一种防治蔬菜真菌病害的方法及应用与流程

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种防治蔬菜真菌病害的方法及应用。

背景技术：

真菌是蔬菜中常见的病害，真菌病害在植物病害种类中约占80％以上，蔬菜被真菌侵染所致的病害相当严重。真菌可以直接由表皮侵入寄主，也可从伤口或自然口侵入，病菌多在病残体、种子、土壤、留种植株或温室蔬菜上越冬，主要借风雨传播落在蔬菜上，遇适宜条件便可寄主危害。目前，蔬菜中的真菌多用农药来抑制，例如扑海因、代森锰锌、多菌灵、百菌清、克露、瑞毒霉锰锌等杀菌剂，喷洒农药给土壤和环境造成了极大的危害，大量使用农药会导致蔬菜上农药残留，长期食用农药残留的蔬菜，也对人们的生命安全造成极大的威胁。

技术实现要素：

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明提供了一种防治蔬菜真菌病害的方法，包括如下步骤：

步骤1、制备臭氧水；

步骤2、将步骤1中制备的臭氧水喷洒至蔬菜表面。

优选地，臭氧水的浓度不大于8mg/L。

更优选地，臭氧水的浓度为6mg/L。

上述方法中，蔬菜为绿叶类蔬菜和/或茄果类蔬菜。优选地，蔬菜为青菜、菠菜、生菜、番茄和黄瓜中的一种或几种。

可防治的真菌病害包括瓜果腐霉、立枯丝核菌、番茄灰霉病菌、番茄叶霉病菌、番茄早疫病菌和黄瓜靶斑病菌中的一种或几种。

本发明还提供了臭氧水在防治蔬菜真菌病害中的应用，臭氧水可替代农药防治蔬菜真菌病害。

在上述应用中，臭氧水的浓度优选为6mg/L。

在上述应用中，蔬菜为绿叶类蔬菜和/或茄果类蔬菜。优选地，蔬菜为青菜、菠菜、生菜、番茄和黄瓜中的一种或几种。

在上述应用中，真菌病害包括瓜果腐霉、立枯丝核菌、番茄灰霉病菌、番茄叶霉病菌、番茄早疫病菌和黄瓜靶斑病菌中的一种或几种。

本发明提供的抑制蔬菜真菌病害的方法，采用直接对真菌喷洒臭氧水，以达到抑制其生长的效果。其中，臭氧水来自于臭氧发生器产生的臭氧与水溶液互溶。其杀菌速度是氯的600倍，紫外线的1000倍，对真菌的杀菌作用高效快速。臭氧极易分解为氧气，不会对环境造成二次污染，是一种环保型的“绿色药剂”。

以下将结合附图对本发明作进一步说明，以充分说明本发明的目的、技术特征和技术效果。

附图说明

图1示出了本发明较优实施例中臭氧水对立枯丝核菌的杀菌效果图；a-g分别为阳性对照、阴性对照以及1.5、3、4.5、6、7.5mg/L浓度的臭氧水处理过的培养基；

图2示出了本发明较优实施例中喷洒不同浓度臭氧水15天后青菜的长势；1：对照组青菜喷洒清水；2-6：处理组青菜分别为喷洒浓度为2、4、6、8、10mg/L臭氧水。

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明进行进一步描述。

实施例1

臭氧水杀真菌效果

本实施例中选用的立枯丝核菌为无孢科、丝核菌属半知菌真菌，是一种严重危害农作物的土传病原菌，主要危害稻、麦、棉和多种蔬菜瓜果等农作物植株，引起白菜立枯病、白菜叶腐病、番茄茎基腐病等。通常危害蔬菜幼苗，造成病部收缩、干枯，病苗呈萎焉状，随之渐渐枯死。一般用百菌清等化学农药防治。

以中国农业大学提供的立枯丝核菌菌株培养立枯丝核菌菌株，该菌株在PDA固体培养基中培养，长至1周后产生成熟菌丝后，停止培养。

取生长旺盛的立枯丝核菌菌丝1g，溶解于10mL的无菌水中，离心将菌丝再次重悬于5mL无菌水中，涡旋振荡器震荡重悬液10min，使其菌丝完全断裂，均匀悬浮于无菌水中，再次离心后，用无菌水1mL重悬即可。在新鲜的PDA培养基上，中央位置悬滴10ul重悬液，静止5min后，封口于28℃培养24h。待发现菌丝有开始生长趋势时开始臭氧水的喷洒实验，臭氧水现用现制，分别选用0、1.5、3、4.5、6、7.5mg/L浓度的臭氧水进行实验。在超净工作台内操作。该实验模拟臭氧水直接喷洒蔬菜实验，将不同浓度的臭氧水直接喷洒到生长于PDA培养基上的立枯丝核菌。以不喷洒任何液体和喷洒无菌水为对照，其余各组分别喷洒不同浓度的臭氧水各1ml，在培养基的下方横切约1cm的切口供多余的臭氧水流入，喷雾器口与培养基的距离约为5cm，喷洒后盖上培养皿盖，倾斜30°供臭氧水流出。放置5min后，封口再次放入培养箱中继续培养。每12h喷洒一次臭氧水，共喷洒3天。结果如图1所示。

由图1可知，培养基中立枯丝核菌的菌圈大小随着臭氧水浓度的增加而逐渐缩小，直到臭氧水浓度为7.5mg/L时，真菌的抑制率约为90％。

实施例2

臭氧水喷洒绿叶菜的研究

1、实验环境

本研究开展于上海市奉贤区上海师范大学种植资源中心玻璃温室(东经120°30′46",北纬30°50′35")，温室长32米，宽24米，高3.5米。室内温度白天20-25℃，夜晚12-18℃，湿度60％-75％，阴雨天光照用补光灯照射弥补光照，冬天温室有供暖系统，保持温室中植物的正常生长。

2、材料与方法

2.1、不同浓度臭氧水喷洒蔬菜

待定植后的幼苗真叶长出6～8片时，每天早上进行一次臭氧水喷洒处理。以喷洒清水作为对照组，其余各组分别喷洒不同浓度的臭氧水于叶表面，喷壶口与植物叶片距离为15cm，每筐均匀喷洒50mL，共喷洒15天。且每隔3天浇灌相同量的自来水于基质中补足水分，生长期间浇灌两次基质栽培营养液。

2.2、蔬菜生长指标的检测

青菜的检测指标包括：株高、茎粗、鲜重、叶面积、叶片数等。采用直尺测量植株株高(地上部分)，茎粗利用游标卡尺进行测量，分析天平测定单株鲜重，卤素水分测定仪检测绿叶菜水分，叶面积依据公式计算，即单叶面积＝叶长×叶宽×0.7007。以上指标每组随机选取5株进行平行测定。

3、结果

臭氧水可以抑制青菜致病菌的生长，我们通过喷洒不同浓度的臭氧水，对易感染立枯丝核菌的青菜作用15天后，检测其各形态学生长指标(表-1)。包括的株高、鲜重、菜头粗和叶面积。由表中数据可见，经过臭氧水处理后的青菜的生物量有轻微的增加。青菜生长增加的方面包括：1)、与对照相比，2-8mg/L臭氧水处理后的青菜的株高分别增加了：19.18％、10.92％、11.78％和18.03％。2)、4mg/L和6mg/L浓度的臭氧水作用后的青菜鲜重分别增加了8.84％和8.04％。图2示出了喷洒不同浓度臭氧水15天后青菜的长势；1：对照组青菜喷洒清水；2-6：处理组青菜分别为喷洒浓度为2、4、6、8、10mg/L臭氧水。随着臭氧水浓度的增加，我们发现6mg/L浓度的臭氧水作用后的青菜鲜重和菜头粗数值最高，并且8-10mg/L臭氧水作用后的青菜总生物量下降(表-1)。除此之外，由以上生物学特性及相关数据可知，合适浓度范围的臭氧水不会对青菜的生长造成负面影响，对青菜的产量不会产生风险。

表1.青菜喷洒15天臭氧水后的形态学特征

注：同一行数据中相同字母代表无显著差异，不同字母代表存在显著差异。数据分析使用AVOVA，平均值之间的差异使用Duncan多重范围检测。

由上表可知，作为一种抗菌剂，臭氧水可以用于直接喷洒不结球青菜。不高于8mg/L浓度的臭氧水不会影响青菜的正常生长。臭氧水会增加青菜的抗氧剂含量和光合活性，增加农作物的保护预防致病菌的侵害。但是在农业生产应用方面建议使用6mg/L浓度的臭氧水。

类似的，此浓度范围的臭氧水适用于其他绿叶类蔬菜和/或茄果类蔬菜，例如，青菜、菠菜、生菜、番茄或黄瓜。防治的真菌病害包括瓜果腐霉、立枯丝核菌、番茄灰霉病菌、番茄叶霉病菌、番茄早疫病菌和黄瓜靶斑病菌等。

以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思做出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。