一种桃叶卫矛叶片再生植株的生产方法与流程

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种桃叶卫矛叶片再生植株的生产方法。

二技术背景

桃叶卫矛因其木材材质好、种子含油高、观赏价值高、人工林栽植面积大，已经成为21世纪改善人类生存环境，满足人类生活需求最有潜力的园林树种之一。

桃叶卫矛繁殖一般采用播种、扦插、分株繁殖等方法，但由于受种子园数量以及产量所限制，所获得的优质苗木非常少，繁殖速度比较慢，播种繁殖种子的采集时间要求很强，采种后预处理复杂，后期管理要求高，在生产上很难采用种子繁殖的方法大规模培育苗木，如何利用植物组织培养的方法，进行优质苗木的选育，成为桃叶卫矛繁殖过程中关注的焦点。

三

技术实现要素：

本发明需要解决的问题是针对桃叶卫矛优质苗木繁育中的需求，发明了一种桃叶卫矛叶片再生植株的生产方法，为桃叶卫矛优质苗木的繁育和品种改良提供生产和研究材料。

本发明所述桃叶卫矛叶片再生植株的生产方法由以下步骤构成：

(1)外植体的选择与消毒：

选择生长健壮无病害的桃叶卫矛的幼嫩叶片作为外植体，将材料经流水冲洗1h，去除表面杂物，在无菌操作工作台上，先用灭菌的无菌水冲洗3遍，再用75％无水乙醇消毒30s，接着用无菌水冲洗3遍，然后用0.1％氯化汞消毒处理3-6min，最后用灭菌的无菌水冲洗4遍；

(2)愈伤组织的诱导：

在超净工作台上，将消毒好的叶片切成6mm大小的方块，接种于诱导愈伤培养基上(配方为：MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂；Ph调为5.8)，叶的背面紧贴培养基，每瓶接种3-4块，诱导光照条件14h/d，光照强度2000lux，温度23-28℃；

(3)不定芽的诱导：

将经过继代培养1次后的黄绿色愈伤组织转接到诱导不定芽分化培养基上(配方为：MS+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂；Ph调为5.8)，诱导光照条件14h/d，光照强度2000lux，温度23-28℃；

(4)根的诱导：

经过不定芽诱导得到再生芽，待再生芽长到4-5片叶子，长度0.8-1.2cm高时转入生根培养基诱导生根(配方为：1/2MS+1.5mg/LIBA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂；Ph调为5.8)，诱导光照条件14h/d，光照强度2000lux，温度23-28℃；。

本发明所述桃叶卫矛叶片再生植株培养周期为55-65天。

本发明与现有技术相比，其有益效果是：本发明使用桃叶卫矛叶片作为材料，取材方便，数量充足，接种后在较短时间内形成愈伤组织直至生根形成幼苗植株，所得植株生长健壮，平均根长均明显增大。繁殖系数为8.2，培养条件可人为控制。利用本方法，可以提高桃叶卫矛幼苗繁殖系数和成活率，培养周期短，变异少，培养条件可人为控制，操作方法简单，为桃叶卫矛叶片作为优良的科研材料进行遗传转化和品种改良等研究奠定基础，从而为桃叶卫矛大面积生产组培苗提供保障。为桃叶卫矛的大规模生产提供了优质的组培苗。

四附图说明

图1桃叶卫矛叶片外植体

图2桃叶卫矛再生植株的愈伤组织

图3桃叶卫矛再生植株的丛生芽

图4桃叶卫矛再生植株的生根幼苗

五具体实施方式

1，繁殖材料的选择

试验材料取自金陵科技学院实验站的两年生桃叶卫矛叶片。

2，繁殖材料的消毒

将材料经流水冲洗1h去除表面杂物，在无菌操作工作台上，先用无菌水冲洗3遍，再用75％无水乙醇消毒30s，接着无菌水冲洗3遍，然后用0.1％氯化汞消毒处理5-7min，最后用灭菌的无菌水冲洗4遍；见附图1。

3，愈伤组织的诱导

在超净工作台上，将消毒好的叶片切成6mm大小的方块，接种于愈伤诱导培养基上，叶的背面紧贴培养基，每瓶接种3-4块，诱导光照条件14h/d，光照强度2000lux，温度23-28℃；见附图2

4，不定芽的诱导

将经过连续继代培养2-3次后的黄绿色愈伤组织转接到诱导不定芽分化培养基上，诱导光照条件14h/d，光照强度2000lux，温度23-28℃；见附图3

5，根的诱导

经过不定芽诱导得到再生芽，待再生芽长到4-5片叶子，长度1cm高时可转入生根培养基诱导生根，诱导光照条件14h/d，光照强度2000lux，温度23-28℃。幼苗生根情况，见附图4。