度保持在37±0.5℃,湿度保持在50%-60%。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,光照制度为24h全光照,光照强度为15lx。
8.根据权利要求1-7任一项所述的方法,其特征在于,其中,骨骼肌卫星细胞的分离培养方法为:
1)取刚出壳1日龄的雏鸡,腹腔麻醉后,放入70%酒精中浸泡消毒1min;
2)在超净台内无菌取出雏鸡胸大肌,放入盛有Hank’s液的平皿中涮洗2-3次,除去脂肪组织后放入装有0.5mL EP管中称重;
3)将5mL青霉素瓶预先编号,加入1mL胶原酶I,将分离的胸大肌放入青霉素瓶中进行剪碎,再按2mL/瓶补加胶原酶I;
4)青霉素瓶用封口膜封口,37℃水浴30min。期间不停摇晃,待出现絮状沉淀时终止反应;
5)将液体从青霉素瓶转移至15mL离心管中,青霉素瓶需用Hank’s液冲洗一并转入,随后1000r/min离心8min,弃上清;
6)将Hank’s液重悬,再一次离心,1000r/min离心8min,弃上清;
7)用3mL0.25%胰酶重悬,放37℃水浴20min,期间不停摇晃,以快速从基底膜释放细胞;
8)用完全培养基终止胰酶作用,吹打混匀;
9)将混合液过200目筛网,用磨棒研磨,Hank’s液冲洗筛网一次,将小烧杯收集的滤液转移至离心管中,小烧杯用Hank’s液冲洗一次,一并转入。随后1000r/min离心5min,弃上清;
10)DMEM基础培养基重悬细胞,1000r/min离心5min,弃上清;
11)DMEM完全培养基重悬细胞,1000r/min离心5min,弃上清;
12)DMEM完全培养基重悬细胞,将重悬液移至细胞瓶中;
13)经1h差速贴壁,去除成纤维细胞;
14)用5%台盼蓝染液进行细胞计数,调整细胞浓度为6×106个/mL,将细胞悬液加入至含有细胞爬片的6孔板中,或96孔板(100μL/孔),放入37℃培养箱中继续培养。