本发明涉及生物农药加工技术领域，尤其涉及一种木霉菌油悬浮剂及其制备方法。
背景技术：
目前常见的木霉制剂主要为可湿性粉剂，使用过程中药效较低，体积大，不易计量，在使用过程中会产生飘移现象，导致药剂有较大的损失，在靶标上有不良的黏附性，对环境也造成污染。可湿性粉剂的粒度很细，在生产和使用过程中会出现大量的粉尘，产生的粉尘会增加操作者吸入和造成对皮肤和眼睛的刺激，另粉尘与一些敏感物质接触后会有爆炸的危险。
油悬浮剂是一种能将油类溶剂中不溶的固体农药活性成分均匀地分散在非水介质（即油类）中，依靠表面活性剂形成高分散且稳定的悬浮液体的制剂。油悬浮剂具有渗透性和黏附性强、抗蒸发、耐雨水冲刷、增效等优点，适用于防治在热带雨林和多雨季节发生的各种植物病害。同时，它能将制剂中的活性成分（木霉菌孢子）均匀地分散在非水介质（即油类）中，依靠表面活性剂形成高分散且稳定的悬浮液体的制剂。使用的非水介质可在环境中自然降解，同时在生产与使用过程中无粉尘，对环境和人、畜安全，不造成污染。
技术实现要素：
本发明结合木霉制剂和油悬浮剂的优点，提供一种适用于在热带雨林和多雨季节，能够有效防治植物病害的木霉菌油悬浮剂；同时能满足将制剂中的活性成分（木霉菌孢子）均匀分散、无环境污染、增效和提高植物抗病害能力的要求。
为了实现上述技术目的，本发明提供的技术方案为：
一种木霉菌油悬浮剂，各组分及其重量配比为：
浓缩木霉菌分生孢子发酵液 15-25 %
乳化剂 1-3 %
增稠剂 1-2%
植物油 70-83 %。
为了优化上述技术方案，本发明所采取的技术措施还包括：
优选地，上述的浓缩木霉菌分生孢子发酵液的木霉菌品种选自哈茨木霉菌、棘孢木霉、绿色木霉、短密木霉、橘绿木霉、长枝木霉和康宁木霉的任意一种或几种；最优选哈茨木霉菌。
优选地，上述的乳化剂选自月桂酰基谷氨酸钠、月桂酰两性二乙酸二钠、对辛基苯酚聚氧乙烯醚、烷基苯磺酸钠或山梨酸醇脂肪酸酯中的一种或几种。
优选地，上述的增稠剂选自黄原胶、硅酸铝镁、羧甲基纤维素钠、羧乙基纤维素、甲基纤维素、膨润土、聚乙烯醇中、海藻酸钠或聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。
优选地，上述的植物油选自大豆油、玉米油、菜籽油、花生油和蓖麻油中的任意一种。
优选地，上述的木霉菌油悬浮剂活孢子含量不少于2亿孢子/毫升，悬浮率不低于80%，倾倒后残余物不高于5%，洗涤后残余物不高于0.5%。
另一方面，本发明还提供一种上述的木霉菌油悬浮剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，获得浓缩木霉菌分生孢子发酵液；
步骤二：按所述的木霉菌油悬浮剂的组分及其重量配比，分别量取或称取木霉菌发酵液、乳化剂、增稠剂、植物油；
步骤三：将乳化剂、增稠剂、植物油混合均匀后，再加入浓缩木霉菌分生孢子发酵液混合，得到木霉菌油悬浮剂。
为了进一步优化上述制备方法，本发明提供的进一步技术措施包括：
进一步地，上述步骤一的具体操作为：
步骤A原料预处理：碳源、氮源经过100目筛分后，与水混合均匀，搅拌，获得培养浆液；
步骤B灭菌：将获得的培养浆液在121℃下灭菌20min；
步骤C种子培养：待培养浆液温度降至室温后，加入木霉菌孢子液并发酵48小时；
步骤D发酵：在无菌条件下，将步骤C获得的木霉菌孢子液转入已经装入灭菌培养基的发酵罐中，培养5-6天；
步骤E静置：将发酵罐置于6℃冷库中，静置60h后，弃除上清液，获得浓缩木霉菌分生孢子发酵液。
进一步地，上述步骤三中使用均质机以5000-8000r/min速率均质30min混合乳化剂、增稠剂和植物油，加入浓缩木霉菌分生孢子发酵液后，使用均质机以3000r/min速率均质10min进行混合。
最后一方面，本发明还提供上述的木霉菌油悬浮剂的使用方法，包括将木霉菌油悬浮剂稀释后喷洒的步骤；优选地，油悬浮剂的稀释倍数为250-500倍。
本发明采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
本发明制备的木霉菌油悬浮剂，使用时具有良好的黏着性和展着性，容易黏附于蜡质或光滑的叶面，抗雨水冲刷能力强，使用介质安全可降解，生产使用过程中无粉尘，对环境和人类不造成污染。
具体实施方式
本发明提供了一种木霉菌油悬浮剂，各组分及其重量配比为：
浓缩木霉菌分生孢子发酵液 15-25 %
乳化剂 1-3 %
增稠剂 1-2%
植物油 70-83 %。
下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
实施例1
浓缩木霉菌分生孢子发酵液的制备
制作方法，包括如下步骤：
（1）按土豆粉7%，葡萄糖3%，水90%的比例配置摇瓶培养基，土豆粉、葡萄糖需经过100目筛分后，与水混合均匀，搅拌成浆，分装于摇瓶，装液量250mL/1L。将摇瓶在121℃下灭菌20min，降至室温后，接入生长于土豆葡萄糖琼脂培养基上的哈茨木霉菌，置于摇床上，在28℃，200rpm培养32-48h。
（2）按土豆粉7%,葡萄糖3%,水90%的比例配置培养基150L。
（3）原料预处理：土豆粉、葡萄糖需经过100目筛分后，与水混合均匀，搅拌成浆。
（4）灭菌：将浆液在200L发酵罐中121℃下灭菌20min；
（5）发酵：灭菌后，待浆液温度降至室温后，按5%-10%比例无菌接入到200L发酵罐中，26-32℃，搅拌速度180RPM，通气量50L-150L/min培养6天。
（6）静置：将下罐的发酵孢子液置于6℃冷库中，静置60h后，弃除上清液，保留余下的沉降浓缩液备用。
油悬浮剂的制备：
分别量取或称取木霉菌发酵液100ml，月桂酰基谷氨酸钠30ml，有机膨润土20g，大豆油850ml。先将月桂酰基谷氨酸钠、有机膨润土、大豆油使用均质机8000r/min，均质30min，再加入木霉菌发酵液3000r/min，均质10min即得木霉菌油悬浮剂。
实施例2
分别量取或称取木霉菌发酵液浓缩液800ml，山梨酸醇脂肪酸酯80ml，硅酸铝镁80g，玉米油3040ml。先将山梨酸醇脂肪酸酯、硅酸铝镁、玉米油使用均质机8000r/min，均质30min，再加入木霉菌发酵液3000r/min，均质10min即得木霉菌油悬浮剂。其他操作同实施例1。
实施例3
分别量取或称取木霉菌发酵浓缩液1000ml，月桂酰基谷氨酸钠100ml，黄原胶60g，大豆油840ml。先将月桂酰基谷氨酸钠、黄原胶、大豆油使用均质机8000r/min，均质30min，再加入木霉菌发酵液3000r/min，均质10min即得木霉菌油悬浮剂。其他操作同实施例1。
分别测定上述3个实施例获得的木霉菌油悬浮剂的孢子含量、悬浮率、倾倒后残余物、洗涤后残余物并观察外观，具体结果如下表1。
应用实施例4
使用实施例1配制的木霉菌油悬浮剂进行猕猴桃溃疡病田间防治实验，试验在上海孙桥卉绿有机农庄进行，试验区18m X 55 m共4行(约 26株猕猴桃/行)，行与行的间隙为3m。将试验区中的猕猴桃树苗全部接种猕猴桃溃疡病病原菌—丁香假单胞杆菌反复几次直至发病。测试共有四个处理，分别是：化学药剂：溃腐灵（稀释50-100倍喷雾，潍坊奥丰作物病毒防治有限公司）、Tr309T可湿性粉剂、Tr309T油悬浮剂和清水处理。每隔7天施药一次（均匀喷雾枝叶），连续施药五次，35天后对各处理的猕猴桃病株进行愈合率（%）的统计以及次年（3月份）对各处理的猕猴桃病株进行复发病率（%）的统计。
愈合率%=（处理前病株数-防治后病株数）/处理前病株数*100%
复发病率%=病株数/总病株愈合数
测试结果见下表二：
由表二实验结果可以看出，本发明对猕猴桃溃疡病防效明显，防治效果远优于木霉菌可湿性粉剂和化学药剂溃腐灵。随着用药后时间的延长，在木霉菌油悬浮剂的实验区域，重复发病的株数少，且发病株的药斑面积有减小的趋势。
综上所述，本发明所制备的木霉菌油悬浮剂，使用的介质可被降解，同时在生产与使用过程中无粉尘，对环境和人类不造成污染。本发明制备的木霉菌油悬浮剂具有渗透性和黏附性强、抗蒸发、耐雨水冲刷、增效等优点，解决了特殊地区或季节，如热带雨林、台风和雷雨季，可湿性粉剂等易被雨水冲刷而不能很好的发挥其防治病害的功效的问题。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。