1.一种降低深低温冻存组织器官冰晶损伤的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1) 将待冷冻的器官连接预冷至4℃的梯度浓度混合程控降温器官灌注仪,灌注25℃恒温的间充质干细胞条件培养基,灌注时间为30-60 min;
所述间充质干细胞条件培养基为传代5代内脂肪、脐带、脐血或骨髓中的一种的间充质干细胞,在传代后24h后长到70~80%汇合,更换无血清间充质干细胞培养基,48h后收集的培养上清,经1000~3000g离心10~30min,取上清后使用0.1µm~0.22µm微孔滤膜过滤后所得;
2)然后向器官灌注预冷至4℃的冷冻保护剂,灌注时长30min;
3)将处理完毕的器官放入冷冻袋,封口后置于程控降温仪中,按照设定降温程序进行程序化降温,待其温度降至-80℃后投入液氮中存放;
所述程控降温仪降温程序设定为①4℃平衡,②以1℃/min的速度降至0℃,并保持10min,③以2℃/min的速度降至-18℃,保持15min,④以2℃/min速度降至-45℃,保持15min,⑤再以5℃/min的速度降至-90℃,保持5min;
4)复苏器官时,将冻存器官自液氮取出后置于37℃水浴中,不断摇动;
5)完全融化后再次进行灌注,灌注液为12-25℃的含间充质干细胞条件培养基,灌注时间为30min-60min;
处理完成的器官可直接进行移植。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述间充质干细胞条件培养基,细胞密度为1x107/L,灌注速度为1.5ml/min。