本发明涉及现代农业栽培技术领域，尤其涉及一种驯化筛选富硒蕈菌菌种的方法。
背景技术：
硒(se)在人体中的含量虽然不过0.1-0.2ppm，却是生命活动中不可缺少的重要元素。硒具有提高机体免疫力、促进疾病康复、抗癌和抗衰老等功效。中国营养学会推荐的“每日膳食中营养素供应量与我国的膳食指南”中规定，硒的日必需摄入量成年和少年为50微克，儿童为20(1－3岁)至40(4－6岁)微克，这是必需量的下限。根据调查显示，目前全国成人的硒平均摄入量仅26.6微克/日，差不多只及必需量下限的1/2和较好水平的1/10，因此绝大多数人都需要尽快增加硒的摄入量，而且应该终生补硒。
我国曾经用无机硒盐亚硒酸钠防治克山病和大骨节病，获得显著效果。但是用无机硒盐补硒，吸收和利用方面都不理想，摄入量少不起作用，稍微过量就有毒副反应。因此近年都趋向采用有机硒。除高硒地区的农牧产品外，主要利用富含硒元素的菌物和藻类。所谓富硒蕈菌，就是指含硒量大大高于天然食品的食菌或药菌。富硒蕈菌既可作滋补保健食品，又能制成药剂，残余的菌糠还是极佳的富硒饲料和肥料，生产成本不高，而且计量供给的可操作性较好，具有很好的效益。
目前的富硒蕈菌培植方法，一般采用两种方式：1、直接将无机硒加入蕈菌菌种培养基中，让蕈菌菌丝生长过程中吸收培养基中的硒元素，从而长成含有硒元素的富硒蕈菌；2、给菌棒喷施富硒营养液方式：如cn1823570a公开了一种富硒食用菌的栽培方法，富硒食用菌原料由玉米芯、秸秆粉、米糠或麦麸、石膏、硫酸镁、硫酸锌、硒盐、水等按重量百分配比制成；装袋，封口，灭菌，接入食用菌种，然后发酵，发酵时间20-40天，菌丝长满整个料面，即制成菌棒，然后喷施富硒营养液。
以上两种方式获得的富硒蕈菌有机硒含量约为0.1ppm左右，有机硒含量过低不能满足食用和药用需求，效率低，而且上述两种方式获得的硒绝大部分为无机硒，容易产生毒副作用，有害于人体健康，因此亟待开发一种新的富硒蕈菌培植方法，能够大力提高蕈菌中的有机硒含量，提高生产效率，避免毒副反应，保障人体健康。从培植富硒蕈菌入手，进而生产补硒功能的食品和药品，是一条可行的发展途径。具有较好的社会效益、生态效益和经济效益。
技术实现要素：
针对现有技术的缺陷，本发明旨在提供一种驯化筛选富硒蕈菌菌种的方法，能够大力提高蕈菌中的硒含量和有机硒含量，减少无机硒，提高培育效率，避免毒副反应，保障人体健康。
本发明的技术方案：
一种驯化筛选富硒蕈菌菌种的方法，包括：准备候选蕈菌菌种，制作一级菌种培养基，定量分装一级菌种培养基并分别在其中添加不同浓度的亚硒酸钠溶液，得到不同浓度的含硒培养基，将候选蕈菌菌种接种至不同浓度的含硒培养基中培养，保持适宜的温度、湿度和酸碱度，通过驯化筛选获得富硒能力强的候选蕈菌菌种作为一级菌种。
优选的，包括以下步骤：
(1)选择抗逆性强、生长快、产量高的2个以上不同蕈菌菌种，作为候选蕈菌菌种；
(2)制作一级菌种培养基；
(3)定量分装一级菌种培养基并分别在其中添加不同浓度的亚硒酸钠溶液，得到不同浓度的含硒培养基；
(4)将步骤(1)中的候选蕈菌菌种分别接种到步骤(3)不同浓度的含硒培养基中，保持温度20-28℃，湿度60-70％，ph6-7，培养7-15天；
(5)观察步骤(4)中候选蕈菌菌种在不同浓度的含硒培养基中的生长情况，选择菌丝生长旺盛健壮、生长速度快的作为一级菌种，记录培养一级菌种的亚硒酸钠浓度作为最优亚硒酸钠浓度，并保藏一级菌种。
优选的，所述步骤(3)中的添加不同浓度的亚硒酸钠溶液是指在一级菌种培养基中分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液。
优选的，所述一级菌种培养基为pda培养基，每1000mlpda培养基中包括如下重量比的原料组分：去皮土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾1.5g、磷酸氢二钾1.5g、硫酸镁3g、维生素b110mg、琼脂20g，其余为水。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明采用驯化筛选富硒能力强的一级菌种的培育方法，将富硒蕈菌有机硒含量从0.1ppm提升至100-500ppm，产量约为现有产品的1000-5000倍。采用这种方式获得的富硒蕈菌有机硒含量占总含硒量的90％以上，氨基酸含量也随之显著提高。本发明能够大力提高蕈菌中的有机硒含量，减少无机硒，提高生产效率，避免毒副反应，保障人体健康。
附图说明
附图1为本发明的工艺流程图。
具体实施方式
参照图1所示，为了便于理解本发明的技术方案，本发明的典型但非限制性的实施例如下：
实施例一
按照下列方法制得一级菌种培养基：
(1)土豆去皮，去芽眼，称取200g，切成1-2克的滚刀块，放入锅中，加入1000ml水，煮沸后再煮10min。用4-6层纱布过滤弃渣，滤液倒回锅内，加入琼脂20g，边用文火加热边用玻璃棒搅拌，至琼脂溶化后加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾1.5g、磷酸氢二钾1.5g、硫酸镁3g、维生素b110mg。加水补足至1000ml，趁热倒入量筒，得到液体培养基。
(2)将漏斗安放在铁架台的夹子上，漏斗下口连接乳胶管，管上夹一弹簧夹，作为控制开关，管下接尖嘴玻璃管。将液体培养基趁热注到漏斗中，将尖嘴玻璃管插入8-180cm的试管内，开放弹簧夹，让液体培养基流入试管，试管口内的3cm处不可沾有液体，每个试管内装液体培养基8ml，试管口加棉塞。棉塞保持1/3在管外、2/3在管内塞紧，7支试管困成一把，用防水纸将塞有棉塞的一端包好，用线绳扎紧，将试管立放在铁丝框中，以备灭菌。
(3)在手提式高压锅中加入3000-3500ml水，将小铁丝框置于其内，在小铁丝框上盖上报纸，盖好盖，拧紧加热至125℃。水沸腾后排气10-20min，再关闭放气阀门，使压力逐渐上升。当压力达到0.12mpa时，开始计时，维持恒压30min后，关闭热源，让压力慢慢下降至零。
(4)打开锅盖，待温度降至60℃且试管壁上没有水珠时，将试管口的一端搁在木条上，另一端搁在桌面上，形成一定的斜度，将斜面调整在试管长度的3/5处，待培养基冷凝，此时一级菌种培养基配制完成，移至恒温箱内25℃下培养3-7天，确认无污染后放入冰箱4℃保存备用。
实施例二
按照如下步骤驯化筛选，获得富硒平菇一级菌种：
(1)选择抗逆性强、生长快、产量高的2个平菇菌种，作为候选平菇菌种。
(2)制作一级菌种培养基；一级菌种培养基为pda培养基，每1000mlpda培养基中包括如下重量比的原料组分：去皮土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾1.5g、磷酸氢二钾1.5g、硫酸镁3g、维生素b110mg、琼脂20g，其余为水。
(3)准备18根试管，按9根试管每组分为两组即第一组和第二组，分别在第一组、第二组试管内分装一级菌种培养基8ml，并在第一组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第二组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，得到两组9种不同浓度的含硒培养基。
(4)将步骤(1)中的2种候选平菇菌种分别接种到步骤(3)两组9种不同浓度的含硒培养基中：即将第一种候选平菇菌种分别接种至第一组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，再将第二种候选平菇菌种分别接种至第二组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，保持温度20-28℃，湿度60-70％，ph6-7，培养7天。
(5)观察步骤(4)中候选平菇菌种在不同浓度的含硒培养基中的生长情况，选择菌丝生长旺盛健壮、生长速度快的作为一级菌种，这里所述的生长速度快是指7-10天菌丝长满斜面，比如在第一组30ppm含硒培养基中的第一种候选平菇菌种生长情况最优良，则选择第一种候选平菇菌种作为一级菌种。
实施例三
按照如下步骤驯化筛选，获得富硒平菇一级菌种：
(1)选择抗逆性强、生长快、产量高的5个平菇菌种，作为候选平菇菌种。
(2)制作一级菌种培养基；一级菌种培养基为pda培养基，每1000mlpda培养基中包括如下重量比的原料组分：去皮土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾1.5g、磷酸氢二钾1.5g、硫酸镁3g、维生素b110mg、琼脂20g，其余为水。
(3)准备45根试管，按9根试管每组分为五组即第一组、第二组、第三组、第四组和第五组，分别在第一组、第二组、第三组、第四组和第五组试管内分装一级菌种培养基8ml，并在第一组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第二组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第三组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第四组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第五组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，得到五组9种不同浓度的含硒培养基。
(4)将步骤(1)中的5种候选平菇菌种分别接种到步骤(3)五组9种不同浓度的含硒培养基中：即将第一种候选平菇菌种分别接种至第一组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第二种候选平菇菌种分别接种至第二组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第三种候选平菇菌种分别接种至第三组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第四种候选平菇菌种分别接种至第四组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第五种候选平菇菌种分别接种至第五组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，保持温度20-28℃，湿度60-70％，ph6-7，培养7天。
(5)观察步骤(4)中候选平菇菌种在不同浓度的含硒培养基中的生长情况，选择菌丝生长旺盛健壮、生长速度快的作为一级菌种，这里所述的生长速度快是指7-10天菌丝长满斜面，比如在第三组90ppm含硒培养基中的第三种候选平菇菌种生长情况最优良，则选择第三种候选平菇菌种作为一级菌种。
实施例四
按照如下步骤驯化筛选，获得富硒凤尾菇一级菌种：
(1)选择抗逆性强、生长快、产量高的3个凤尾菇菌种，作为候选凤尾菇菌种。
(2)制作一级菌种培养基；一级菌种培养基为pda培养基，每1000mlpda培养基中包括如下重量比的原料组分：去皮土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾1.5g、磷酸氢二钾1.5g、硫酸镁3g、维生素b110mg、琼脂20g，其余为水。
(3)准备27根试管，按9根试管每组分为三组即第一组、第二组和第三组，分别在第一组、第二组和第三组试管内分装一级菌种培养基8ml，并在第一组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第二组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第三组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，得到三组9种不同浓度的含硒培养基。
(4)将步骤(1)中的3种候选凤尾菇菌种分别接种到步骤(3)三组9种不同浓度的含硒培养基中：即将第一种候选凤尾菇菌种分别接种至第一组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第二种候选凤尾菇菌种分别接种至第二组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第三种候选凤尾菇菌种分别接种至第三组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，保持温度20-28℃，湿度60-70％，ph6-7，培养7天。
(5)观察步骤(4)中候选凤尾菇菌种在不同浓度的含硒培养基中的生长情况，选择菌丝生长旺盛健壮、生长速度快的作为一级菌种，这里所述的生长速度快是指7-10天菌丝长满斜面，比如在第二组120ppm含硒培养基中的第二种候选凤尾菇菌种生长情况最优良，则选择第二种候选凤尾菇菌种作为一级菌种。
实施例五
按照如下步骤驯化筛选，获得富硒香菇一级菌种：
(1)选择抗逆性强、生长快、产量高的5个香菇菌种，作为候选香菇菌种。
(2)制作一级菌种培养基；一级菌种培养基为pda培养基，每1000mlpda培养基中包括如下重量比的原料组分：去皮土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾1.5g、磷酸氢二钾1.5g、硫酸镁3g、维生素b110mg、琼脂20g，其余为水。
(3)准备45根试管，按9根试管每组分为五组即第一组、第二组、第三组、第四组和第五组，分别在第一组、第二组、第三组、第四组和第五组试管内分装一级菌种培养基8ml，并在第一组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第二组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第三组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第四组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第五组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，得到五组9种不同浓度的含硒培养基。
(4)将步骤(1)中的5种候选香菇菌种分别接种到步骤(3)五组9种不同浓度的含硒培养基中：即将第一种候选香菇菌种分别接种至第一组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第二种候选香菇菌种分别接种至第二组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第三种候选香菇菌种分别接种至第三组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第四种候选香菇菌种分别接种至第四组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第五种候选香菇菌种分别接种至第五组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，保持温度20-28℃，湿度60-70％，ph6-7，培养7天。
(5)观察步骤(4)中候选香菇菌种在不同浓度的含硒培养基中的生长情况，选择菌丝生长旺盛健壮、生长速度快的作为一级菌种，这里所述的生长速度快是指7-10天菌丝长满斜面，比如在第一组150ppm含硒培养基中的第一种候选香菇菌种生长情况最优良，则选择第一种候选香菇菌种作为一级菌种。
实施例六
按照如下步骤驯化筛选，获得富硒金针菇一级菌种：
(1)选择抗逆性强、生长快、产量高的4个金针菇菌种，作为候选金针菇菌种。
(2)制作一级菌种培养基；一级菌种培养基为pda培养基，每1000mlpda培养基中包括如下重量比的原料组分：去皮土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾1.5g、磷酸氢二钾1.5g、硫酸镁3g、维生素b110mg、琼脂20g，其余为水。
(3)准备36根试管，按9根试管每组分为四组即第一组、第二组、第三组和第四组，分别在第一组、第二组、第三组和第四组试管内分装一级菌种培养基8ml，并在第一组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第二组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第三组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第四组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，得到四组9种不同浓度的含硒培养基。
(4)将步骤(1)中的4种候选金针菇菌种分别接种到步骤(3)四组9种不同浓度的含硒培养基中：即将第一种候选金针菇菌种分别接种至第一组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第二种候选金针菇菌种分别接种至第二组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第三种候选金针菇菌种分别接种至第三组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第四种候选金针菇菌种分别接种至第四组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，保持温度20-28℃，湿度60-70％，ph6-7，培养7天。
(5)观察步骤(4)中候选金针菇菌种在不同浓度的含硒培养基中的生长情况，选择菌丝生长旺盛健壮、生长速度快的作为一级菌种，这里所述的生长速度快是指7-10天菌丝长满斜面，比如在第三组180ppm含硒培养基中的第三种候选金针菇菌种生长情况最优良，则选择第三种候选金针菇菌种作为一级菌种。
实施例七
按照如下步骤驯化筛选，获得富硒灵芝一级菌种：
(1)选择抗逆性强、生长快、产量高的3个灵芝菌种，作为候选灵芝菌种。
(2)制作一级菌种培养基；一级菌种培养基为pda培养基，每1000mlpda培养基中包括如下重量比的原料组分：去皮土豆200g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾1.5g、磷酸氢二钾1.5g、硫酸镁3g、维生素b110mg、琼脂20g，其余为水。
(3)准备27根试管，按9根试管每组分为三组即第一组、第二组和第三组，分别在第一组、第二组和第三组试管内分装一级菌种培养基8ml，并在第一组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第二组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，在第三组每根试管内分别添加30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液，得到三组9种不同浓度的含硒培养基。
(4)将步骤(1)中的3种候选灵芝菌种分别接种到步骤(3)三组9种不同浓度的含硒培养基中：即将第一种候选灵芝菌种分别接种至第一组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第二种候选灵芝菌种分别接种至第二组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，将第三种候选灵芝菌种分别接种至第三组含30ppm、60ppm、90ppm、120ppm、150ppm、180ppm、210ppm、240ppm、270ppm的亚硒酸钠溶液的含硒培养基中，保持温度20-28℃，湿度60-70％，ph6-7，培养7天。
(5)观察步骤(4)中候选灵芝菌种在不同浓度的含硒培养基中的生长情况，选择菌丝生长旺盛健壮、生长速度快的作为一级菌种，这里所述的生长速度快是指7-10天菌丝长满斜面，比如在第二组210ppm含硒培养基中的第二种候选灵芝菌种生长情况最优良，则选择第二种候选灵芝菌种作为一级菌种。
本发明采用驯化筛选富硒能力强的一级菌种的培育方法，将富硒蕈菌有机硒含量从0.1ppm提升至100-500ppm，产量约为现有产品的1000-5000倍。采用这种方式获得的富硒蕈菌有机硒含量占总含硒量的90％以上，氨基酸含量也随之显著提高。本发明能够大力提高蕈菌中的有机硒含量，减少无机硒，提高生产效率，避免毒副反应，保障人体健康。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。