白及苗组培快繁方法与流程

本发明涉及植物育苗领域，具体涉及一种白及苗组培快繁方法。

背景技术：

近年来作为中草药的白及价格逐年高涨，四大药材交易市场的交易价格已突破500元/公斤，并且需求大于供给，可谓是中药材中的“明星”，发家致富的好路子。白及是一种地生兰科植物，白及原产中国，广布于长江流域各省，全国大部分地方都能栽培。

白及由于本身的生物学特性，自然繁殖系数低，现在主要采用组培的方式繁育白及苗。用白及种子进行组培繁殖，就组培技术难度而言是简单的，近2年白及组培苗大量出现在市场，但组培苗驯化技术和条件限制，一般种植户驯化成活率低。

针对现有的组培苗驯化成活率低的技术问题，现在急需一种白及苗组培快繁方法。

技术实现要素：

本发明针对现有的组培苗驯化成活率低的技术问题，提供了一种白及苗组培快繁方法。

本方案提供的基础方案为：白及苗组培快繁方法，包括如下步骤：

步骤1：培养土准备，将培养土放置在盘子内后，对其进行疏松后，放入蒸汽锅中进行杀菌消毒，然后在培养盘中用1/2MS培养基配方加入椰子汁，土豆汁，琼脂，配置成营养层，120度高温蒸汽灭菌10分钟后，待其自然冷却后，在培养基上均匀铺洒一层培养土，然后轻轻压实后刮平，然后在培养土表面挖一个种植坑，种植坑的坑底距离培养基1-5mm；

步骤2：外植体准备，选用在白及果荚呈褐色采集的新鲜的白及种子作为组培外植体，将白及种子放置到浓度为70％的乙醇溶液中浸泡5分钟，取出沥干后，用封膜刀将白及种子对剖；所述封膜刀包括刀体，刀体的一端设有刀把，刀体的下侧设有刃口，刀体内设有蓄液腔，刀体上设有让蓄液腔与外界连通的槽口，槽口位于蓄液腔的下方，槽口处设有封堵条，刀体的侧面上设有簧片，簧片的一侧与刀体固定，簧片的另一侧与封堵条固定，簧片的中间从刀体的侧面凸起，凸起距离刃口1mm-2mm，封膜刀的蓄液腔中装满了生长素溶液液。

步骤3：播种，用镊子夹取步骤2对剖后的种子，将种子的剖面向下放入种植坑内，撒上一层1-3cm厚的培养土，然后用薄膜覆盖在培养盘上，最后在薄膜上用针开设气孔；

步骤4：初苗培养，将培养盘放置在通风能够接触到阳光的室外，避免雨淋，控制培养土的湿度在60％-80％，28d-35d小苗即可萌发，待小苗萌发后撤去薄膜，50d-70d后营养盘内营养耗尽，重新按照步骤1制作新的培养盘，将小苗分盘继续培养；

步骤5：初炼苗，小苗在分盘继续培养80d-90d后，将培养盘中的培养土刮去表面一层，然后将大棚内的新鲜泥土直接洒在培养土表面，10-15d后，用1000倍大黄素甲醚溶液对小苗的叶面喷雾；

步骤6：自然炼苗，将小苗从培养盘中移栽到树林中培育30d-40d后，再用6％寡糖·链蛋白稀释1000倍进行叶面喷雾，然后继续培育30d-40d后，将小苗移植到种植土地自然生长；

步骤7：收获：3-5年后即可收获。

本方案的工作原理及优点在于：步骤1中椰子汁是指椰子坚果腔内的液体胚乳，白及种子是没有胚乳的，椰汁含有丰富的钾、镁等矿物质，其成分与细胞内液的成分相似，在培养基中加入椰子汁，能够有效弥补白及种子因没有胚乳而出苗缓慢的缺点。椰子汁中还含有一定量的植物激素，进一步促进白及种子发芽出苗。

步骤2中，用封膜刀对剖白及种子时，簧片在刀体的侧面的凸起会与白及种子产生相互的挤压，由于簧片的一端与封膜刀固定，因此，簧片会将封堵条向上顶起，这样蓄液腔中的生长素溶液会从槽口流到白及种子的切割面上。生长素溶液具有促进根分化的作用，在播种后能够让白及种子更快的生根。白及种子在种植坑内时，由于白及种子距离培养基是有1mm-5mm的距离的，在生长素溶液刺激白及种子将根分化出来后，利用植物的向肥性，白及种子的根能够快速的向培养基生长。由于在封膜刀切割时即将生长素涂抹上去了，生长素能够对种子的切割面迅速起作用，并且能够起到隔绝空气，保护种子的切割面的作用。如果是先切割，然后再涂抹的话，切割面会有较多的细胞死亡，影响白及种子的萌发率。

步骤5中，小苗在分盘继续培养80d-90d后，培养盘中的大部分营养已经被耗尽，将新鲜泥土引入，新鲜泥土中的细菌由于培养盘中大部分营养被耗尽，细菌营养物质缺乏，不会大规模增殖。新鲜泥土中的细菌会开始侵害小苗，能够刺激小苗自身的免疫能力，然后用1000倍大黄素甲醚溶液对小苗的叶面喷雾，进一步促进小苗的自身的免疫能力，保证小苗的正常生长，让小苗适应有有菌的环境。

步骤6中，在小苗移植到树林中后，小苗还没有完全适应自然环境，此时能够进一步刺激小苗本身的免疫能力，提高小苗移植在自然环境下的成活率，此时用再用6％寡糖·链蛋白稀释1000倍进行叶面喷雾，能够进一步提高小苗的免疫能力。

本方案白及苗组培快繁方法，用椰子汁作为白及种子的胚乳，并且用封膜刀在对剖种子的同时在白及种子的切割面涂抹上生长素，能够快速的促进白及种子分化出根，并且在培养盘的设计上，培养基是位于培养土下方的，白及种子是位于培养土内，在白及种子分化出根后，利用植物根的向肥性，进一步促进白及种子根的生长，提高白及种子的发芽率。并且在将小苗移植到自然环境前，进行两次适应性培养(驯化)，在培养的过程中喷洒提高植物免疫能力的药物，以提高白及的小苗自身的免疫能力，以提高白及的小苗在移植到自然环境下的成活率，解决了组培苗驯化成活率低的问题。

优选方案一：作为基础方案的优选方案，步骤1中，种植坑的坑底距离培养基2-4mm。这种距离在白及的种子分化出来后，能够快速的从培养基中汲取营养。

优选方案二：作为优选方案一的优选方案：步骤1中，在培养基上均匀铺洒一层8-10mm厚的培养土。这种厚度的培养土，能够方便白及的种子发芽，并且这种厚度的培养土保水性也较好。

优选方案三：作为优选方案二的优选方案：步骤2中，储液腔内盛有生长素类似物溶液，生长素类似物溶液配制方法如下：选用2，4-D原粉1g，放入烧杯中，加入少量水，并滴入浓度为1％的酚酞溶液，然后在用浓度为5％氢氧化钠溶液滴定，每滴入一滴浓度为5％氢氧化钠溶液均要搅拌，直至搅拌后粉红色不消失，然后再加水至1000ml。这种方法配置的生长素类似物溶液中富含钠离子，能够哦促进白及的种子的生长。

优选方案四：作为方案三的优选方案：步骤5中，用1000倍大黄素甲醚溶液对小苗的叶面喷雾2-3次。能够提高小苗的成活率。

优选方案五：作为优选方案四的优选方案：步骤5中，用1000倍大黄素甲醚溶液对小苗的叶面喷雾2-3次，每次间隔8天。能够提高小苗的成活率。

附图说明

图1是本发明白及苗组培快繁方法实施例1中封膜刀的结构示意图；

图2是本发明白及苗组培快繁方法实施例1中封膜刀的侧剖图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明作进一步详细的说明：

说明书附图中的附图标记包括：刀体1、刀把11、刃口12、蓄液腔2、槽口21、封堵条22、簧片23。

实施例1

白及苗组培快繁方法，包括如下步骤：

步骤1：培养土准备，将培养土放置在盘子内后，对其进行疏松后，放入蒸汽锅中进行杀菌消毒，然后在培养盘中用1/2MS培养基配方加入50ml椰子汁，50ml土豆汁，6g琼脂，配置成营养层，120度高温蒸汽灭菌10分钟后，待其自然冷却后，在培养基上均匀铺洒一层8mm厚的培养土，然后轻轻压实后刮平，然后在培养土表面挖一个种植坑，种植坑的坑底距离培养基4mm；

步骤2：外植体准备，选用在白及果荚呈褐色采集的新鲜的10000颗白及种子作为组培外植体，将白及种子放置到浓度为70％的乙醇溶液中浸泡5分钟，取出沥干后，用封膜刀将白及种子对剖；所述封膜刀(如附图1、图2所示)包括刀体1，刀体1的一端设有刀把11，刀体1的下侧设有刃口12，刀体1内设有蓄液腔2，刀体1上设有让蓄液腔2与外界连通的槽口21，槽口21位于蓄液腔2的下方，槽口21处设有封堵条22，刀体1的侧面上设有簧片23，簧片23的一侧与刀体1固定，簧片23的另一侧与封堵条22固定，簧片23的中间从刀体1的侧面凸起，凸起距离刃口121mm，封膜刀的蓄液腔2中装满了2,4-D溶液。

生长素类似物溶液，配置方法如下：选用2,4-D原粉1g，放入烧杯中，加入少量水，并滴入浓度为1％的酚酞溶液，然后在用浓度为5％氢氧化钠溶液滴定，每滴入一滴浓度为5％氢氧化钠溶液均要搅拌，直至搅拌后粉红色不消失，然后再加水至1000ml。这种方法配置的生长素类似物溶液中富含钠离子，能够哦促进白及的种子的生长。

步骤3：播种，用镊子夹取上述对剖后的种子，将种子的剖面向下放入种植坑内，撒上一层2cm厚的培养土，然后用薄膜覆盖在培养盘上，最后在薄膜上用针开设气孔；

步骤4：初苗培养，将培养盘放置在通风能够接触到阳光的室外，避免雨淋，控制培养土的湿度在60％-80％，28d-35d小苗即可萌发，待小苗萌发后撤去薄膜，50d-70d后营养盘内营养耗尽，重新按照步骤1制作新的培养盘，将小苗分盘继续培养；

步骤5：初炼苗，小苗在分盘继续培养80d-90d后，将培养盘中的培养土刮去表面一层，然后将大棚内的新鲜泥土直接洒在培养土表面，10-15d后，用1000倍大黄素甲醚溶液对小苗的叶面喷雾2-3次，每次间隔8天。

步骤6：自然炼苗，将小苗从培养盘中移栽到树林中培育30d-40d后，再用6％寡糖·链蛋白稀释1000倍进行叶面喷雾，然后继续培育30d-40d后，将小苗移植到种植土地自然生长；

步骤7：收获：3-5年后即可收获。

对比例1

与实施例1相比，不同之处仅在于，在步骤2中，未采用封膜刀对剖种子，采用的是普通的刀对剖，间隔3min后涂抹生长素。

对比例2

与实施例1相比，不同之处仅在于，步骤5不执行，在步骤4之后直接执行步骤6。

对比例3

与实施例1相比，不同之处仅在于，步骤6不执行，在步骤5之后，直接将小苗移植到自然环境中。

对比例4

采用现有的组培方式培植出的幼苗。现有的组培方式如下：(1)培养土的准备，(2)播种、喷水，(3)覆盖，(4)灌溉，(5)出棚培育，(6)喷洒叶面肥，(7)移植到自然环境。

记录上述实施例和所有对比例中的小苗在萌发率、幼苗萌发时间、小苗在各个步骤的成活率以及移植到种植地自然生长30d后的成活率。得到结果如表1所示：

表1

通过对比实施例1与对比例1，可得出结论，使用封膜刀对剖白及种子，能够有效的提高白及种子的萌发率，缩短白及种子的萌发时间，提高幼苗的成活率。

通过对比实施例1与对比例2，可得出结论，在本发明中，步骤5，初炼苗能够与步骤6配合，提高白及苗在自然条件下的成活率。

通过对比实施例1与对比例3，可得出结论，在本发明中，步骤6，能够与步骤5配合，提高白及苗在自然条件下的成活率。

通过对比实施例1与对比例4，可得出结论，本发明与现有技术相比，能够有效地提高白及组培苗成活率。

以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。