本发明涉及一种杉木种植
技术领域：
，具体涉及一种杉木茎连接处的明蘖组织培养繁殖方法。
背景技术：
：杉木，我国重要的用材林树种，距史料记载，杉木栽培历史已经有100年有余，为我国经济发展做出了突出的贡献，其生长快，材质好，目前已被人工大量培育，目前，较为成熟的杉木快速繁殖方式较多，主要包括有性繁殖和无性繁殖两种，在林木生产中，有性繁殖是指通过种实培育生苗，无性繁殖则包括通过插条、插根、压条、埋条、根蘖、插叶、嫁接和组织培养方式培育营养繁殖苗，在杉木组织培养过程中，目前技术并不十分成熟，因此培养成功率较低。技术实现要素：本发明提供一种杉木茎连接处的明蘖组织培养繁殖方法。本发明技术方案如下：一种杉木茎连接处的明蘖组织培养繁殖方法，包括以下步骤：（1）外植体灭菌：选择7-8年生杉木根茎连接处的明蘖作为外植体，将外植体浸渍于质量浓度为4.5-5%的碘化银水溶液中，在功率为160-180W的超声波下处理8-10秒；（2）诱导形成愈伤组织：将灭菌后的外植体接种至愈伤组织培养基中，愈伤组织培养基组成为MS培养基中+辣木籽浸提液3-3.4mg/L；（3）芽组织诱导：将外植体接种至芽组织培养基中，芽组织培养基组成为MS培养基中+曼陀罗子浸提液1-1.2mg/L；芽组织诱导期间，先将外植体置于18-20℃下培养10-12小时，再置于28-30℃下培养30-40小时；（4）根诱导：将外植体人工固定接种至根组织培养基中，根组织培养基组成为浓度为3%的氨基葡萄糖盐酸盐水溶液；根组织诱导期间，将小分子团水与氧气混合缓慢通入氨基葡萄糖盐酸盐水溶液中，保持水池内的水慢慢流动。其中，辣木籽浸提液，曼陀罗子浸提液均为醇提液，并经浓缩至固形物含量在35-38%得到。本发明有益效果在于，本发明以杉木茎连接处的明蘖作为外植体诱导培养杉木小苗，诱导成本低，诱导方法简单，可大量成批诱导，能使外植体快速形成带根带芽小苗，将外植体浸渍于碘化银水溶液中并超声波下处理，可快速充分灭除外植体表面及孔隙内的一切微生物，降低培养过程中细菌和真菌的污染率；辣木籽浸提液能提高细胞分化活跃度，添加于MS培养基中可促使愈伤组织快速形成，形成大小适当的愈伤组织，愈伤组织诱导率在99.95%以上，诱导形成的愈伤组织呈淡黄色且生长旺盛；曼陀罗子浸提液能够促进外植体合成生长素和细胞分裂素，添加于MS培养基中可促使外植体生成数量较多的不定芽，从芽诱导发芽率可达到99.2%以上；芽诱导期间先将外植体置于18-20℃下培养10-12小时，再置于28-30℃下培养30-40小时可有效缩短不定芽诱导所需时间；以3%的氨基葡萄糖盐酸盐水溶液作为营养源诱导不定根生成效果较好，不定根诱导率在98.7%以上，诱导期间，将小分子团水与氧气混合缓慢通入氨基葡萄糖盐酸盐水溶液中可加快不定根生成，并提高不定根生成数量，最终诱导不定根数量多，生长快，粗壮。具体实施方式以下结合实例，对本发明作进一步的说明。但本发明的保护范围不应局限于此。实施例1、一种杉木茎连接处的明蘖组织培养繁殖方法，包括以下步骤：（1）外植体灭菌：选择7-8年生杉木根茎连接处的明蘖作为外植体，将外植体浸渍于质量浓度为4.5%的碘化银水溶液中，在功率为160W的超声波下处理8秒；（2）诱导形成愈伤组织：将灭菌后的外植体接种至愈伤组织培养基中，愈伤组织培养基组成为MS培养基中+辣木籽浸提液3mg/L；（3）芽组织诱导：将外植体接种至芽组织培养基中，芽组织培养基组成为MS培养基中+曼陀罗子浸提液1mg/L；芽组织诱导期间，先将外植体置于18℃下培养10小时，再置于28℃下培养30小时；（4）根诱导：将外植体人工固定接种至根组织培养基中，根组织培养基组成为浓度为3%的氨基葡萄糖盐酸盐水溶液；根组织诱导期间，将小分子团水与氧气混合缓慢通入氨基葡萄糖盐酸盐水溶液中，保持水池内的水慢慢流动。其中，辣木籽浸提液，曼陀罗子浸提液均为醇提液，并经浓缩至固形物含量在35%得到。实施例2、一种杉木茎连接处的明蘖组织培养繁殖方法，包括以下步骤：（1）外植体灭菌：选择7-8年生杉木根茎连接处的明蘖作为外植体，将外植体浸渍于质量浓度为5%的碘化银水溶液中，在功率为160-180W的超声波下处理10秒；（2）诱导形成愈伤组织：将灭菌后的外植体接种至愈伤组织培养基中，愈伤组织培养基组成为MS培养基中+辣木籽浸提液3.4mg/L；（3）芽组织诱导：将外植体接种至芽组织培养基中，芽组织培养基组成为MS培养基中+曼陀罗子浸提液1.2mg/L；芽组织诱导期间，先将外植体置于20℃下培养12小时，再置于30℃下培养40小时；（4）根诱导：将外植体人工固定接种至根组织培养基中，根组织培养基组成为浓度为3%的氨基葡萄糖盐酸盐水溶液；根组织诱导期间，将小分子团水与氧气混合缓慢通入氨基葡萄糖盐酸盐水溶液中，保持水池内的水慢慢流动。其中，辣木籽浸提液，曼陀罗子浸提液均为醇提液，并经浓缩至固形物含量在38%得到。以下结合具体诱导试验对本发明进一步说明，诱导试验分为实验组、对照组1、对照组2、对照组3四组，其中实验组按照实施例1方式进行繁殖；对照组1在实施例1的基础上取消外植体灭菌工序；对照组2在实施例1的基础上取消加入辣木籽浸提液、曼陀罗子浸提液；对照组3在实施例1的基础上取消芽组织诱导期间，先将外植体置于20℃下培养12小时，再置于30℃下培养40小时；根组织诱导期间，将小分子团水与氧气混合缓慢通入氨基葡萄糖盐酸盐水溶液中，保持水池内的水慢慢流动；四组所用外植体均取自同一种植场内7年生杉木根茎连接处的明蘖，外植体外观与健康状况差异极微，每组30个，各组诱导环境相同；其中，试验期间，除实验组按实施例1规定时间进行诱导外，对照组3组根据外植体实际生长情况进行诱导；试验期间，对各组诱导期间污染率、愈伤组织诱导率、愈伤组织诱导所需时间、从芽诱导发芽率，从芽诱导所需时间、不定根诱导率，不定根诱导所需时间进行统计，结果见下表1：组别污染率（%）愈伤组织诱导率（%）愈伤组织诱导所需时间从芽诱导发芽率（%）从芽诱导所需时间不定根诱导率（%）不定根诱导所需时间实验组099.9826小时99.540小时99.0228小时对照组192%------对照组2060.342小时38.865小时20.544小时对照组3099.9540小时99.9262小时98.943小时由表1可知，外植体经实施例1方式灭菌后再进行诱导，可显著降低诱导污染率，向MS培养基中加入辣木籽浸提液可显著提高愈伤组织诱导率，向MS培养基中加入曼陀罗子浸提液可显著提高从芽诱导发芽率，浓度为3%的氨基葡萄糖盐酸盐水溶液诱导不定根生成率较高，芽组织诱导期间，先将外植体置于20℃下培养12小时，再置于30℃下培养40小时；根组织诱导期间，将小分子团水与氧气混合缓慢通入氨基葡萄糖盐酸盐水溶液中，保持水池内的水慢慢流动，能分别缩短愈伤组织诱导所需时间、从芽诱导所需时间。当前第1页1 2 3